關于細菌學檢驗基本技術1第1頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三2主要內容第一節樣本的采集與送檢原則第二節細菌的分離培養方法第三節細菌的形態結構檢查法第四節細菌的生化反應檢查法第五節細菌的血清學檢驗第六節細菌毒素的檢測第七節細菌數量的測定第八節細菌L型檢驗第九節微生物菌種的保藏及保管第2頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三3第一節樣本的采集與送檢原則一、細菌學檢驗樣本的類型正常人體樣本，如排泄物、血液、血清等食品、水產品、化妝品、藥品、消毒及衛生用品、醫療用品及環境（水、土壤、空氣，各種物品）等衛生樣本，包括常規衛生評價、公共衛生事件、環境監測、委托送檢等標本臨床各種感染材料（試劑、樣品、耗材、醫療廢棄物等）動物尸檢或感染材料。第3頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三4二、采樣的一般原則（1）無菌原則采樣用具要無菌且在有效期內；采樣操作程序要無菌；如果采樣部位需要經過皮膚和粘膜時，做好外表面的消毒，防止污染。密封送檢（2）選擇正確的采樣時間分離病原菌時，應早期采樣；最好是病人發病早期、急性期或癥狀典型時；用藥前采樣，或停藥24h采樣，或下一次用藥前采樣用于血清學診斷時，急性期及恢復期采集雙份血清。第4頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三5（3）選擇正確的采樣部位根據感染特點、病程發展及目的菌可能存在的部位，選擇合適的解剖部位采樣。（4）采集足夠量樣本采樣量不能太少，過少樣品會導致假陰性結果；衛生樣本要具有代表性，否則會影響評價的準確性。（5）多樣性采集感染進程復雜的，應多部位或多時間段采樣，以防漏檢。（6）做好采樣記錄記錄樣本類別、采樣時間、地點、采樣量及采樣人等信息。第5頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三6三、樣本送運原則（1）選擇適當的溫度和時間送檢時間長或溫度高，菌相將發生改變，影響結果的準確性；應遵循盡快送檢的原則；常規細菌學檢查，不超過2h，最好1h內，保存在4℃中不超過24h。含有腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等的樣品，低溫自溶，應在25℃常溫送檢或用便攜式培養箱送檢第6頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三7（2）選擇正確的氣體環境針對厭氧菌樣本，注意隔絕空氣氧；如使用專門的厭氧采樣瓶或試管，或人為的排出空氣，或直接接種于厭氧培養基或放在厭氧袋、厭氧盒中（3）保持密閉狀態第7頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三8便攜式恒溫培養箱便攜式冷藏保溫箱厭氧培養袋厭氧罐厭氧瓶第8頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三9第二節細菌的分離培養方法細菌的分離培養提供細菌生長所需的各種條件（營養、溫度、濕度、酸堿度和氣體），從樣本中獲得該種細菌活的純化物的過程。主要內容包括培養基制備、細菌接種方法、細菌培養方法、細菌的生長現象第9頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三10第10頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三11一、培養基的制備培養基是指經人工配制，將供細菌生長繁殖需要的各種營養物質按比例配制而成的基質，可用于細菌的分離純化、傳代、鑒定、菌種保存等。第11頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三12（一）培養基的主要成分及其作用P261.

營養物質：碳源、氮源及其它營養物質（蛋白胨、肉浸液、牛肉浸膏、糖類、血液、雞蛋、動物血清、酵母粉、生長因子、無機鹽類）。2.

水分：常用蒸餾水。3.

凝固物質：瓊脂、明膠4.

抑制劑和指示劑：如膽鹽、抗生素、酸堿指示劑、氧化還原指示劑等。第12頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三13（二）培養基制備的一般程序調配矯正pH過濾澄清分裝滅菌檢定保存稱量、溶解氫氧化鈉、鹽酸（0.1mol/L、1mol/L）高出所需pH0.1-0.2個單位先調pH，沸水加熱5-10min，冷卻后過濾；濾紙、絨布等過濾液體：不超過容器2/3；斜面：1/５管；半固體培養基：1/3管；高層斜面：1/4～1/3管；平板：13~15ml耐高壓：121℃，15min含糖：115℃，15min雞蛋、牛奶等：間歇滅菌3天3次不耐高溫的血清、尿素等：濾過除菌外觀：完整性、水分浸入、色澤異常、培養基外溢、干裂等棄去。無菌試驗：放入36±1℃過夜，有菌生長棄去。功能檢查：標準菌株培養24～48h，無菌或生長不好。重復接種結果仍同前，棄去。冷藏，不宜過久。防止干涸、變質和污染。第13頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三14所用器材及過程

培養基、玻璃器皿天平、藥匙

第14頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三15以量筒裝取適當量蒸餾水于玻璃容器中于玻璃容器上標示培養基名稱

第15頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三16放上秤藥紙並歸零以秤藥匙舀出適當量藥品(請看培養基配方上說明)

第16頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三17傾倒培養基時小心不要沾到玻璃壁上

第17頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三18清理配藥桌面與天平清洗秤藥匙，擦干放回藥品放回藥品柜

第18頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三191.按物理性狀分類液體培養基半固體培養基（瓊脂含量0.5~1%）固體培養基（瓊脂含量2~2.5%）（三）培養基的種類第19頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三20液體培養基主要用于增菌培養、生化試驗等沉淀生長混濁生長表面生長液體培養基中生長第20頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三21

制備平板、斜面、高層及高層斜面，用于細菌分離培養、鑒定和保存、増菌等。固體培養基第21頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三22

觀察微生物的動力，分類鑒定、保存菌種以及噬菌體效價滴定等。

有鞭毛，混濁生長無鞭毛，沿穿刺線生長半固體培養基第22頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三232.按成分分類合成培養基由化學物質和成分已知的各種物質所組成，可以是無機鹽類，或無機鹽類加有機物質。各批次性質穩定，用于細菌代謝、分類、菌種選育、遺傳分析等情況使用。天然培養基化學成分不完全清楚，各批物質的成分很難一致，如蛋白胨、牛肉膏、血液、雞蛋。成本較低，在細菌學研究中常用。第23頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三243.按用途分類（1）基礎培養基含有大部分細菌生長繁殖所需的最基本的營養成分。普通肉湯、營養瓊脂、蛋白胨水等（2）營養培養基在基礎培養基上加入葡萄糖、血液、血清等營養成分，以滿足對營養要求較高和需要特殊生長因子的細菌生長繁殖。血液瓊脂培養基、血清肉湯培養基、巧克力血瓊脂培養基。（3）增菌培養基在普通培養基中加入一些某種微生物特別喜歡的營養物質，以增加這種微生物的繁殖速度，逐漸淘汰其它微生物。多為液體培養基，一般具有選擇性抑制作用的抑制劑。有助于目的菌的增殖第24頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三25常用増菌培養基

膽鹽乳糖培養基（BL）大腸桿菌增菌亞硒酸鹽增菌培養基沙門氏菌增菌亞硒酸鹽半胱氨酸增菌培養基食品中沙門氏菌增菌四硫磺酸鈉亮綠基礎培養基沙門氏菌增菌GN肉湯培養基志賀氏菌增菌堿性蛋白胨水培養基霍亂弧菌增菌7.5%氯化鈉肉湯培養基金黃色葡萄球菌增菌緩沖蛋白胨水培養基沙門氏菌增菌血液增菌培養基血液中細菌增菌SCDLP液體基礎培養基化妝品中細菌增菌第25頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三26（4）選擇性培養基多為固體培養基，加有抑制物質，抑制其它非目的菌的生長或使其生長不佳。第26頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三27常用的選擇培養基

名

稱

用

途SS瓊脂培養基

沙門氏和志賀氏菌屬分離HE瓊脂培養基志賀氏菌分離鑒別伊紅美藍瓊脂培養基

大腸桿菌、產氣桿菌分離鑒別麥康凱瓊脂培養基（MacC）腸道致病菌分離甘露醇高鹽瓊脂培養基）綠膿桿菌分離鑒別XLD瓊脂培養基志賀氏、沙門氏菌分離中國藍瓊脂培養基腸道菌分離鑒別堿性瓊脂培養基霍亂弧菌分離高鹽蔡氏瓊脂培養基真菌、酵母菌分離第27頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三28（5）鑒別培養基利用各種細菌分解糖類和蛋白質等的能力及其代謝產物的不同，在此類培養基中加入了某些特定的作用底物，用于檢查各種細菌的生化反應，以鑒別和鑒定細菌。名稱用途蛋白胨水培養基靛基質和霍亂紅試驗乳糖膽鹽發酵培養基大腸桿菌發酵乳糖試驗0.5%乳糖發酵培養基腸道菌生化試驗（復發酵）半固體培養基動力試驗和菌種保存三糖鐵瓊脂培養基（TST）腸桿菌糖發酵及硫化氫反應氰化鉀基礎培養基沙門氏菌分離脫羧酶試驗對照培養基細菌脫羧酶試驗第28頁