高效液相色譜法測定蒲公英中木草素的含量

蒲公英是薔薇科植物的蒲公英（taraxacumhand.maya），以及屬于各種植物的干燥全草。蒲公英中含有多種化學成分,如三萜類、黃酮類、有機酸等。而木樨草素及其葡萄糖苷為蒲公英中主要的黃酮類化合物之一。木樨草素具有多種藥理活性,如抗炎、抗腫瘤、抗過敏、抗纖維化等。為了考察宜賓地區蒲公英的質量,本文把木樨草素作為考察對象之一,建立了高效液相色譜法測定蒲公英中木樨草素的含量。結果宜賓七個鄉鎮蒲公英中有六個鄉鎮木樨草素的含量高于四個市售外地蒲公英藥材。1儀器和試劑盒1.1儀器高效液相色譜儀(美國Waters公司);startoriusCP225D電子天平(德國)。1.2產品及藥材鑒定木樨草素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110885-200102);蒲公英(宜賓本地采集,經重慶中藥研究院趙素云教授鑒定為亞洲蒲公英(TaraxacumasiaticumDahlst.)及市售蒲公英藥材;乙腈(色譜純,DIKMA公司),水為超純水,其余試劑為分析純。2方法和結果2.1乙腈-1.1%磷酸法色譜柱:KromasilC18柱(200mm×4.6mm,5μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(28:72);流速:1.0ml·min-1;檢測波長:349nm;柱溫;35℃;進樣量:20μl;理論板數按木樨草素峰計算應不低于2000。在此色譜條件下,木樨草素與相鄰峰的分離度良好,溶劑對測定無干擾。色譜圖見圖1。2.2貯備液的配制精密稱取木犀草素對照品適量,用甲醇配制成100μg·ml-1的貯備液。精密量取3ml貯備液,置100ml量瓶中,加甲醇定容,搖勻,作為對照品溶液。2.3供試品溶液的制備精密稱取1g蒲公英粉末,置具塞錐形瓶中,精密加入50ml5%甲酸的乙醇溶液,稱定重量,超聲處理(200W,40kHz)30min,放冷,再稱定重量,用5%甲酸的乙醇溶液補足減失的重量,搖勻,過濾,取續濾液作為供試品溶液。2.4進樣、色譜條件的確定分別精密量取對照品貯備液0.5,1.5,3,4.5,6ml置100ml量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,制成系列濃度溶液,按“2.1”項下的色譜條件進樣,分別測定其峰面積。以峰面積A對濃度C(μg·ml-1進行線性回歸,其回歸方程為:A=1.163×105C+3.024×103(r=0.9998),線性范圍0.515～6.180μg·ml-1。2.5精密度測試精密吸取對照品溶液20μl,按色譜條件重復進樣6次,測得木樨草素峰面積的RSD為0.4%。2.6標準品溶液與供試品溶液中木草素的峰面積rsd分別吸取上述對照品溶液和供試品溶液各20μl,每隔2h進樣測定一次,共測定6次,對照品溶液與供試品溶液中木樨草素峰面積的RSD分別為0.9%、1.4%。結果表明對照品溶液和供試品溶液均在8h內穩定。2.7外標法計算含量取蒲公英粉末按“2.3”項的方法制備供試品溶液6份,分別進樣,記錄色譜圖,按外標法計算含量。木樨草素平均含量為1.62mg·g-1,RSD為0.8%,表明本法重復性良好。2.8對照品貯備液的配制取已知木樨草素含量為0.166mg·g-1的蒲公英粉末0.5g共9份,分別準確加入一定量的木樨草素對照品貯備液,按“2.3”項的方法配制成低、中、高不同濃度的溶液。在“2.1”項的色譜條件下進樣20μl,記錄色譜圖,計算回收率,結果平均回收率為102.10%,RSD為1.25%(n=9)。2.9樣品測定取蒲公英粉末,照“2.3”項的方法制備供試品溶液,按“2.1”項的色譜條件測定。以外標法計算樣品中木樨草素的含量,結果見表1。3流動相的確定試驗以甲醇為溶劑,在200～400nm波長范圍內測定木樨草素的紫外吸收光譜,結果其最大吸收波長為349nm,故選擇349nm為檢測波長。試驗中分別采用了甲醇-磷酸水溶液系統、甲醇-水-醋酸系統、乙腈-水-醋酸系統以及乙腈-磷酸水溶液系統,結果乙腈-磷酸水溶液系統下,木犀草素的峰形與分離度均良好,因此選用了乙腈-磷酸水溶液作為流動相,