醫學微生物學實驗二

微生物學教研室：3029130科教科：3029945醫學微生物學實驗二微生物學教研室：302913

實驗內容

1.實驗一結果的觀察和分析；

2.細菌內毒素的檢測技術；

3.抗酸染色；

4.實驗考試。實驗內容一、實驗一結果的觀察和分析

空氣中細菌

咽喉部細菌一、實驗一結果的觀察和分析空氣中細菌咽喉部細菌二、內毒素的檢測技術

（鱟試驗）

1.內毒素檢測方法

家兔發熱法，鱟試驗。二、內毒素的檢測技術

（鱟試驗）1.內毒素檢測方法2.鱟試驗原理3.材料鱟試劑，內毒素試劑，鱟試劑專用溶解水，無菌無熱源質吸管

內毒素（LPS）

激活

凝固蛋白原凝固蛋白（溶解狀態）

（凝膠狀態）凝固酶原凝固酶2.鱟試驗原理內毒素（LPS）激活凝固4.方法步驟（每4個人一組，兩支鱟試劑，一支實驗一支對照）（1）取兩支鱟試劑打開，分別加入0.1ml鱟試劑溶解水，使之溶解。（2）其中一支加入0.1ml內毒素，標記上實驗組，另一支加入0.1ml溶解水，作為對照。（3）垂直放入37℃溫箱，20-30min觀察結果。5.結果及應用實驗組出現凝固，對照組不出現凝固4.方法步驟三、抗酸染色

Acidfaststain三、抗酸染色（一）實驗目的

1.掌握分枝桿菌抗酸染色的操作方法和意義。

2.熟悉抗酸染色的原理。（二）實驗原理

分枝桿菌的細胞壁內含有大量的脂質，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經過加熱和延長染色時間來促使其著色，同時分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。

齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復紅牢固結合成復合物，用3%鹽酸酒精處理也不脫色。當再加堿性美蘭復染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細菌及背景中的物質為蘭色。（一）實驗目的9可編輯9可編輯

1.細菌：卡介苗（BCG）。

2.抗酸染液：石炭酸復紅液、3%鹽酸酒精、堿性美蘭溶液。

3.其它：接種環、酒精燈、載玻片，玻片夾等。（三）實驗材料1.細菌：卡介苗（BCG）。（三）實驗材料（四）方法與步驟1.細菌涂片的制備

涂片干燥固定

2.染色1）初染：用玻片夾夾持涂片標本，滴加石炭酸復紅2~3滴，在火焰高處（2~10cm）徐徐加熱，切勿沸騰，出現蒸汽即暫時離開，加熱3~5min，若染液蒸發減少，應再加染液，以免干涸，待標本冷卻后用水沖洗。2）脫色：3%鹽酸酒精脫色30s~1min；用水沖洗。3）復染：用堿性美蘭溶液復染1min；用水沖洗。4）玻片用吸水紙吸干，油鏡觀察。（四）方法與步驟（五）實驗結果未染色

初染后脫色后復染后初染脫色復染石炭酸復紅鹽酸酒精堿性美蘭紅色為抗酸染色陽性；藍色為抗酸染色陰性。（五）實驗結果未染色初染后脫色

結核桿菌呈紅色，常堆積成團，排列無序，偶呈分枝狀生長；背景及非抗酸性細菌呈蘭色。結核桿菌呈紅色，常堆積成團，排列無序，偶呈分枝（六）注意事項1.無菌操作；2.染色要充分，掌握好時間；3.初染時加熱勿使染液沸騰，干涸。（六）注意事項1.無菌操作；

實驗報告

1.內毒素的檢測（鱟試驗）原理，材料，方法及結果。

2.抗酸染色的原理，材料，方法和