醒脾開(kāi)郁方對(duì)抑郁癥大鼠模型海馬及皮層單胺類遞質(zhì)的影響

抑郁屬于中醫(yī)學(xué)的“抑郁綜合征”范疇。臨床表現(xiàn)以抑郁、抑郁和抑郁為主，通常伴有氣虛血瘀、少動(dòng)、胸悶和食欲減退等癥狀。作者從氣濕的表面運(yùn)動(dòng)和胸悶的開(kāi)放平衡中出發(fā)，根據(jù)不改變金正氣散的不同角度，形成相應(yīng)的處方，包括香附、香附、香味、白竺等藥物，臨床效果明顯。本實(shí)驗(yàn)采用分養(yǎng)與慢性應(yīng)激相結(jié)合的方法建立經(jīng)典動(dòng)物抑郁模型,研究醒脾開(kāi)郁方對(duì)大鼠抑郁模型的中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響,以探討其抗抑郁的機(jī)制。1實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物健康SD雄性大鼠,180～200g購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。1.2離子檢測(cè)試劑醒脾開(kāi)郁方藥材購(gòu)于北京同仁堂藥店,由中日友好醫(yī)院中藥制劑室制作,并提取揮發(fā)油,按比例兌入湯劑中。鹽酸氟西汀,常州華生制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)80703010,將其用蒸餾水溶解為懸浮液。去甲腎上腺素(NE),為Serva公司生產(chǎn);多巴胺(DA)、腎上腺素(E)、5-羥色胺(5-HT)、5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)、海馬3,4二羥基苯乙酸(DOPAC)及內(nèi)標(biāo)物3,4-二羥芐胺(DHBA)為Sigma公司產(chǎn)品;二正丁胺為上海化學(xué)試劑采購(gòu)站進(jìn)口分裝;B-8離子對(duì)試劑為天津化學(xué)試劑二廠生產(chǎn),甲醇為北京化工廠產(chǎn)品;其余為國(guó)產(chǎn)分析醇。1.3色譜中心條件Waters510泵,M464電化學(xué)檢測(cè)器,DL-800色譜工作站(大連化物所色譜中心);Open-Field觀察箱(自制);THZ-95型臺(tái)式衡恒溫振蕩培養(yǎng)箱,由軍事科學(xué)院實(shí)驗(yàn)儀器廠研制。2實(shí)驗(yàn)方法2.1刺激刺激試驗(yàn)用Open-Field法作行為學(xué)評(píng)定,選擇得分相近的大鼠50只隨機(jī)分為5組,即正常組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、鹽酸氟西汀組。正常組大鼠每籠5只飼養(yǎng),不給予任何刺激。其他4組為造模組,根據(jù)文獻(xiàn)均單籠飼養(yǎng),先給予21d不同刺激,包括冰水游泳(4℃,5min),熱刺激(45℃,5min),搖晃(頻率160次/min,3min),夾尾1min,禁水24h,禁食24h,晝夜顛倒,平均每種刺激給予3次,21d造模成功后,藥物組及模型組開(kāi)始灌服同等體積藥物及生理鹽水,共28d,并每隔2d再接受1次不同應(yīng)激刺激,刺激方式及程度與造模時(shí)相同,直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。2.2藥/學(xué)法10.7g/l給予21d刺激后,中藥高劑量組灌胃給予醒脾開(kāi)郁方,濃度為15mL/kg(含生藥15.7g/kg);中藥低劑量組,濃度為15mL/kg(含生藥7.8g/kg),西藥組給予鹽酸氟西汀,配制濃度為15mL/kg(生藥1.8mg/kg),模型組給予生理鹽水15mL/kg。共灌胃28d,灌胃過(guò)程中大鼠死亡6只。2.3液氮中冷凍液氮的投入量連續(xù)灌胃28d后,將大鼠用1%戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔麻醉后斷頭處死,取腦置于冰袋上,迅速分離海馬及皮層,稱重后,立即投入液氮中冷凍,后放入-80℃儲(chǔ)存。加0.1mol/L過(guò)氯酸(內(nèi)含0.3mmol/LNa2EDTA、0.5mmol/LNa2SO3)950μL,2mg/LDHBA50μL,超聲波勻漿,11000r/min高速離心,10min,取上清液10μL進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行計(jì)算。2.4統(tǒng)計(jì)處理使用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析,結(jié)果用(xˉ±s)(xˉ±s)表示。3結(jié)果3.1各組單胺神經(jīng)傳遞質(zhì)的變化結(jié)果見(jiàn)表1。3.2各組單胺神經(jīng)傳遞質(zhì)的變化結(jié)果見(jiàn)表2。3.3各組單胺神經(jīng)傳遞物質(zhì)含量的變化結(jié)果見(jiàn)表3。4抑郁癥患者中神經(jīng)遞質(zhì)代謝的動(dòng)態(tài)變化及其關(guān)系采用分養(yǎng)與慢性不可預(yù)見(jiàn)的中等強(qiáng)度應(yīng)激造成的大鼠模型,表現(xiàn)為興趣喪失、快感缺乏、自發(fā)活動(dòng)減少等,與臨床抑郁癥相類似,因此是目前實(shí)驗(yàn)研究中最為常用的抑郁模型。抑郁癥的發(fā)病機(jī)制仍處于假說(shuō)階段,比較公認(rèn)的中樞單胺遞質(zhì)減少假說(shuō)認(rèn)為,抑郁癥的發(fā)生與突觸間隙中的中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、NE水平的降低有關(guān),臨床采用選擇性5-HT重吸收抑制劑(SSRIs)或NE重吸收抑制劑均可緩解臨床抑郁癥狀。但這并不能全面地解釋抑郁癥的機(jī)制,許多研究證明抑郁的發(fā)生可能與5-HT、NE、DA之間的失衡關(guān)系更為密切,抑郁癥的發(fā)生與海馬關(guān)系密切,海馬是介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)的最重要的腦區(qū)之一,既能調(diào)節(jié)應(yīng)激反應(yīng),又受到應(yīng)激反應(yīng)的影響,慢性的應(yīng)激可引起海馬結(jié)構(gòu)及功能的損害,最終導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生。抑郁癥患者多見(jiàn)憂郁寡言、少動(dòng)、思維及行動(dòng)遲緩等臨床表現(xiàn),符合氣郁濕滯的病機(jī)特點(diǎn),運(yùn)用醒脾開(kāi)郁方以芳香燥濕醒脾,從而使?jié)窕鴼庑?情志之郁滯亦可隨之而消,使情志暢達(dá)。本實(shí)驗(yàn)選擇了海馬與皮層的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)為觀察指標(biāo),研究醒脾開(kāi)郁方抗抑郁的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示慢性應(yīng)激刺激與分養(yǎng)可以明顯降低大鼠海馬及皮層5-HT、海馬DA含量,并使DA、NE的代謝產(chǎn)物DOPAC、HVA明顯升高,模型組海馬5-HIAA/5-HT、DOPAC/DA及皮層5-HIAA/5-HT明顯升高,皮層及海馬5-HT/NE低于正常組,說(shuō)明模型組大鼠一方面存在遞質(zhì)含量的不足,另一方面皮層及海馬的5-HT及DA代謝增強(qiáng),降低了5-HT、DA能神經(jīng)活性,5-HT與NE的失衡也是導(dǎo)致抑郁的原因之一。醒脾開(kāi)郁方可明顯提高遞質(zhì)含量并糾正遞質(zhì)代謝的紊亂,使遞質(zhì)間關(guān)系趨于平衡。抑郁癥的發(fā)生機(jī)理十分復(fù)雜,與中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)關(guān)系密切,而NE能神經(jīng)元、5-HT能神經(jīng)元及DA神經(jīng)元之間相互聯(lián)系、相互影響,抑郁癥的發(fā)生并非僅僅限于某一類遞質(zhì)含量的降