年級\專業\班級:實驗課時間:實驗室：組別：組員排名：

報告人：生化設計實驗

患兒，男性，3歲，因面色蒼白伴血尿1天入院。1天前食用新鮮蠶豆后，今日出現惡心、嘔吐、排尿呈醬油樣色，面色蒼白。據家長反映，患者的姐姐也曾發生過類似情況。體格檢查：體溫38℃，脈搏150次/分，呼吸40次/分，血壓80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色蒼白，皮膚及鞏膜黃染，體型較同齡人瘦小。心、肺未及異常，肝、脾未觸及，雙腎區無叩擊痛，神經系統檢查未及異常。

實驗室檢查：紅細胞1.98×1012/L，血紅蛋白53g/L，血清總膽紅素85.5μmol/L，結合膽紅素13.7μmol/L，未結合膽紅素71.8μmol/L，尿蛋白（++），潛血(+)，尿膽紅素(－)，尿膽素原(+)，尿液鏡下未見紅細胞。一、根據上述患兒的臨床表現和實驗室檢查，初步判斷患兒是何種疾病？

性別：男

、年齡3歲

主要癥狀：體溫38℃、面色蒼白、血尿1天、皮

膚及鞏膜黃染、惡心、嘔吐

誘因：一天前食用蠶豆

既往史：姐姐也曾出現過此癥狀

溶血性黃疸：由于紅細胞的大量破壞，使膽紅素產生過多，超過了肝細胞攝取結合的能力，使得尿中尿膽原和尿膽素含量增多。葡糖-6-磷酸脫氫酶缺乏，輸血不當均會引起病癥蠶豆?。浩咸?6-磷酸脫氫酶缺乏?；颊叽蠖嘣谑秤眯Q豆后發生急性溶血性貧血。典型病人常出現由于大量紅細胞破壞釋放出膽紅素二導致的溶血性黃疸，惡心嘔吐，尿液呈醬油樣等癥狀

二、設計實驗證明實驗思路：患者姐姐出現過此類狀況推測屬于家族性遺傳，且患者在食用蠶豆后出現癥狀，故即有可能為蠶豆病。6-磷酸葡萄糖脫氫酶缺乏影響高鐵血紅蛋白的還原，故可以依據如下反應機制設計實驗

亞硝酸鈉亞鐵血紅蛋白

高鐵血紅蛋白

高鐵血紅蛋白還原酶

NADPH(輔酶)

亞甲藍(遞氫體)一、實驗目的1、檢測患者體內6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性以及發病原因2、掌握高鐵血紅蛋白還原法測6-磷酸葡萄糖脫氫酶的實驗原理及方法3、了解蠶豆病的發病機制及原因二、實驗原理在全血中加入亞硝酸鈉，使紅細胞中的亞鐵血紅蛋白氧化為高鐵血紅蛋白（MHb）,高鐵血紅蛋白在高鐵血紅蛋白還原酶的作用下又被還原為亞鐵血紅蛋白。在這過程中，高鐵血紅蛋白還原酶不僅需要亞甲藍作為遞氫體，還需要由G6PD參與磷酸戊糖途徑形成NADPH作為輔酶才完成上述反應。所以，G6PD缺陷癥的患者其MHb還原率下降（分光光度技術）。三、實驗器材及試劑器材：離心機、分光光度計、微量移液器水浴箱、1.5mlEP管、抗凝管，試管試劑：①0.18mol/L亞硝酸鈉-葡萄糖溶液、②0.4mmol/L亞甲藍溶液、③0.28mol/L葡萄糖溶液、混合液（等量①+②+③）、生理鹽水、抗凝劑、患者靜脈血、蒸餾水四、實驗步驟1、取靜脈血1.8mL于抗凝管(含0.2mL109mmol/L抗凝劑+葡萄糖20mg），混勻2、離心沉淀1000r/min15min3、調整血細胞∶血漿=1∶1，混勻，（調整后全血）4、1ml

0.18mol/L亞硝酸鈉、1ml0.28mol/L葡萄糖溶液、0.14mmol/L亞甲基藍液，混勻，得到混合試劑1ml五、取試管3支,標上A、B、S,按下表加入試劑

高鐵血紅蛋白還原試驗操作步驟

試劑ABS混合試劑/mL0.01//生理鹽水/mL/0.01/0.18mol/L亞硝酸鈉-//0.010.28mol/L葡萄糖溶液/mL經調整的全血/mL0.10.10.1來回搖動15～20次,置37℃水浴箱靜置3h蒸餾水