動物基因組DNA和RNA的提取教學課件_第1頁
動物基因組DNA和RNA的提取教學課件_第2頁
動物基因組DNA和RNA的提取教學課件_第3頁
動物基因組DNA和RNA的提取教學課件_第4頁
動物基因組DNA和RNA的提取教學課件_第5頁
已閱讀5頁，還剩47頁未讀， 繼續免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

動物基因組DNA和RNA的提取原理1、核酸的分類DNA(脫氧核糖核酸)主要存在于細胞核的染色體中。核外也有少量DNA,如線粒體DNA(mtDNA),葉綠體DNA(cpDNA),質粒DNA。RNA(核糖核酸)存在于細胞質中,如mRNA,rRNA,tRNA等。除上述DNA,RNA外,還有非細胞形式存在的病李和噬藺體,其或只含DNA,或只合有RNA。2、核酸制各的一般原則核酸的理化性質在細胞內通常與蛋白質結合,以復合物形式存在微于水,不嵱于乙醇,氣仿等有機愴劑在釀性嵱漩中容易降解,在中性或弱堿性嵱漩中較穩定。DNA濾)粘度很大,RNA的粘度較小在強大離心力的作用下,可以從嵱液中沉降下來2、核酸制各的一般原則分離純化檎酸總的原則:①應保證核酸一級結構的究整性;②排除其它分子(蛋白,脂類,多糖類)的訪瘭。核酸純化應達到的要求:①核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機熔劑和過高濃度的金屬離子;②其它生物大分子的污染應降低到錄低程度;⑦排除其乞核酸分子的污樂。核酸制備肘應注意的事項:①盡量簡化操作步驟,縮短提取過程。②減少化學因素對核酸的降解。⑦減少物理因素對核酸的降解:機械剪切力和高④防止核的生物降解:排除核酸酶。核酸酶的抑制和抑制劑降低度,改變PH及鹽的濃度,都利于對核酸酶活性的抑制,但均不如利用核酸酶抑制劑更有利,當然,幾個條件并用更好。對于DNA,抑制DNae活力很容易,但防止機械張力拉斷則更重要。對于RNA,因分子較小,不易被機械張力拉新,但抑制RNae活力較唯,故在RNA提取中設法抑制RNase更重要。DNase抑制①加入少量金屬離子螯合劑,如O,01mo/LEDTA或檸檬酸鈉,DNase基本可以全部失活。②去垢劑、蠶白變性劑及DNase抑制荊也可使DNae失活。RNase抑制①操作要帶手套。②所有景皿要嚴格消拳,⑦試劑處理④低溫揉作⑤在分離過程中要加入一定的RNase押制劑。常用的RNA酶抑制劑·焦磷酸二乙酯(DEPc)抑制強烈、不徹底·異硫氰酸胍有效抑制、分解核蛋白·氧釩核糖核苷復合物有效抑制·RNA酶的蛋白抑制劑(RNasin)有效抑制其它:SDS、尿素、硅藻土等有效抑制上述大部分試劑有致癌之嫌,應謹慎操作!核酸制備中常用的去垢劑核酸本身帶負電荷,結合帶正電荷的委臺質。用于核釀提取的去垢劑,一般都是陰離子去垢去垢荊的作用:1、嵱解膜委白及脂肪,使細胞膜破裂;2、嵱解核糖體上面的蛋白質,使其解聚,將核酸釋放出來;3.對RN

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論