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文檔簡介

實驗十九、紙色譜實驗二十、氨基酸的紙 上電泳實驗十九、紙色譜1一、目的與要求：1、了解紙色譜的基本原理。2、學習用紙色譜法分離氨基酸的一般操作。3、了解電泳的基本原理，學會紙上電泳的操作方法。4、初步掌握用紙上電泳法分離鑒定氨基酸。

一、目的與要求：2二、基本原理（一）紙色譜是一種分配色譜。濾紙作為載體，紙纖維上吸附的水為固定相，與水不相混溶的有機溶劑作為流動相。當樣品點在濾紙的一端，使流動相從有樣品的一端上行，通過毛細管作用，流向另一端時，依靠溶質在兩相間的分配系數不同而達到分離。極性大的組分在固定相中分配得多，隨流動相移動速度慢，極性小的在流動相中分配得多，隨流動相移動速度快一些。

二、基本原理3三、紙色譜實驗步驟（觀看錄像）1、點樣；2、展開；3、顯色與結果處理——計算出兩個物質的Rf值。三、紙色譜實驗步驟（觀看錄像）4

紙色譜圖紙色譜圖5（二）在一定的條件下，帶電的質點在電場作用下，向著與其所帶電荷相反的電極移動，這種現象稱為電泳。不同氨基酸在同一pH值的溶液中，所帶的電荷不同。在同一電場中，帶不同電荷的各個氨基酸泳動的方向和速度不相同，因此將不同的氨基酸在同溶液中進行電泳時，由于各個氨基酸移動的方向和距離都不相同，從而達到分離鑒定的目的。（二）在一定的條件下，帶電的質點在電場作用下，向著與其所帶電6四、紙上電泳實驗步驟（觀看錄像）1、點樣與潤濕；2、電泳；3、顯色；4、結果處理——標明正、負極和氨基 酸。四、紙上電泳實驗步驟（觀看錄像）7氨基酸的紙上電泳圖譜氨基酸的紙上電泳圖譜8

實驗注意事項：1、整個實驗都不應用手直接接觸濾紙（手汗中有氨基酸）；2、紙色譜點樣點越小越好(點2次即可),紙上電泳點樣點越小越好（可重復點4-5次）；3、點完樣后，毛細管應放回原試管中，不可放錯；4、電泳實驗中，當全部濾紙都放入電泳槽后才可以通電； 實驗注意事項：95、電泳結束應先關電源再把濾紙取出 （電壓較高，注意安全）；6、紙色譜中的顯色劑已經加入到展開劑中，不用另外噴，直接吹干即可顯色；7、紙上電泳實驗所噴水合茚三酮不能太多，

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