蛋白的檢測方法實驗中常用蛋白檢測方法WesternBlot免疫熒光ELISA免疫組化實驗中常用蛋白檢測方法WesternBlot原理：經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到PVDF膜上（以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變）。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色、化學發光或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。特點：組織、細胞來源均可；半定量實驗中常用蛋白檢測方法原理：抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究。特點：是融合了免疫學原理（抗原抗體特異性結合）和組織學技術（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來對組織（細胞）內抗原進行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細胞或組織，要在顯微鏡下觀察結果，可能出現膜陽性、質陽性和核陽性。免疫組化/免疫熒光實驗中常用蛋白檢測方法原理：酶聯免疫法，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。特點：免疫學原理和化學反應顯色，待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細胞或組織培養上清液，需將抗原或抗體結合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。ELISA實驗中常用蛋白檢測方法蛋白檢測方式免疫組化法Westernblot法ELISA試劑盒法相同點抗體-抗原結合反應不同點樣品類型組織或細胞組織或細胞血清、血漿、尿液、細胞或組織培養上清液分析方式定位、定性及定量的研究(主要是定位，定位敏感性遠遠高于Westernblot法)可以用于定性和半定量，定量較免疫組化法準確多用于定量分析，其靈敏度非常高觀察結果免疫組化圖（膜陽性、質陽性和核陽性）電泳圖（著色的位置和著色深度）蛋白濃度應用范圍組織標本，細胞中蛋白交互作用以及信號通路。檢測蛋白質特性、表達的一種最常用的方法。組織、細胞。分泌性蛋白檢測3種蛋白檢測水平的比較實驗中常用蛋白檢測方法蛋白的交互作用實驗中常用蛋白檢測方法尋找目標蛋白實驗中常用蛋白檢測方法驗證兩蛋白間作用實驗中常用蛋白檢測方法驗證蛋白交互作用方法經典的方法有：CO-IPGST-pulldown酵母雙雜交系統實驗中常用蛋白檢測方法CO-IP，又叫免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內結合的蛋白質Z也能沉淀下來。目前多用proreinA預先結合固化在瓊脂糖微珠上，ProteinA是一種金黃色葡萄球菌細胞壁蛋白質，能特異性地與人和哺乳動物抗體的Fc區結合，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后，瓊脂糖微珠上的proreinA/G與抗體Fc特異性結合，由于抗體抗原特異性，沉淀蛋白X；溶液中有和蛋白X相互作用的物質，就能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。實驗中常用蛋白檢測方法實驗中常用蛋白檢測方法Pull-down實驗跟免疫共沉淀實驗很像，不同的是免疫共沉淀是在細胞里進行的，在眾多的蛋白里，拉住A蛋白的同時,把B蛋白也給拉出來了，這還不能證明是直接的結合，很有可能是A拉住了C，而C拉住了B，這樣拉住A蛋白的同時也能把B蛋白也給拉出來。要證明直接的結合就是Pull-down實驗。提純所要研究的兩個蛋白（一般是在BL21等菌種表達提純），這兩個蛋白帶上不同的標簽（提純蛋白一般帶GST或者HIIS標簽），然后將他們放在同一個體系里，使用GST-beads或者NI-beads,把其中一個蛋白拉下來，用WB檢測另一個蛋白的存在。實驗中常用蛋白檢測方法研究某分子A在椎間盤退變中作用椎間盤標本切片，HE，特殊染色免疫組化

基質、退變酶、目的蛋白WB細胞常規蛋白WB，免疫熒光