關(guān)于細(xì)菌與病毒的病原學(xué)檢查法第1頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三第一節(jié)細(xì)菌感染的微生物學(xué)檢查法一、細(xì)菌學(xué)診斷形態(tài)學(xué)檢查1.普通光學(xué)顯微鏡檢查法：2.暗視野顯微鏡檢查法：檢查活菌、螺旋體及其動力3.熒光顯微鏡檢查法：病原菌的分離培養(yǎng)生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定:玻片凝集試驗(yàn)動物實(shí)驗(yàn)：毒力、致病性毒力檢測：LD50、ID50，毒素藥物敏感試驗(yàn)：紙片擴(kuò)散法第2頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三二、檢測病原菌成分抗原檢測：凝集試驗(yàn)、對流免疫電泳、酶免疫技術(shù)、免疫熒光技術(shù)核酸檢測：1.核酸雜交技術(shù):Southern印跡雜交、Northern印跡雜交、原位雜交2.PCR技術(shù)3.基因芯片4.16rRNA基因序列分析：編碼rRNA，保守區(qū)、可變區(qū)第3頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三三、抗體的檢測（血清學(xué)診斷）凝集試驗(yàn)：直接、間接、協(xié)同、冷凝集沉淀試驗(yàn)：環(huán)狀、絮狀、雙向、對流電泳補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：取雙份血清，抗體效價(jià)比早期高4倍以上有意義。第4頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三第二節(jié)病毒感染的微生物學(xué)檢查法第5頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三一、形態(tài)學(xué)檢查1.電子顯微鏡檢查直接鏡檢法：107顆粒/ml，電鏡觀察病毒顆粒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)免疫電鏡法（IEM）：標(biāo)本+特異性抗體病毒顆粒聚集電鏡觀察輪狀病毒的糞便、HAV、HBV的血清、皰疹病毒的皰疹液，可早期診斷。2.光學(xué)顯微鏡檢查痘病毒、觀察包涵體、CPE第6頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三二、病毒分離培養(yǎng)的方法1、動物接種常用動物：小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴等；接種途徑：皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔、靜脈等接種；觀察：動物出現(xiàn)感染癥狀，取病變組織進(jìn)一步檢查第7頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三2、雞胚培養(yǎng)：孵化9～14天的雞胚接種途徑有：絨毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊腔、卵黃囊。鑒定：血凝和血凝抑制試驗(yàn)?zāi)蚰仪唤臃N羊膜腔接種第8頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三卵黃囊接種絨毛尿囊膜接種第9頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三3、組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)：單層細(xì)胞培養(yǎng)、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)；原代細(xì)胞培養(yǎng)：由新鮮組織制備二倍體細(xì)胞：二倍體性質(zhì)，傳40~50代，人胚肺成纖維細(xì)胞傳代細(xì)胞系：由突變的二倍體細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞建立的，HeLa細(xì)胞第10頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三三、病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)細(xì)胞的變化：CPE紅細(xì)胞吸附（HAd）：紅細(xì)胞凝集：病毒干擾作用：風(fēng)疹病毒，埃可病毒,Vero細(xì)胞。中和試驗(yàn)（NT）：是病毒在活體內(nèi)或細(xì)胞培養(yǎng)中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗(yàn)空斑形成試驗(yàn)：蝕斑形成單位（PFU），感染性病毒的滴度用PFU/ml表示。四、病毒成分的檢測病毒抗原的檢測：HIV和HBV抗原病毒核酸的檢測第11頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三

ABCA：未感染的成纖維細(xì)胞。B：單純皰疹病毒感染后使細(xì)胞變圓。C：呼吸道合胞病毒感染后出現(xiàn)細(xì)胞融合。第12頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三五、病毒抗體的檢測：中和試驗(yàn)：陽性：可能以前有過隱性感染，用于流行病學(xué)調(diào)查。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：用已知病毒的可溶性抗原檢測病人血清中有無相應(yīng)抗體，作為近期感染的指標(biāo)。第13頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三血凝抑制試驗(yàn)病毒+紅細(xì)胞血凝現(xiàn)象病毒+抗體+紅細(xì)胞血凝現(xiàn)象消失用于流感病毒、副流感病毒的診斷、流行病學(xué)調(diào)查及鑒定病毒的型和亞型。ELISA法：HSV、CMV、EB病毒