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文檔簡介

自生固氮菌的分離純化一、目的要求：1、學習微生物純系分離、培養方法。2、掌握劃線分離純化微生物的方法。二、基本原理：為了生產和科學研究的需要，往往需要從自然界混雜的微生物群中分離單一的菌種，這種獲得單一菌株純培養的方法稱為微生物的分離。為了獲得某種微生物的純培養，可采用下列兩種方法：一種是提供有利于該微生物生長繁殖的最適培養基及培養條件。如要從土壤中分離自生固氮菌，則其培養基中是不能含有N源，這種培養基就比較適于能利用空氣中坷的微生物。另一種方法是在培養基中加入某種化學物質，以抑制人們所不需要的微生物的生長繁殖。分離土壤中真菌，往往在分離真菌的馬丁培養基中加入適當的孟加拉紅，鏈霉素和金霉素等化學藥品，目的在于抑制細菌生長，這樣更有利于獲得其純培養。土壤中微生物數量眾多，在肥沃土壤中固氮菌數量也很多，自然界中多數氮素養料是由微生物固氮的結果，固氮菌一般可分為自生固氮菌和共生固氮菌兩類。要分離自生固氮菌，常用阿斯畢無氮培養基這種選擇培養基，控制其適宜環境條件，使它在培養基上大量繁殖，然后通過稀釋法和劃線分離純化法，使它在培養基上形成單菌落，如分離

所得不純，需要進一步純化，直到得到純種.三、材料與儀器1、培養基：阿斯畢無氮培養基。2、菜園土。3、滅菌培養皿、鑷子、剪刀、接種針、酒精燈等四、方法與步驟（一）富集培養：1、 用已滅菌后冷卻至50oC左右的阿斯畢培養基倒成平板。2、 用已滅菌的鑷子將黃豆粒大的菜園土擺入已冷凝的平板培養基上。3、正面放置培養箱中培養，28oC培養3~4天后，在土粒周圍有混濁半透明的膠狀菌落出現，有的在后期會產生褐色的色素。（二）劃線分離純化:（下次實驗）1、用已溶化至50oC阿斯畢培養基倒入平板。2、用接種環挑取上述菌落少許，在冷凝平板上進行劃線分離，而后置28oC培養4天。劃線方法如圖（三）純化、鏡檢，得到純種培養1、平板上出現單菌落，按無菌操作移入阿斯畢培養基斜面試管中，28oC培養4天。2、鏡檢：將斜面菌株進行涂片、染色、鏡檢。如是粗短桿狀或球狀的單一形態的菌體細胞較大，常呈單個或“8字”排列，在細胞表面有較厚的莢膜者，即為自生固氮菌。如有雜菌，需要進一步劃線純化。3、將得到純化菌株，移接到另一阿斯畢培養基斜面管，28oC培養3~4天，即獲得純培養菌，可冷凍保存，備用。五、注意事項：（1） 在微生物分離、純化每一操作環節，要嚴格按照無菌操作進行。（2） 平板劃線

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