名詞解釋RNAi：由一類小分子RNA介導基因沉默的機制稱為RNA干擾（RNAi）信號轉導：細胞通訊啟動細胞內一系列化學反應，導致一組成分的活性、水平或亞細胞定位改變，最終引起細胞反應，包括改變代謝物濃度和代謝速度，最終導致細胞的生長、分裂、分化、衰老、死亡速度改變，這一過程稱為信號轉導。基因組：細胞或生物體中，一套完整單體的遺傳物質的總和即為基因組啟動子：是指基因序列中能被RNA聚合酶識別、結合、，從而形成轉錄起始復合物并啟動轉錄的DNA序列，大多數位于基因（或操縱子）轉錄區的上游，具有方向性，屬于調控元件。基因診斷：基因診斷屬于分子診斷，是指直接檢測基因組中致病基因或疾病相關基因的結構異常或表達水平的改變，或病原體基因的存在，從而對人體健康做出評價，或對人體疾病做出診斷。逆轉錄：逆轉錄又稱反轉錄，是以RNA為模板，以dNTP為原料，在逆轉錄酶的催化下合成DNA的過程。這是一個從RNA向DNA傳遞遺傳信息的過程，與從DNA向RNA傳遞遺傳信息的轉錄過程相反，所以稱為反轉錄。cDNA文庫：是指某生物某一發育時期所轉錄的mRNA全部經反轉錄形成的CDNA片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。密碼子：信使RNA鏈上（或DNA）決定一個氨基酸的相鄰的三個堿基，亦稱三聯體密碼。蛋白質組學：應用組學技術研究一定條件下的蛋白質組，包括組成、結構、性質、功能、分布、相互作用和條件變異等，建立和應用蛋白信息數據庫。基因治療：是指在基因水平上治療疾病，包括基因添加、基因置換、基因修飾、基因干預、自殺基因治療、免疫基因治療等。簡答題基因治療方法和步驟基因治療是指在基因水平上治療疾病，包括基因添加、基因置換、基因修飾、基因干預、自殺基因治療、免疫基因治療等。基因治療的方法主要包括(1)將正常基因導入病變細胞，表達產物參與細胞代謝。(2)將反義核酸導入病變細胞，抑制致病基因的過度表達。(3)將特定基因導入非病變細胞，表達特定產物，發揮治療作用。基因治療的一般步驟包括(1)選擇和制備正常基因；(2)選擇基因治療的靶細胞；(3)將治療性基因導入細胞；(4）轉染細胞篩選和正常基因鑒定如何分別從DNA，mRNA和蛋白質水平上Knockdown基因的表達。提示：DNA水平可以從啟動子著手，突變啟動子或修飾啟動子使其沉默，或者阻斷與其結合的轉錄因子活性；RNA水平是采用RNA干擾實驗最好；蛋白質水平是用抑制劑或抗體或負顯性（Dominantnegative,也就是過表達某結構正常但沒有活性蛋白，從而競爭性抑制內源正常蛋白）DNA水平上：（1）基因突變：DNA甲基化；基因重排，例如置于一個沉默子之中（2）影響轉錄：原核生物上，突變啟動子或修飾啟動子使其沉默；阻斷σ因子與啟動子結合或抑制其活性。真核生物上，阻斷轉錄因子的活性，使RNA聚合酶無法轉錄基因，使基因表達受到抑制等等。（3）RNA生物合成抑制劑:堿基類似物，核苷類似物，模板干擾劑，RNA聚合酶抑制劑。RNA水平上：改變mRNA的穩定性，從而影響翻譯效率；使5’非翻譯區長度小于12nt，；翻譯起始因子磷酸化利用RNA干擾技術，介導基因沉默：①miRNA與含有同源序列的mRNA結合，阻遏其翻譯或促進其降解，產生基因沉默效應。②小干擾RNA能與目的基因mRNA結合，促進其降解，產生基因沉默效應。蛋白質水平上：（1）阻斷或抑制蛋白質加工后的修飾；促進翻譯阻遏蛋白（2）蛋白質生物合成抑制劑：直接抑制蛋白質合成的抗生素。（3）促進蛋白質泛素化，加快降解。（3）介導蛋白質的負顯性：過表達某些結構正常但沒有活性的蛋白，從而競爭性的一直內源正常蛋白。簡述PCR引物設計原則。引物定位基因組DNA引物序列應定位于保守序列區域，且在其它區域沒有同源序列（序列同源性一般不超過70%）；cDNA引物序列應盡量位于編碼區內，斷裂基因cDNA上游引物和下游引物應盡量定位于不同外顯子內。引物長度控制在10~40nt，多數20~30nt。引物的末端3’端與模板嚴格互補，特別是末端的兩個核苷酸，最好是S（即G或C）,但不能有連續的3個S。對大引物而言，5’端序列不必嚴格互補，甚至可以修飾。引物組成G和C含量應控制在40%~75%。引物序列引物之間不能存在互補序列，特別是3’端不能互補。引物內部不能存在可導致形成發夾結構的反向重復序列。引物所含單核苷酸重復序列長度不能超過5nt。引物熔點引物熔點Tm=2(A+T)+4(G+C)。引物熔點應該一致（相差不超過5℃）。根據被測定的對象，簡述分子雜交印跡的種類及其特點、應用上優缺點。分為DNA印跡法和RNA印跡法。DNA印跡法還包括斑點印跡法、夾縫印跡法、菌落雜交法和噬菌斑雜交法。由此衍生的有蛋白質印跡法。、DNA印跡法，要先電泳后變性、轉移。RNA印跡法為先變性后電泳、轉移。2）、RNase（核糖核酸酶）無處不在，可以將RNA降解為核苷酸，因而從制備RNA到分析都要絕對消除外源RNase的污染，并盡量抑制內源性RNase。DNA印跡法則無此要求。3）、RNA印跡法不能采用堿變性，因為采用堿變性會導致RNA水解，所以只能采用甲醛、乙二醛、二甲基亞砜等變性。（RNA印跡法可以用于定性或定量分析組織細胞內的總RNA或某一種特異RNA，特別是分析mRNA的長度和含量。）4）、斑點雜交法和夾縫雜交法的特點是用樣量少、操作簡便，提取的核酸不需要進行電泳和轉移，但在同一張固定膜上可以點多個樣本。5）、蛋白質印跡法也是由電泳分離、轉移固定和檢測分析等組成。只能用電轉移法進行轉移。用抗原-抗體反應檢測目的蛋白.簡答題克隆（篩選、測序、擴增、驗證）疾病相關基因的方法。定位克隆的策略消減雜交的策略隆（篩選測序擴增驗證）疾病相關基因的方法。篩選疾病相關基因（基因芯片，扣減雜交，蛋白質組學）①利用基因芯片篩選相關基因。基因芯片也稱DNA芯片，基于核酸分子雜交，專以檢基因聚合酶特點：重組DNA技術常用的10種工具酶1)限制性內切酶：識別特異序列，切割DNA(2)DNA連接酶：(3)dna聚合酶Ⅰ：a.合成雙鏈cDNA中第二條鏈;b.缺口平移制做探針;c.DNA序列分析;d.填補3′末端。(4)Taq酶：催化pcr反應，聚合DNA(5)反轉錄酶：a.合成cDNA;b.替代DNA聚合酶Ⅰ進行填補，標記或DNA序列分析(6)多聚核苷酸激酶：