農藥薄荷腦的質量標準研究

薄蓮腦注射液是指嘴唇科植物的薄荷（meshahalectalyxbirq）的新鮮莖和葉通過蒸汽蒸餾而獲得的，然后是冷凍和提取的結晶。本品為無色透明棒狀晶體,有薄荷的特殊香氣,味初灼熱,后清涼,是一種飽和環狀醇。薄荷腦有清涼和抗炎作用,可作為許多中成藥的君藥。雖然中成藥及合成制劑中薄荷腦的含量測定方法有過報道,但薄荷腦原料藥的質量控制方法尚未建立。筆者采用毛細管氣相色譜法對薄荷腦原料藥建立了質量控制方法,并且取得滿意結果。1材料和方法1.1藥品、試劑與儀器GC-7890Ⅱ(上海天美)SEPU3000工作站,電子天平:SartoriusBP211D。薄荷腦化學對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號0728-200005規格100mg);癸醇(中國醫藥集團上海化學試劑公司,色譜標準);薄荷腦原料藥(湖北中醫學院提供),其它試劑均為分析純。1.2高純氮載氣系統使用FFAP(聚乙二醇20M與2-硝基對苯二甲酸的反應產物)毛細管色譜柱(30m×0.53mm×1μl);高純氮(99.999%)為載氣,載氣流量:15ml·min-1,尾吹:20ml·min-1,AIR:300ml·min-1,H2:30ml·min-1,不分流進樣;進樣器溫度:200℃;檢測器:FID溫度230℃:柱溫:80℃保持一分鐘,按每分鐘升2.5℃至150℃,維持5分鐘。進樣量:0.50μl。1.3去薄荷香氣去輕油取本品1g,加硫酸20ml使溶解,即顯紅色。24小時后析出無薄荷香氣的無色油層(與麝香草酚的區別);取本品50mg,加冰醋酸1ml使溶解,加入硫酸6滴與硝酸1滴的冷混合液,僅顯淡黃色(與麝香草酚的區別)。1.4試驗品及對照品溶液的制備系統適用性試驗:分別稱取薄荷腦和癸醇適量,用乙醇制成每1ml含10mg的混合溶液,量取0.50μl注入氣相色譜儀,記錄色譜圖,薄荷腦峰與癸醇峰之間的分離度大于1.5。(圖1)供試品溶液的制備:取本品約1g,精密稱定,置10ml量瓶中,加乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成100mg·ml-1的供試品溶液。對照品溶液的制備:取供試溶液0.10ml至10ml的容量瓶中用乙醇稀釋至刻度,制成1mg·ml-1的對照品溶液。測定:分別精密量取對照品溶液和供試品溶液0.50μl注入氣相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍,(圖2)表明各雜質峰面積小于對照品溶液主峰面積,雜質峰面積之和占總面積的0.44%。1.5標準曲線及檢測限內標溶液的制備:精密稱定癸醇對照品100mg,置于10ml容量瓶中,加乙醇稀釋至刻度,配制成含癸醇10mg·ml-1的內標溶液。校正因子的測定:取薄荷腦對照品100mg,置于10ml容量瓶中,用無水乙醇稀釋至刻度,搖勻。再吸取1ml置于10ml容量瓶中,精密加入內標溶液1ml,用無水乙醇稀釋至刻度,搖勻,取0.50μl注入色譜系統,記錄峰面積計算校正因子,f=1.169,RSD=0.3%(n=3)。標準曲線的繪制:取薄荷腦標準對照品適量,配制成10mg·ml-1的標準對照品儲備液。再分別吸取0.70ml、0.80ml、0.90ml、1.00ml、1.10ml、1.20ml、1.30ml于10ml量瓶中,并加入10mg·ml-1的癸醇內標標準溶液1ml,用無水乙醇稀至刻度。得到濃度分別為0.70mg·ml-1、0.80mg·ml-1、0.90mg·ml-1、1.00mg·ml-1、1.10mg·ml-1、1.20mg·ml-1、1.30mg·ml-1系列標準溶液。各進樣0.5μl,記錄色譜圖。采用薄荷腦峰面積與癸醇峰面積之比Y對濃度作線性回歸。標準曲線:Y=0.04959+1.03707C,范圍0.70mg·ml-1～1.30mg·ml-1,r=0.99986,檢測限:5μg·ml-1。測定:分別取樣品及標準品適量,用乙醇溶解,再加入濃度為10mg·ml-1的內標溶液(癸醇)1ml并用乙醇稀釋成含薄荷腦1mg·ml-1的供試品溶液和標準品溶液,分別取標準品溶液和供試品溶液0.5μl進樣,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍,采用內標對照法計算含量(見表1)。1.6標準品溶液的配制分別量取10mg·ml-1的供試品溶液0.80ml、1.00ml、1.20ml于10ml量瓶中,加入10mg·ml-1的癸醇內標標準溶液1ml,用無水乙醇稀至刻度,配成0.80mg·ml-1、1.00mg·ml-1、1.20mg·ml-1的溶液。另取標準品適量稀釋成1mg·ml-1,制成對照液,各量取0.50μl,注入氣相色譜儀,記錄色譜圖。重復進樣3次,計算回收率及RSD(見表2)。1.7方法的精密度分別取0.80mg·ml-1、1.00mg·ml-1、1.20mg·ml-1的標準品溶液0.50μl,注入氣相色譜儀,記錄色譜圖。重復進行5次,計算日內精密度。分別取0.80mg·ml-1、1.00mg·ml-1、1.20mg·ml-1的標準溶液0.50μl,注入氣相色譜儀,重復進行4天,記錄色譜圖。計算得日間精密度(見表3)。1.8重復使用取同一批號樣品,按含量測定方法平行測定5次,計算含量及RSD(見表4)。2結果3檢測方法及結果按照藥典規定進行以下實驗:影響因素實驗(高溫試驗、高濕試驗、光照試驗);加速試驗;長期試驗;酸破壞試驗;堿破壞試驗;氧化破壞試驗;熱破壞試驗;光破壞試驗,依照含量項下的條件,按穩定性重點考察項目檢測,結果符合藥典。不揮發物采用干燥失重法檢測,結果符合藥典要求;有