資料與方法1.1材料選取鳳陽地區野生魚腥草幼苗作為研究對象，選取時，選擇生長狀態相同、未受到病蟲侵害的魚腥草幼苗。1.2方法1.2.1水培方法選取6種營養液分別進行培養的魚腥草作為營養研究組，選取運用蒸餾水培養的魚腥草作為空白常規組，累計7種培養方式。將選取的魚腥草幼苗根部清洗干凈后，將其放置在0.1%高錳酸鉀內20分鐘。然后將幼苗以每組30株為一組，分別隨機選擇相應的培養方式，反復3次進行處理。馴服期間3天，運用蒸餾水作為培養液；正常期間對其使用完全營養液進行處理，每周調換1次培養方式，培養28天后采集樣本進行研究。其中選擇的6種培養液配置方案分別為：國內農業研究機構配置方案、觀葉植物通用配置方案、霍格蘭配置方案、日本園試配置方案、斯特納配置方案、休伊特配置方案[11]，添加每升含26.8毫升的乙二胺四乙酸鐵、每升含2.85毫升的硼酸、每升含2.14毫升的硫酸鎂四水、每升含0.23毫升的硫酸鋅七水、每升含0.09毫升的硫酸銅五水以及每升含0.02毫升的鉬酸銨四水。附表1。表1營養液配置方案Table1nutrientsolutionconfigurationscheme營養液配置方案化合物成分（mg/L）其他鹽類總計（mg/L）硝酸鈣四水硝酸鉀磷酸二氫鉀硫酸鎂七水國內農業研究機構配置方案[11]613.6280.0136.0153.1硝酸銨120.01479硫酸鉀31.3氯化鈉11.7觀葉植物通用配置方案[11]495.6202.0136.0246.0硝酸銨40.01205.6硫酸鈣二水86.0霍格蘭配置方案[11]1180.0505.0136.0494.0-2315日本園試配置方案[11]944.0808.0-494.0磷酸二氫銨153.02399斯特納配置方案[11]738.0303.0136.0240.0硫酸鉀261.01678休伊特配置方案[11]1180.0505.0-370.5磷酸二氫鈉二水207.52216通用微量元素乙二胺四乙酸鐵26.8硼酸2.85硫酸鎂四水2.14硫酸鋅七水0.23硫酸銅五水0.09鉬酸銨四水0.021.2.2研究指標檢測實驗完成時采集魚腥草標本，對其生理水平進行檢測，其能夠含有的可溶性糖量運用蒽酮比色方式進行對比[12]，對其含有的葉綠素數量檢測，使用80%丙酮進行采集，運用分光光度法進行分析[12]。該法是使用專業的分光光度設備，對于收集到的標本運用波長不同的光進行不間斷照射，獲得波長對應的魚腥草吸收能力，計算出光譜吸取曲線。通過求得的曲線可以對于魚腥草的物質特性及含量進行確定的研究方式。1.3魚腥草多長的提取、純化1.3.1魚腥草多糖的提取將魚腥草葉片放置在60℃的環境下烘干到恒定重量，粉碎超過40目篩，乙醚應用量按照料液的1：80比例進行使用，待其回流后提高熱度，加速脫脂情況，添加25倍左右的50℃的水進行攪拌收集3小時，提取2次左右后，對其進行過濾，將濾液進行結合，在真空環境下壓縮到原本體積的五分之一，將70%乙醇沉積，在4000rpm離心30分鐘，將其冷卻，得到干燥效果，應用Sevage試劑后，將蛋白進行分離，應用過氧化氫進行色度分離，待到其顏色變為淡黃色時，對其進行冷卻干燥處理后，即可獲得魚腥草多糖粗糙成品。粗糙提取率=粗糙提取干燥后獲得的總糖/干燥后提取原本材料。1.3.2魚腥草多糖的純化選取30毫升魚腥草多糖粗糙成品，使用5毫升蒸餾水對其進行溶解，經專業柱層分析，使用每升含有0.1摩爾的氯化鈉溶液對其沖洗脫離，流動速度設置在每分鐘0.1毫升，每個試管內采集3毫升，使用苯酚-硫酸法進行其吸光指數。1.4魚腥草可溶性糖體外抗氧化活性研究1.4.1DPPH法自由基清除研究使用DPPH法對魚腥草體內自由基進行清除，向可溶性糖溶液試管內滴入1毫升0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.80mg/mL、1.6mg/mL濃度的可溶性糖溶液及2毫升DPPH乙醇液體，在38℃的器皿內避光30分鐘。檢測517納米下吸光程度數值，常規組使用乙醇溶液。研究組自由基清除效果（%）=[常規組吸光指標-研究組吸光指標/常規組吸光指標]×100%。使用抗壞血酸作為陽性指標參照。1.4.2螯合能力研究基于以往學者研究方法的基礎上進行略微改善進行此次螯合能力研究。向試管內滴加濃度不同的可溶性糖溶液、100微升六水三氯化鐵試劑及2.6毫升蒸餾水，使其混合勻稱后，在室內溫度下放置5分鐘，添加300微升菲啰嗪。室內溫度下反應10分鐘，放置在562納米下檢測吸光指標，常規組使用蒸餾水溶液。研究組螯合能力（%）=[(常規組吸光指標-研究組吸光指標)/常規組吸光指標]×100%。使用乙二胺四乙酸作為陽性指標參照。1.5統計學方式運用SPSS17.0軟件對于獲取的標本數據進行處理，顯著性對比使用最小顯著性差異法；使用Excel軟件對于數據進行匯總研究，全體數據使用3次檢測的平均數值；運用Qrigin8.0軟件對于數據進行擬合及圖形化處理。2結果與分析2.1不同營養液對魚腥草鮮重的影響為研究魚腥草能否通過水培環境內進行生長，此次研究使用生長狀態相同的魚腥草幼苗作為研究目標，對運用不同營養液配置方案的魚腥草幼苗，在水培環境內進行采集后即刻檢測出的重量影響。魚腥草幼苗在水培環境內生長28后，大多數幼苗生長狀態良好，其中觀葉植物通用配置方案、霍格蘭配置方案、日本園試配置方案、斯特納配置方案的植株成長表現較為優異[11]，出現較多新生葉片；只有休伊特配置方案的魚腥草出現部分植株成長不良，發育出現減緩。新鮮植株重量能夠表示其生長綜合情況，植株重量越高，證明植物成長狀態月良好，其株體更強壯。根據新鮮魚腥草重量上升水平，能夠得出相應營養液配置方式的對其成長狀態的作用，觀葉植物通用配置方案、霍格蘭配置方案、日本園試配置方案、斯特納配置方案營養液能夠明顯改善植株的長勢情況，國內農業研究機構配置方、休伊特配置方案營養液對于新鮮植株重量上升情況產生阻抑效果。通過顯著性研究發現，所有配置方案對于新鮮魚腥草重量提升情況全部沒有明顯差別。根據成長標準顯示，運用水培方式能夠對魚腥草進行產生培養效果，但是所有配置方案產生的作用基本沒有發生差別。附表2。表2植株重量增加情況Table2Increaseinplantweight營養液配置方案新鮮植株重量增加情況（g）蒸餾水0.0855a國內農業研究機構配置方案0.0755a觀葉植物通用配置方案0.1025a霍格蘭配置方案0.1328a日本園試配置方案0.1952a斯特納配置方案0.0962a休伊特配置方案0.0292a注：相同字母代表差別不存在明顯差別（P＜0.05），差別具有統計學意義。2.2不同營養液對魚腥草內含有可溶性糖數量的作用在植株的成長發展及基因顯示中糖因子具有關鍵作用，其不但屬于能量源頭，能夠促進植株結構的完善，并且其在信息傳遞時可以起到初級信號傳遞的效果[13]。溶解性質的糖在植株質量構成中具有重要作用，其主要包含葡萄糖、果糖及蔗糖等[14]。此次研究對于使用不同營養液配置方案的魚腥草，其含糖量情況進行分析，結果顯示，可溶性糖含有量最多的是使用霍格蘭配置方案的魚腥草，并且與采用蒸餾水的常規組對比，糖含量差距更加明顯；運用其余配置方案魚腥草糖含量亦全部優于常規組，并且差距全部較為明顯。表明使用6種培養液配置方案全部能夠明顯提高魚腥草體內具有溶解效果的糖含量，提升植株質量，尤其是運用配置方案3的植株效果更加明顯。附表3。表3植株可溶性糖含量情況Table3Plantsolublesugarcontent營養液配置方案可溶性糖含量（%）霍格蘭配置方案3.78a觀葉植物通用配置方案2.43b日本園試配置方案2.27bc國內農業研究機構配置方案1.95bc休伊特配置方案1.57bc斯特納配置方案1.44bc蒸餾水1.34c注：不同字母代表差別存在明顯差別（P＜0.05）。2.3不同營養液對于魚腥草葉綠素含量的作用植株葉片內含有葉綠素數量是判定植物葉片的光合效果的關鍵因素，葉片內含有葉綠素含量的提升能夠促進其光合效果，進而提高植株質量[15]。對于接受相應配置方案的魚腥草體內葉綠素數量研究發現，霍格蘭配置方案、休伊特配置方案號配置方案的魚腥草體內含有葉綠素a數量、葉綠素b數量全部明顯優于常規組；國內農業研究機構配置方案、日本園試配置方案及斯特納配置方案的魚腥草體內含有葉綠素a數量、葉綠素b數量全部跟常規組相等；觀葉植物通用配置方案的葉綠素數量b數量明顯低于常規組，根據葉綠素相關標準能夠得出，霍格蘭配置方案、休伊特配置方案能夠對魚腥草的長勢起到良好的促進效果。附表4。表4植株含有葉綠素數量Table4Plantscontainchlorophyllquantity營養液配置方案葉綠素含量葉綠素a葉綠素b葉綠素(a+b)葉綠素a/葉綠素b霍格蘭配置方案1.26a0.76a2.02a1.71休伊特配置方案1.01ab0.60ab1.61ab1.67斯特納配置方案0.84b0.49bc1.33bc1.75蒸餾水0.79bc0.52bc1.31bc1.50國內農業研究機構配置方案0.57bc0.45bc1.02cd1.33日本園試配置方案0.66bc0.38cd1.04cd1.60觀葉植物通用配置方案0.37c0.24d0.62d1.54注：不同字母代表差別存在明顯差別（P＜0.05），差別具有統計學意義。2.4魚腥草葉片多糖提出純化結果將獲取粗糙魚腥草多糖成品經過專業柱層分析[16]，使用每升含有0.1摩爾的氯化鈉液體，在每分鐘0.1毫升流動速度進行對其沖洗，沖洗完成后進行收集，每試管收集3毫升，使用苯酚-硫酸方式對吸光指標進行檢測，附圖1。根據圖1可知，洗脫后發現3個顯著且幾乎對稱的峰值，表明魚腥草多糖基本是由3種可溶性糖構成。采集糖效果陽性峰值，使用蒸餾水洗脫1天，當其出現壓縮沉積后，放置在真空環境下冷卻，使其干燥后，便可獲得魚腥草多糖，回收率達到65%。通過相關純化操作后的魚腥草多糖，使用高效液相色譜方式對其純度進行判定，高效液相色譜方式洗脫曲線表現為單一對稱峰，魚腥草多糖屬于均一多糖。圖1Toyopearl柱層析洗脫曲線Figure1Toyopearlcolumnchromatographyelutioncurve2.5魚腥草多糖體外抗氧化活性研究2.5.1DPPH自由基清除研究結果魚腥草多糖自由基清除效果跟抗氧化藥物的氫氣供氧能力具有密切關聯[17]，根據圖片可以得出，當魚腥草葉多糖在每毫升含量在0.1毫克-1.6毫克時，DPPH具有明顯的清除效果，并且清除效果隨著多糖濃度的上升而提高，魚腥草葉多糖洗脫保存時間在9分鐘左右時DPPH的清除能力最低，并且當濃度上升使DPPH清除效果會較小增加；當其保存時間在8.5分鐘左右時，DPPH清除效果隨著濃度的上升而上升；當其保存時間在7.5分鐘時，DPPH清除效果最顯著，與濃度呈正相關，其清除效果從高至低依次是保留時間7.5分鐘時、保留時間8.5分鐘時、保留時間9分鐘。因此猜測在某種意義上，多糖對于DPPH的清除效果，或許與多糖分子數量存在緊密聯系。圖2魚腥草葉多糖對于DPPH的清除效果Fig.2EffectofpolysaccharidesfromHouttuyniacordataL.onDPPH2.5.2鰲合能力實驗抗氧化物質抗氧化活性評價過程中常以測定Fe2+螯合能力作為參考指標[18]。觀察圖3得出，3種多糖均在一定程度上對Fe2+具有鰲合能力。多糖對Fe2+的鰲合能力在每毫升質量濃度滿足為0.0125-1.6毫克時，與質量濃度呈正向相關，并且按保存時間7.5分鐘左右、保存時間8.5分鐘左右、保存時間9.0分鐘左右順序遞減。而且，當質量濃度為滿足每毫升0.0125-0.8毫克時，Fe2+的鰲合能力與保存時間7.5分鐘左右、保存時間9.0分鐘左右質量濃度呈正向相關，濃度越大，能力增加越顯著；當濃度超過每毫升0.8毫克時，多糖對Fe2+的鰲合能力隨濃度上升未發生明顯改變，穩定性大大提高。多糖對Fe2+的鰲合能力在保存時間8.5分鐘左右，滿足每毫升濃度在0.0125-1.6毫克時，能力大小隨著濃度的改變而相應改變，濃度越大，螯合能力越高。當每毫升濃度滿足0.4毫克時保存時間7.5分鐘左右時，對Fe2+的鰲合能力接近EDTA對Fe2+的鰲合能力，在保存時間7.5分鐘左右時，對Fe2+鰲合能力在每毫升濃度超過0.4毫克條件下高于EDTA。圖3魚腥草多糖對Fe2+的螯合能力Fig.3ChelatingabilityofHouttuyniacordatapolysaccharidestoFe2+3討論魚腥草性質偏寒，微甜，在緩解發熱癥狀，提高機體毒素排出率、促進排尿、等方面具有重要作用[19]。植物從發育到成熟期間，其機體中存在的可溶性糖數量能夠便是該植物光合功能如何。檢測植物體內可溶性糖含量，對于植物營養的分析與探討具有重要意義[20]。可溶性糖屬于植物通過光合作用產生的初級物質，植物可以通過可溶性糖產生淀粉、蛋白質等化合物[21]。所以，通過檢測植物體內含有的糖數量，能夠探索出植株在各個時間階段身體中碳氮代謝情況。此次研究使用可溶性糖含量作為判定標準，通過研究發現各類營養液研究組植株與蒸餾水常規組植株對比糖含量全部具有明顯的提升，尤其是使用霍格蘭配置方案的魚腥草效果最為顯著。葉片屬于植株發生光合作用的關鍵部位，而葉綠素則是光合效果的主要細胞組織。植株葉片內含有的葉綠素數量，不但可以決定葉片對于陽光的吸取能力，而且亦能對植株葉片光合作用的效果造成影響[22]。艾紹英等[23]學者表示，由于氮肥使用數量的提升，大青菜體內含有的葉綠素數量能夠顯著上升。此次研究顯示，營養液配置方案跟植株內含有的葉綠素數量具有緊密聯系，尤其是使用霍格蘭配置方案的魚腥草體內含有的葉綠素數量最高，與使用蒸餾水的常規組魚腥草對比，其指標具有明顯差別。金玲等[24]學者表示，當植株體內存在數量較多的葉綠素時，則產生的光合效果越顯著，光合作用產生的初級物質-還原糖的含量亦會隨之提升，該學者的結論與此次研究結論相符，運用霍格蘭配置方案的魚腥草，其體內存在的可溶性糖含量、葉綠素數量全部屬于各項配置方案最多。余宏軍[25]等學者表示，基本肥料施用過度能夠減少魚腥草體內可溶性糖的整體數量，此次研究發現運用日本園試配置方案的魚腥草體內含有的鹽類數量最多，但是其糖含有量較少，證明含有鹽類成分上升，能夠溶解的糖數量減少，此次研究跟余宏軍等學者的發現所相符。此外揮發油、生物堿、黃酮、多糖等化學成分均是魚腥草中的重要組成部分[26]。國內某相關學者針對揮發油成分的氣相色譜指紋圖譜進行研究，研究數據可作為能夠進行質量控制的可靠依據。先利用蒸餾法對揮發油進行提取。提取時使用TRACE氣相色譜儀進行。分別選取來自12個產地的魚腥草，對其進行詳細分析后完成魚腥草揮發油氣相色譜指紋圖譜的建立工作[27]。國內某學者為提高魚腥草抑菌有效成分醇提條件，利用正交實驗法進行測定，將大腸埃希菌抑制效果作為測量指標，魚腥草醇提液進行分級分離處理，鑒定有效抑菌部位的成分，測定方法為GC-MS、HPLC，初步分析確定抑菌效果[28]。李利華針對總黃酮在魚腥草中的含量以及相應的抗氧化性進行檢測、研究。樊宏偉等研究人員以腫瘤細胞發育過程中魚腥草黃酮提取物的具體抑制效果作為主要方向，研究結果顯示腫瘤細胞HL60、B16腫瘤細胞發育過程中魚腥草黃酮提取物具有明顯的抑制作用，對促進凋亡進程具有誘導效果，可充分證實魚腥草在一定程度上具有抗腫瘤效應[29]。國內有學者針對提取血腥草多糖的過程中使用超聲輔助的應用價值進行研究，方法利用響應面法，張倩等某些研究人員通過利用薄層層析法鑒定魚腥草水溶性多糖水平，表示半乳糖、葡萄糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、鼠李糖等均是組成糖的重要成分[30]。此外，成分中出現1種未知五碳糖。吳紅淼等從魚腥草抗菌效果進行研究，證實大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等菌種增殖、分化過程中魚腥草多糖提取物具有明顯的抑制作用。多糖作為生物體構成成分中的重要有機化合物，多糖作為物質基礎，在各種生理機制中均存在一定影響[31]。隨研究技術不斷更新，針對蛋白質、核酸的研究層次也不斷深入，近幾年部分學者以分子生物學、生物膜化學功能進行了大量研究，由于糖類在各類細胞組織活動中的作用機制不斷被挖掘，使大分子類多糖及其復合物受到相關領域的高度重視，逐漸打破多糖作僅僅是機體能量來源以及維持組織功能的傳統思想[32]。現階段，通過提取菌類、海洋生物及植物獲取的多糖，研究分析發現，多糖屬于天然產物之一，具有活性高、毒性低等特點，與多糖相關的一系列問題成為生物醫藥人員的重點。但因復雜的結構、相關分析方式選擇范圍較小等原因，導致對多糖生物多樣性具體的作用機制暫未獲取可靠依據，使多糖學者進行相關研究的困難增加，但也為多糖發展提供新的機會。通過研究發現各類營養液研究組植株與蒸餾水常規組植株對比糖含量全部具有明顯的提升，且體內含有的葉綠素數量以明顯上升，尤其是使用霍格蘭配置方案的魚腥草效果最為顯著。此外，使用該配置方案的魚腥草，新鮮植物重量雖然沒有較為明顯的差距，但是其增加的重量屬于所有方式最高值。日本園試配置方案的魚腥草體內含有的鹽類數量最多，但是其糖含有量較少，證明含有鹽類成分上升，能夠溶解的糖數量減少。使用霍格蘭配置方案能夠顯著提升魚腥草的質量，其體內含有的葉綠素數量、還原糖數量全部具有較高的提升，屬于水培魚腥草的優質營養液配置方案。參考文獻伍鈞,唐亞,李錚錚,楊剛.HYPERLINK"/kcms/detail/detail.aspx?filename=YJGX201102002&dbcode=CJFQ&dbname=CJFD2011&v="\t"kcmstarget"魚腥草耐鉛、鋅毒性和修復能力的研究[J].應用基礎與工程科學學報.2017(02)16-177YasunakaK，AbeF，NagayamaA，etal．AntibacterialactivitofcrudeextractsfromMexicanmedicinalplantsandpuredcoumarinsandxanthones．JEthnopharmacol，2016，97:293-299．AmooSO，NdhlalaAR，FinnieJF，etal．Antibacterial，anti-fungalandanti-inflammatorypropertiesofBurchelliabubali-na．SAfrJBotany，2017，75:60-63．[4]林瑞余,林豪森,柯玉琴,彭春華,梁康逕,魏道智,張重義,林文雄.中國農學通報.HYPERLINK"/kcms/detail/detail.aspx?filename=ZNTB200612085&dbcode=CJFQ&dbname=cjfd2006&v="\t"kcmstarget"不同施肥方式對魚腥草生長發育及產量的影響[J].中國農學通報.2016(12)38-88[5].趙江濤,李曉峰,李航,徐睿忞.安徽農業科學.HYPERLINK"/kcms/detail/detail.aspx?filename=AHNY200624014&dbcode=CJFQ&dbname=cjfd2006&v="\t"kcmstarget"可溶性糖在高等植物代謝調節中的生理作用[J]2016(24)23-53[6]姚秋萍,羅明高,潘大托.江蘇農業科學HYPERLINK"/kcms/detail/detail.aspx?filename=JSNY201410085&dbcode=CJFQ&dbname=CJFD2014&v="\t"kcmstarget"響應面法優化超聲輔助提取魚腥草多糖的工藝[J]..2016(10)43-76[7]吳紅淼,王曉鵬,王磊,項陽,石久.中國野生植物資源.不同營養液對魚腥草中可溶性多糖含量的影響[J].2016(05)557-576[8]杜向群,陳敏燕,許穎.江西中醫藥.HYPERLINK"/kcms/detail/detail.aspx?filename=JXZY201202034&dbcode=CJFQ&dbname=CJFD2012&v="\t"kcmstarget"魚腥草成分、藥理的研究進展[J].2016(02)783-872[9]魏練平,李明江,張素林,馮明潔,唐磊,蔣立科.中國微生態學雜志.HYPERLINK"/kcms/detail/detail.aspx?filename=ZGWS201106027&dbcode=CJFQ&dbname=CJFD2011&v="\t"kcmstarget"魚腥草抑菌有效成分的醇提、鑒定及抑菌效果研究[J]2017(06)263-276[10]葛林梅,郜海燕,陳杭君,毛金林,陳文烜,陶菲,房祥軍.中國糧油學報.HYPERLINK"/kcms/detail/detail.aspx?filename=ZLYX201105013&dbcode=CJFQ&dbname=CJFD2011&v="\t"kcmstarget"加工工藝對香榧油脂氧化和抗氧化活性的影響[J].2017(05)23-65[11]張美玉,李貽奎,閆位娟,林成仁,金龍,張金艷,何萍,孫偉偉,郝偉,HYPERLINK"/kcms/detail/detail.aspx?filename=ZXYZ201009019&dbcode=CJFQ&dbname=CJFD2010&v="\t"kcmstarget"魚腥草注射液新制劑抗炎解熱作用及其機制研究[J].2018(12)37-87[12]HYPERLINK"/kcms/detail/detail.aspx?filename=SJES13011400052384&dbcode=SJES"\t"kcmstarget"Optimisationofextractionprocedureforblackfunguspolysaccharidesandeffectofthepolysaccharidesonbloodlipidandmyocardiumantioxidantenzymesactivities[J].MaJiangwei,QiaoZengyong,XiangXia.CarbohydratePolymers.2017(3)2-45[13]HYPERLINK"/kcms/detail/detail.aspx?filename=SJES13011300302116&dbcode=SJES"\t"kcmstarget"Water-solublepolysaccharideobtainedfromAcoruscalamusL.classicallyactivatesmacrophagesandstimulatesTh1response[J].N.V.Belska,A.M.Guriev,M.G.Danilets,E.S.Trophimova,E.G.Uchasova,A.A.Ligatcheva,M.V.Belousov,V.I.Agaphonov,V.G.Golovchenko,M.S.Yusubov,Y.P.Belsky.InternationalImmunopharmacology.2016(24)56-76[14]ChinesePharmacopoeiaCommission(國家藥典委員會)．PharmacopoeiaofthePeople＇sRepublicofChina(中華人民共和國藥典)．Beijing:ChinaMedicalSciencePress，2016．VolⅠ，11．[15]LiLH(李利華)．Studyonultrasonicextractionofpolysac-charidefromHouttuyniacordataThunb．AnhuiJSciAgric(安徽農業科學)，2016，38:2571-2573．[16]DuLP(杜麗平)，XiaoDG(肖冬光)．Presentsituationandprospectforbioacti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