丹參葡萄糖注射液的急性毒性及局部用藥毒性研究

丹參具有活血通絡、消除淤血、鎮痛、凈化心臟疾病的作用。廣泛用于心血管疾病的治療。隨著臨床廣泛應用,對丹參不良反應的文獻報道日益增多:如過敏性休克、心律失常、心衰、藥物性肝炎,靜脈滴注過快,出現惡心、嘔吐、頭暈、血壓下降等反應。為此我們對丹參進行了系統的長期毒性研究,發現靜注過快有一過性血壓下降等表現;對Beagle犬[0.8g/(kg·d),i.v]和大鼠[12.5g/(kg·d),i.v或i.p]應用6個月體重增長明顯減慢,凝血時間延長,AST明顯升高,光鏡下顯示有不同程度的肝脂肪變性及肝細胞水腫,但停藥21d基本恢復正常,提示丹參對肝臟等有一定可逆性毒性反應。但對于動物急性和局部應用毒性未見確切報道,故本文采用不同動物、不同方法、不同給藥途徑,進一步觀察其在動物體內急性毒性反應及局部用藥毒性,為擬定人用安全劑量提供依據,現將結果報告如下。1材料表面1.1生藥/瓶配制丹參,安徽華源生物制藥有限公司,批號:990907,含量:臨床使用的制劑及規格量是16g/250ml,作為試驗劑量及濃度均不適宜,故由廠家提供濃縮液為640g生藥/瓶(100ml)。配制方法:實驗前將640g生藥/瓶(100ml)丹參液,用5%葡萄糖水稀釋成含3.2g/ml的溶液,以10mol/LNaOH調節pH6.5~7.0,供實驗用。卵蛋白購于上海伯澳生物科技公司,批號:990817,臨用前用生理鹽水制成0.5%溶液。1.2實驗動物及場ICR小鼠18~20g,南京醫科大學實驗動物中心,合格證號:蘇動(質)97001;SD大鼠100~130g,中科院上海實驗動物中心,合格證號:中科院動管會005號;家兔1.8~2.3kg,購自皖南醫學院實驗動物中心;豚鼠體重150~180g,購自上海市松江區松聯實驗動物場,合格證號:滬醫動字第02-52-2號。保持室溫(23±2)℃,相對濕度60%~65%,自然光照,自由進水,給藥前禁食12h。顆粒飼料由皖南醫學院動物中心提供。1.3統計方法采用孫瑞元教授等編制的DAS2.0軟件,用Bliss法計算小鼠的LD50。2方法和結果2.1急性中毒試驗2.1.1尾靜脈用藥后小鼠的急性毒性反應小鼠120只,雌雄各半,隨機分成6組,經預試確定100%致死量丹參為35.6kg,依次按1∶0.9用5%葡萄糖水稀釋(劑量見表1),6組小鼠分別一次性尾靜脈注射給藥,給藥容量均為0.2ml/10g,在1min內注射完畢并開始記錄死亡時間,用藥后連續觀察7d。記錄逐日的小鼠毒性反應及死亡數。死亡小鼠進行尸體解剖,對病變器官進行病理組織學檢查。結果發現致死劑量下,多數死亡動物在用藥后10~60s內皮膚粘膜紫紺、躁動、呼吸急促、四肢癱瘓、呼吸停止而死亡,部分動物可遷延至3min內死亡,經系統尸解發現內臟血管明顯擴張,腹腔廣泛出血。用Bliss法計算小鼠的LD50=26.89g/kg,各組動物死亡數及計算結果見表1。2.1.2小鼠急性毒性反應及病理組織學檢測小鼠100只,雌雄各半,隨機分成5組,經預試找出100%致死量為45g/kg,依次按1∶0.9用5%葡萄糖水稀釋(劑量見表2),5組小鼠分別一次性腹腔注射給藥,給藥容量均為0.2ml/10g。在1min內注射完畢并開始記錄死亡時間,用藥后連續觀察7d。記錄每日的小鼠毒性反應及死亡數。死亡小鼠進行尸體解剖,對病變器官進行病理組織學檢查。結果死亡動物均在用藥后1~2d內因呼吸停止而死亡。用Bliss法計算小鼠LD50=36.09g/kg,各組動物死亡數及計算結果見表2。2.1.3尾靜脈用藥后大鼠的急性毒性反應大鼠50只,雌雄各半,隨機分成5組,經預試確定100%致死量為34.0g/kg,以此為最大劑量組,以下各組依次按1:0.9用5%葡萄水稀釋,5組大鼠分別一次性尾靜脈注射,給藥容量均為1.0ml/100g,在1min內注射完畢并開始記錄死亡時間,用藥后連續觀察7d,記錄每日的大鼠毒性反應及死亡數。死亡大鼠進行尸體解剖,對病變器官進行病理組織學檢查。結果大部分死亡動物在用藥后10~90s內因呼吸停止而死亡,系統尸解發現內臟血管擴張,腹腔內廣泛出血。用Bliss法計算大鼠的LD50=27.02g/kg,各組動物死亡數及計算結果見表3。2.1.4成人劑量及動物系數由表4可見,小鼠和大鼠尾靜脈注射給藥的LD50分別為26.89g/kg和27.02g/kg,按體重計算約為成人劑量的100倍;按動物系數計算,分別為成人量的11及14倍。小鼠腹腔注射的LD50大于靜脈注射,提示腹腔給藥吸收較慢,其毒性低于靜脈注射。2.2局部毒性試驗2.2.1紅細胞凝集液的制備自家兔耳動脈取血20ml,置于燒瓶內,用玻璃棒輕輕攪動,除去纖維蛋白,取出血液,加等量0.9%NS,離心(1500轉/min,10min),除去上清液;沉淀的紅細胞再加0.9%NS清洗,離心。如此重復直至上清液透明。經離心沉淀(3000r/min,10min)后,按紅細胞的容積0.9%NS配成2%的混懸液。取烤干試管7只,分別編號,依次加入6.4%丹參、5%葡萄糖水、2%紅細胞懸液(見表5),搖勻,置于37℃保溫箱中,分別于0.5、1、2、3h觀察是否有溶血及凝集現象。結果丹參在3h內未見溶血及凝集現象,而蒸餾水組出現溶血。2.2.2不同劑量0.2.2不同次用藥家兔8只,4只于一側耳緣靜脈注入連接含有5%葡萄糖注射器的頭皮靜脈針頭,注入靜脈后再將針頭連接含有6.4%丹參輸液器。靜脈滴注丹參10ml,滴速約30滴/min(藥液濃度及滴注速度均與臨床相同)。另4只家兔按同樣方法靜滴等量5%葡萄糖水。每日1次,連續5d。末次用藥24h后,觀察靜滴藥液處向心端0~1、1~2、2~3cm處的血管及周圍組織變化,并與5%葡萄糖水組對照。然后處死動物,在靜滴藥液處,分別按血流方向,每隔1cm取血管連同周圍組織,共4處,用10%甲醛固定,以作組織學檢查。結果丹參靜脈滴注5d后,肉眼觀察無充血、水腫,硬結和壞死;組織學檢查未見間質內皮細胞浸潤,血管內血栓形成、周圍出血灶、擴張充血和組織壞死;提示丹參對血管無明顯刺激作用。2.2.3單次肌注后大鼠血清中的利益變化豚鼠18只,隨機分為6.4%丹參組、0.5%卵蛋白陽性對照組及5%葡萄糖水陰性對照組,分別在腿部肌注藥液每只0.5ml,隔日1次,共3次。每組再分兩批,第一批每組3只。在首次肌注后的第14d,在后腳掌外側靜脈,分別靜注6.4g%丹參、0.5%卵蛋白溶液及5%葡萄糖水,劑量均為每只2ml,觀察記錄2h內有無抓鼻,豎毛,咳嗽,呼吸困難,痙攣,休克,大小便失禁,死亡等過敏癥狀。第二批在首次肌注后的第21d,將3組各余下的3只動物,用同樣方法給藥及進行觀察記錄。結果3次致敏后,于第14d和第21d靜脈注射誘導發敏,丹參組及葡萄糖水組均未見過敏反應,而卵蛋白溶液組3只均出現咳嗽,呼吸困難,痙攣,休克,大小便失禁等嚴重過敏反應,全部動物死亡。3麻黃葡萄糖注射液不良反應發生情況3.1研究結果表明,大、小鼠靜脈注射丹參的LD50分別為27.02g/kg和26.89g/kg,按動物系數計算,分別為成人量的11及14倍,提示本品毒性很小,臨床使用較安全可靠。但我們發現,在致死劑量下,動物出現皮膚粘膜紫紺、躁動、呼吸急促、四肢癱瘓、呼吸停止,最終死亡,尸檢發現內臟血管擴張,廣泛出血,這與文獻報道的結果一致。動物死亡的原因可能與短時間內體內血藥濃度急劇升高,使血管擴張,而致血壓快速下降;也可能與肝功能受損、凝血時間延長等有關。提示丹參的臨床用量不能盲目