環境科學與工程學院實驗中心實驗題目細菌得分離純化與接種實驗實驗類別綜合實驗環境溫度:濕度:同儀器:無菌小試管8支、盛無菌水得錐形瓶1個、盛無菌基礎培養基得錐形瓶1環、煤氣燈、無菌培養皿10套試劑:無菌水、無菌基礎培養基、未知菌種、酵母菌、羽毛溶解菌、湖水三、實驗原理從混雜得微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物得過程稱為微生—培養(平板倒置)—挑菌落;平板劃線法步驟:倒平板(標記培養基名稱)－制備湖培養斜面:試管中加培養液(標記培養基名稱)—斜放試管制斜面-選取菌種—實驗原理問答題:答:因為在這三個濃度范圍內能盡量使樣品中得微生物分散開,使其成單個個體/答:第一,為了防止重力對菌落得生成產生影響;第二,為了防止培養基中得水分蒸3。微生物常用接種方式有哪些？進行微生物接種應該注意哪些方面？答:⑴劃線接種,涂布接種,穿刺接種,三點接種,澆混接種,液體接種,注射接種,活體⑵接種用具及培養基等均需滅菌處理,接種過程必須在煤氣燈旁進行,接種環、玻璃涂棒等器具要過火處理,把所要用到得器材與菌種培養基有序編號放置,操作時應避免已經滅菌處理得材料用具與周圍得物品得接觸,往培養基就是劃線或點菌時動作要輕以防把培養基劃破等、四、實驗步驟1、制備細菌稀釋液:?使用5ml移液管加4.5ml無菌水放入貼有10—3、10—4、0。5ml放入貼10－4標簽得小試管中,吸洗三次以混輕輕地撥出,瓶口保持對著火焰;另一人拿培養皿并將皿蓋在火焰附近打開一縫,迅速倒入培養基約15ml,加蓋后輕輕搖動培養皿,使培養基均勻分布在培養皿底3、湖水中微生物含量得測定:?分別從10－4、10-5、10—6土壤稀釋液中,用各自4、空氣、自來水中細菌含量得測定:在一個平板中,加入0.2ml得自來水,搖晃并涂布均勻,并做一組平行樣;打開一平將灼燒滅菌得接種環插入菌種管內,先接觸無菌苔生長得培養基上,待冷卻后再從斜面上刮取少許菌苔取出,接種環不能通過火焰,應在火焰旁迅速插入接種管。在棉塞、再重新仔細灼燒接種環后,放回原處,并塞緊棉塞。將接種管貼好標簽五、實驗注意事項六、思考題1、氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillusferrooxidans,廣泛存在于土壤、海水、淡水、垃圾、硫磺泉與沉積硫內,尤以金屬硫化礦與煤礦等酸性礦坑水(pH〈4)中最為常見、其化能自養,專性好氧,嗜酸,革蘭氏陰性,,主要利用利用CO2為碳源,并吸收氮、磷等無機營養來合成自身細胞。請思考其athen0mL,加入盛有100mL滅菌9K或Leathen液體培養基得250mL錐形瓶中,在30℃,120r/min得空氣浴恒溫搖床中培養,直至錐形瓶中得溶液變為紅棕色,一般需4天。反復幾次。然后采用固體培養基稀釋凸起狀小菌落(d≈1mm),將單獨小菌落挑起,每個小菌落分別接體培養基得小試管中,以棉球封口,培養條件同上,直到小試管得液體顏色也變成紅棕色、重復在液體培養基中擴大培養與在平板上反復分離,最后分離出優良菌具體方法二:取菌液1mL,用pH=2.5得稀硫酸按每次稀釋10倍,依次稀釋成-1—2,10—3,10-4,10—5,10-6濃度得稀釋液。吸取稀釋度為10－4,10-5,10-6稀釋樣各0。2mL,分別接種到三個事先準備好得滅菌9K瓊脂固體培養基,涂布均勻,正置于30℃恒溫培養箱中靜置培養,次日倒置繼續培養,直至固體培養基表面出現圓形凸起狀小菌落(d≈1mm),一般需兩周、將單獨小菌落挑起,每個小菌落分別接種到裝有5mL9K液體培養基得小試管中,以棉球封口,放在30℃搖床2、某果園業主想知道其果園土壤中得微生物數量,請幫助設計方案(詳細說明)、釋度得溶液,在基礎培養基上以平板涂布法培養后數菌落數,然后乘上稀釋倍數,答:液體石蠟保藏法(將滅菌液體