《臨床分子生物學檢驗技術》理論教學大綱(供四年制本科醫學檢驗技術專業使用)Ⅰ前言臨床分子生物學檢驗技術是醫學檢驗技術專業學生的一門重要專業課程。它是分子生物學與臨床實驗室醫學（醫學檢驗）廣泛交叉和滲透形成的一個嶄新的學科領域，是臨床實驗室醫學中的前導技術，應用分子生物學技術，對人體內外源性或內源性基因的存在、結構或表達變化進行定性、定量分析，為疾病的預防、診斷、治療和轉歸提供信息和決策依據的一門學科，該技術在臨床實驗室醫學中的廣泛應用必將成為推動臨床實驗室醫學各學科（生化、血液、免疫、微生物和臨床檢驗）發展的重要力量。臨床分子生物學檢驗技術教學的目的是為適應21世紀臨床實驗室醫學教育發展的需要，培養現代化醫院需要的臨床實驗室醫學專業的高級人才。通過本課程的學習，使學生全面理解分子生物學檢驗技術的基本理論和基本知識，培養學生具備分析問題和解決問題以及從事分子生物學檢驗的基本技能。其教學的總目標是為學生建立一個系統性強、架構清晰的分子生物學檢驗技術的知識體系。本大綱適用于四年制本科醫學檢驗技術專業使用。現將大綱使用中的有關問題說明如下：一為了使教師和學生更好地掌握教材，大綱每一章節均由教學目的、教學要求和教學內容三部分組成。教學目的注明教學目標，教學要求分掌握、熟悉和了解三個級別，教學內容與教學要求級別相對應，并統一標示(核心內容即知識點以下劃實線，重點內容以下劃虛線，一般內容不標示)便于學生重點學習。二教師在保證大綱核心內容的前提下，可根據不同教學手段，講授重點內容，介紹一般內容，有的內容可留給學生自學。三總教學參考學時為42學時，其中理論22學時，實驗20學時；理論課與實驗課學時之比為1.1∶1。四教材：《臨床分子生物學檢驗技術》，人民衛生出版社，呂建新、王曉春，1版，2015年。II正文第一章緒論一教學目的通過學習，掌握臨床分子生物學檢驗和基因多態性分析的概念，熟悉常見的臨床分子生物學檢驗技術及其應用，了解臨床分子生物學檢驗技術的發展。二教學要求(一)掌握臨床分子生物學檢驗概念，基因多態性分析概念，個體化醫學概念。(二)熟悉常見的臨床分子生物學檢驗技術及其應用，循環游離核酸檢測意義。(三)了解臨床分子生物學檢驗技術的發展。三教學內容(一)臨床分子生物學檢驗技術的發展1從分子生物學到臨床分子生物學檢驗2臨床分子生物學檢驗技術的發展(二)臨床分子生物學檢驗技術的應用1病原生物基因組菌種鑒定確定病毒感染和病毒載量病毒分析細菌耐藥監測和分子流行病學調查2基因變異致病基因的分子缺陷線粒體基因突變腫瘤相關基因DNA重排形成融合基因3基因多態性基因定位和遺傳病相關性分析藥物代謝酶與血液濃度疾病診斷和遺傳咨詢多基因病的研究器官移植配型和個體識別4循環游離核酸循環游離核酸與腫瘤游離核酸與產前診斷循環microRNA與腫瘤診斷（三）臨床分子生物學檢驗發展與應用1臨床分子生物學檢驗與感染性疾病診斷與治療2遺傳性疾病的臨床分子生物學檢驗3腫瘤的臨床分子生物學檢驗4臨床分子生物學檢驗與個體化醫學第二章臨床分子生物學檢驗標志物一教學目的通過學習，掌握分子生物標志物的概念及分類，基因突變的概念及類型，熟悉病毒、原核生物、真核生物及人類基因組的結構及特征，了解分子生物標志物的特征。二教學要求(一)掌握分子生物學標志物的概念及分類；核酸分子生物標志物的分類，基因突變的概念及類型；基因多態性的概念及分類；DNA甲基化的概念，轉錄產物標志物的類型和原理，循環核酸的應用。(二)熟悉生物標志物的概念及分類，病毒、原核生物、真核生物及人類基因組的結果及特征，線粒體DNA生物標志物的特點，高通量技術與分子標志物的發現。(三)了解分子生物標志物的特點，生物標志物發展的基本統計學方法和生物標志物的評估階段。三教學內容（一）分子生物標志物的概念與分類1生物標志物的概念與分類2分子生物標志物的概念與分類（1）DNA生物標志物（2）RNA生物標志物（3）蛋白質生物標志物（二）核酸分子生物標志物1基因組和基因組特征原核生物基因組病毒基因組人類基因組2基于基因突變的分子生物標志物點突變插入／缺失突變動態突變3基于基因多態性的分子生物標志物限制性片段長度多態性小衛星和微衛星多態性單核苷酸多態性拷貝數多態性4基于DNA甲基化修飾的分子生物標志物5基于轉錄產物的分子生物標志物mRNA標志物miRNA標志物長鏈非編碼RNA標志物6基于線粒體DNA的分子生物標志物7基于循環核酸的分子生物標志物循環腫瘤細胞DNA母體血清中的胎兒DNA循環DNA的其他應用血漿RNA（三）分子生物標志物的發現與評價1高通量技術與分子生物標志物的發現基因組學轉錄組學蛋白質組學代謝組學分子生物標志物的特征和評價估分子生物標志物的特征分子生物標志物評估的基本統計學方法生物標志物的評價階段第三章臨床標本處理與分離純化技術（自學）第四章核酸雜交技術一教學目的通過學習，掌握核酸分子雜交的類型和基本原理及臨床應用，核酸分子探針的分類和標記方法和DNA芯片原理。熟悉影響核酸分子雜交的因素，了解DNA芯片在醫學中的應用。二教學要求(一)掌握Southern印跡雜交技術、Nouthern印跡雜交技術和熒光原位雜交的基本原理，核酸分子雜交的類型及臨床應用，核酸分子探針的分類和標記方法和DNA芯片原理。(二)熟悉影響核酸分子雜交的因素，核酸分子雜交的基本原理和分類。(三)了解DNA芯片在醫學中的應用和核算數據分析及其應用。三教學內容（一）核酸分子雜交的概念1核酸探針核酸探針的種類探針的長度核酸探針的標記2分子雜交信號檢測放射性標記探針檢測非放射性標記探針的雜交檢測（二）經典的核酸分子雜交技術1固相雜交反向點雜交原理和應用Southern印跡雜交原理和應用Northern印跡雜交原理和應用2液相雜交3原位雜交（三）DNA芯片技術1DNA芯片的概念2DNA芯片原理3DNA芯片技術芯片制備樣品的制備4雜交與結果分析5DNA芯片在醫學中的應用（四）影響雜交信號檢測的因素1探針的選擇2探針的標記方法3探針的濃度4雜交率5雜交溫度6雜交的嚴謹性7雜交反應時間8雜交促進劑第五章核酸體外擴增及定性檢測技術一教學目的通過學習，聚合酶鏈反應的基本原理和過程、反應體系組成和擴增參數，熟悉PCR產物分析原理及主要臨床應用，了解以PCR為基礎的其他相關核酸擴增技術原理及應用。二教學要求(一)掌握聚合酶鏈反應的基本原理和過程、反應體系組成和擴增參數，逆轉錄PCR、多重PCR、巢式PCR、轉錄依賴擴增，鏈置換擴增、bDNA擴增技術的原理及臨床應用，靶序列擴增、探針序列擴增和信號擴增的概念。(二)熟悉PCR-FRLP、PCR-ASO、PCR-SSCP等PCR產物分析原理及主要臨床應用。(三)了解以PCR為基礎的其他相關核酸擴增技術如全基因組擴增、錨定擴增等靶序列擴增和其他探針序列擴增、信號擴增技術原理及應用。三教學內容(一)靶序列擴增1PCR擴增技術PCR擴增技術原理及基本過程PCR反應體系及擴增參數2其他PCR技術多重PCR序列特異PCR逆轉錄PCR巢式PCR轉錄依賴擴增系統隨機引物PCR全基因組擴增微乳液擴增錨定擴增長片段PCR3PCR產物分析PCR-限制性片段長度多肽性PCR-等位基因特異性寡核苷酸PCR-單鏈構象多態性變性梯度凝膠電泳熔點曲線分析(二)探針序列擴增1連接酶鏈反應2鏈置換擴增3Qβ復制酶(三)信號擴增1分支DNA2雜交捕獲法3酶切依賴的擴增4循環探針第六章核酸實時定量檢測技術一教學目的通過學習，掌握實時熒光定量PCR技術的原理，引物、探針的設計基本原理，以及相關結果的分析方法，熟悉臨床基因擴增實驗室的設置與人員資質要求，了解數字PCR技術。二教學要求(一)掌握實時熒光定量PCR技術的原理，引物、探針的設計基本原理，實時熒光定量PCR相關結果的分析方法，實時熒光定量PCR反應體系和條件的優化。(二)熟悉臨床基因擴增實驗室的設置與人員資質要求。(三)了解數字PCR技術。三教學內容(一)實時熒光定量PCR的基本原理1實時熒光定量PCR中常用的概念擴增曲線熒光閾值循環數擴增效率2PCR擴增的理論模式3實時熒光定量PCR中的熒光化學物質熒光染料技術熒光探針技術數字PCR技術（二）實時熒光定量PCR引物和探針的設計1引物設計的基本原則2探針設計的基本原則（三）實時熒光定量PCR反應體系和條件的優化1反應體系的優化模板的質和濃度引物和探針的濃度2反應條件的優化退火溫度循環次數（四）實時熒光定量PCR測定的數據分析1絕對定量2相對定量標準曲線法的相對定量比較Ct法的相對定量（五）臨床基因擴增實驗室的設置與人員資質要求第七章核酸序列分析（自學）第八章蛋白質組學技術（自學）第九章分子生物學檢驗新技術（自學）第十章病毒病的分子生物學檢驗一教學目的通過學習，掌握病毒病的分子生物學檢驗策略，常見病毒的基因組結構特征和基因分型依據，熟悉病毒核酸定性及定量檢測方法，病毒基因分型及其耐藥性分析方法，了解病毒分子生物學檢驗的臨床意義及研究進展。二教學要求(一)掌握病毒病的分子生物學檢驗策略（一般性檢出策略和完整性檢出策略），常見病毒的基因組結構特征、基因分型依據。(二)熟悉病毒核酸定性及定量檢測方法，病毒基因分型及其耐藥性分析方法。(三)了解病毒分子生物學檢驗的臨床意義，病毒分子生物學檢驗的研究進展，常見病毒腦要的分子機制。三教學內容(一)病毒病分子生物學檢驗策略1病毒病的一般檢出策略2病毒病的完整性檢出策略(二)乙型肝炎病毒的分子生物學檢驗1乙型肝炎病毒的基因組結構特征2乙型肝炎病毒的分子生物學檢測方法HBVDNA的檢測乙型肝炎病毒的基因分型乙型肝炎病毒的耐藥分析3分子生物學檢驗的臨床意義HBV定量檢測的臨床意義HBV基因分型檢測的臨床意義HBV耐藥性監測的臨床意義(三)丙型肝炎病毒的分子生物學檢驗1丙型肝炎病毒的基因組結構特征5端及3端非編碼區編碼區2丙型肝炎病毒的分子生物學檢驗HCVRNA的檢測HCV基因分型3分子生物學檢驗的臨床意義檢測HCVRNA檢測HCV基因型(四)人乳頭瘤病毒的分子生物學檢驗1人乳頭瘤病毒的基因組結構特征2人乳頭瘤病毒的分子生物學檢驗人乳頭瘤病毒的分型HPVDNA檢測及基因分型3分子生物學檢驗的臨床意義(五)人類免疫缺陷病毒的分子生物學檢驗1人類免疫缺陷病毒的基因組結構特征LTR序列結構基因調控基因2人類免疫缺陷病毒的分子生物學檢驗HIVRNA檢測人類免疫缺陷病毒的分型人類免疫缺陷病毒的耐藥性分析3分子生物學檢驗的臨床意義(六)流行性感冒病毒的分子生物學檢驗1流行性感冒病毒的基因組結構特征2流行性感冒病毒的分子生物學檢驗分子生物學檢驗的臨床意義第十一章細菌感染性疾病的分子生物學檢驗技術（自學）第十二章其他感染性疾病的分子生物學檢驗技術（自學）第十三章單基因遺傳病的分子生物學檢驗技術（自學）第十四章染色體疾病的分子生物學檢驗技術（自學）第十五章線粒體疾病的分子生物學檢驗技術（自學）第十六章腫瘤的分子生物學檢驗技術（自學）第十七章藥物代謝與毒副作用相關基因的分子生物學檢驗技術一教學目的通過學習，掌握藥物藥物代謝酶的概念，，熟悉藥物療效和毒副作用相關基因的分類，了解臨藥物相關基因組學。二教學要求(一)掌握藥物藥物代謝酶的概念，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6和TPMT的基因多態性、及分子生物學檢驗方法和相應的臨床意義，G-6-PD基因變異和HLA-B*1502的分子生物學檢驗方法及臨床意義。(二)熟悉藥物療效和毒副作用相關基因的分類。(三)了解藥物相關基因組學。三教學內容(一)藥物代謝酶基因的分子生物學檢驗1細胞色素P450CYP450的基因多態性CYP450基因的分子生物學檢測臨床應用2二硫嘌呤S-甲基轉移酶TPMT的基因多態性TPMT基因的分子生物學檢測臨床應用(二)藥物毒副作用相關基因的分子生物學檢測1葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥分子機制分子生物學檢測及臨床應用2HLA-B1502分子機制分子生物學檢測及臨床應用第十八章移植配型及個體識別的分子生物學檢驗技術（自學）第十九章胚胎植入前分子生物學檢驗技術（自學）第二十章臨床分子生物學檢驗質量控制一教學目的通過學習，掌握室內質量控制的概念，統計學質量控制的方法和室內質控數據評價，熟悉實驗室的設施和環境設置，檢驗性能評價，室間質量評價的概念，了解室內質量控制和室間質量評價的局限性。二教學要求(一)掌握全過程質量控制的各環節，室內質量控制的概念，統計學質量控制的方法和室內質控數據評價。(二)熟悉實驗室的設施和環境設置，檢測方法的選擇，檢驗性能評價，試劑盒和耗材的質量檢驗，室間質量評價的概念。(三)了解室內質量控制的局限性，室間質量評價的目的、程序設計，質評樣本組合設計的原則和室間質量評價的局限性。三教學內容（一）臨床分子生物學實驗室的設施與環境（二）檢測方法與性能評價1檢測方法的選擇2檢測性能評價（三）儀器和外部供應品1儀器和外部供應品的選擇和使用原則2儀器設備的管理3標準品和質控品標準品質控品4試劑盒和耗材的質量檢驗試劑盒的質量檢驗耗材的質量檢驗（四）質量體系文件（五）儀器和檢測系統的維護，功能檢查和校準（六）全過程質量控制1分析前質量控制2分析中質量控制3分析后質量控制（七）室內質量控制1統計學質量控制2室內質量控制數據的評價失控原因的分析與處理陰性質控品失控的原因，處理與預防措施陽性質控品失控的原因，處理與預防措施室內質控數據的周期性評價3室內質量控制的局限性（八）室間質量評價1室間質量評價的目的2室間質量評價的程序設計3室間質量評價樣本的組合設計原則4室間質量評價的局限性Ⅲ教學組織與方法一實施機構：由醫學檢驗系臨床生物化學檢驗教研室執行。二組織內容：教案和講義審核、集體教學備課、教學方法研究、教學手段應用。三教學方法：1理論教學：以啟發式為主，注重培養學生的自學能力。強調課前預習，課后復習，養成