10臨床生物化學試驗原理、分析方法及檢測技術中國中醫(yī)爭論院廣安門醫(yī)院臨床檢測中心生物化學試驗——是把化學(分析技術)和生物化學(試驗反響原理)的方法應用于疾病的診斷、治療、監(jiān)控的試驗分支。一、試驗反響原理及分析方法〔理論依據(jù)〕二、試驗檢測技術〔手段〕生化儀的分析技術。三、質(zhì)量把握程序〔質(zhì)量保證〕室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評、儀器、試劑、人員五要素。四、臨床意義〔目的〕詢問效勞、特別結(jié)果的解釋。試驗反響原理及分析方法(理論依據(jù))一個生物化學試驗的反響原理設計，首先要找出所檢測的化學特性，如測定體液〔首先是血液〕中酶的含量血液中除少數(shù)酶〔如凝血溶血酶、銅氧化酶及假性膽堿脂酶等〕含量較多外，血液正常生理狀況下含量微乎其微。一般每毫升含微微克〔Pg〕水平，要直接測定如此微量物質(zhì)是相當困難的。用免疫化學方法可測定全部酶蛋白分子含量〔不管其有無活性〕而用化學方法測定只能測定酶的催化活性，間接計算出酶的含量。目前利用酶具有催化活性蛋白質(zhì)、這樣也就建立起利用酶促反響的一級反響測定代謝物的方法。一級反響—反響速度〔如測定血糖、臨床化學方法的分類特別是自動生化儀方法的特點準確的優(yōu)點，特別適合于微量的生物體體液中各項物質(zhì)測定。于很難把握測定時間和反響溫度，很難準確記錄反響過程中吸光度變化，因此，毫不驚異在很長一段時間內(nèi)我們所使用的方法，都是在呈色反響到達完全或者反響到達平衡時，吸光度到達穩(wěn)定時才進展測定。即所謂平衡法或終點法。但自從自動生化儀消滅后，從根本上轉(zhuǎn)變了上述狀況。通過各項先進技術，人們可以準確測定反響的動態(tài)過程。并可以準確計算任何一段反響時間內(nèi)的反響速率，這樣大大開闊了大大提高了工作效率，還可進展一些用常規(guī)比色方法不能進展的測定。如測定酶反響的初速度〔V〕等等。測酶初速度〔V〕只能用分光光度法。o o解。生化自動特點：準確測定反響的動態(tài)過程；準確計算任何一段反響時間內(nèi)的反響速率；除經(jīng)典的終點法外還可以進展動態(tài)測定。分析方法的分類表1 分析方法分類分析方法中的測定步驟物理化學方法 物理方法動態(tài)法平衡法 動態(tài)法 平衡法動態(tài)法可變信號法 固定信號法nm氮化反響后比色定量測定生成的有色偶氮化合物。絕大多數(shù)化學反響都經(jīng)受一個類似圖1的反響過程。圖中虛線明顯將反響分為二個截然不同時期，左面期中所測的產(chǎn)物濃度在不斷變化之中，由傳感〔Sensor〕所得到的信號也在相應轉(zhuǎn)變之中。如所用的方法主要是依據(jù)這期間所獲得的信號進展計算，這稱之為動態(tài)法。相應在圖中虛線右邊時期，傳感器所得到信號相對不變，如依據(jù)號無變化，不愿定意味著反響完全到達終點。要求遠沒有動態(tài)法那樣嚴格，所以不要求特別儀器，而且周密度較高，格外適宜于一般儀器和試驗室使用。圖1在酶作用一段時間后，由于基質(zhì)消耗逆反響消滅，底物的抑制作用等，反響速率愈來愈慢，最終到達平衡期。此時基質(zhì)和產(chǎn)物濃度不消滅變化，因此很清楚如要測酶活性，只能在動態(tài)期測定酶所催化反響的速率。所以嚴格說測酶方法不管用自動生化儀，記錄或分光光度計或一般比色計都包括在動態(tài)法的范圍內(nèi)。平衡法〔終點法〕定時間和溫度要求不嚴格，所以簡潔把握，計算結(jié)果便利，周密度好，但由于反響到達平衡需要確定時間，一般都需格外鐘以上，因此整個操作時間長，工作效率低，目前不少自動生化儀特別是離心式改用動態(tài)法。即使承受平衡法時也對方法進展修改，設法縮短動態(tài)153一個標本到達平衡時就可分別進展終點測定。血中各種代謝物質(zhì)。這類方法和經(jīng)典的平衡法有所區(qū)分，下面做一個簡潔表達：這類方法特點是被測物質(zhì)〔酶反響的基質(zhì)〕在酶反響過程中完全被轉(zhuǎn)化或消耗掉〔即到達反響終點克分子吸光系數(shù)等不難將結(jié)果計算出來，其缺點是反響時間較長，特別不適合于離心式自動。另有少數(shù)酶反響，基質(zhì)并未完全消耗掉，只是到達一個動態(tài)平衡，此時往往需要同時作標準管。動態(tài)法(連續(xù)監(jiān)測法)測量反響延緩時間而到達此點。從六十年月開頭，動態(tài)法得到快速進展，這是由于一系列高技術進展的結(jié)果：消滅了高反之動態(tài)法的使用也大大推動臨床化學進展，僅用有限人力可以測定成十倍原來的工作量。如測酶活性全部使用此方法。試驗檢測技術〔生化的分析原理〕〔碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪來完成的。臨床上蛋白20〔計算機、顯示器、打印機〕附件等。全自動生化還配有電解質(zhì)系統(tǒng)〔ISE。OD比色分析的根本原理很多化學物質(zhì)的溶液具有顏色〔無色的化合物也可以加顯色劑經(jīng)反響生成有色物質(zhì)有色溶液的溶度轉(zhuǎn)變時，顏色的深淺也隨之轉(zhuǎn)變，濃度愈大，顏色愈深。因此，可以用比較溶液顏色深淺的方法來測定有色溶液的濃度。這種方法叫做比色分析法。一、朗伯—比爾定律一局部則透過溶液，如以下圖。他們之間有以下關系：波長的選擇：由于在實際測定時，標準溶液和待測溶液都要加以稀釋，而且在報告結(jié)果時，多以100求待測溶液濃度的方法有：直接比較法〔計算法、因數(shù)法和標準曲線法三種。這些方波長的選擇：則靈敏度很低，導致測量結(jié)果不準確。選擇濾光的一般原則是：濾光片最大透過的光線應當什么叫做互補色呢？但凡兩種顏色相加后能得到白色，則此兩種顏色就稱為“互補色圖中直接相對的兩種顏色，均為互補色。綠白藍白藍橙青藍橙青藍紅 蘭紫片和有色溶液具有相像的透光特性，與它們本身顏色一樣的色光，能夠最大限度地透過。而與它們本身顏色成互補的色光都能被最大地吸取。濾光片待測溶液和濾光片的顏色濾光片待測溶液顏色顏色波長范圍〔nm〕綠紫300-400黃 綠青紫430-440黃蘭440-450橙 紅蘭綠450-480紅綠蘭490-530青 紫黃綠540-560蘭黃570-600蘭 綠橙紅600-630綠 蘭紅630-780質(zhì)量把握程序〔質(zhì)量保證〕IQCCV%。室間質(zhì)評EQC包括準確度，一般用偏差。檢測系統(tǒng)的穩(wěn)定性以及儀器的校準。自動生化使用中的校準對自動生化檢測系統(tǒng)周密度和準確度的驗證。儀器、試劑、校準品、操作程序等的組合為——檢測系統(tǒng)。試驗結(jié)果具有牢靠的溯源性。檢測系統(tǒng)包括四部格外，手工操作還必需包括具體操作人員。所以我們認為在檢測系統(tǒng)測系統(tǒng)的共有性能。〔標〕準品，包括校〔標〕準品的樹木、類型和濃度；如有可能，校〔標〕準品應溯源到參考方法和/或參考物質(zhì)；確立校準的頻度。校準驗證：有可能，方法應追溯到參考方法或值的參考品；確定校〔標〕準品的數(shù)定時必需包括一個最小值〔或零，和此范圍上限的最大值。至少每六個月以及有以下狀況發(fā)生時，進展一次校準：可以不進展校準。檢測性能。后，不能識別出和訂正問題時。全部進展過的校準和校準驗證工作都必需記錄并寫成文件。PH、最適底物濃度時〔每分鐘催化一個微摩爾底物變化所需要的酶量。〔Mr〕或相對原子量〔Ar。mg/dlmmol/L試驗中盡量避開基質(zhì)效應。體外診斷試劑盒性能指標CAPRMO16#2，更換試劑批號，質(zhì)控消滅漂移，儀器做保養(yǎng)后重要零件更換時作定標。mmol/Lx0.0113。干擾性乳糜到達500mg/dl<7%膽紅素到達32mg/dl影響<10%抗壞血酸到達20mg/dl影響<1%EDTA47，－203為什么要定標？多長時間要定標一次？定標的意義：定標就是要找出一個參考點，就是一個K值〔或F值。它是由儀器與試劑狀態(tài)確定下來的。當我們測定一個標本時，無論您是用手工的方法或全自動生化，測出來的值只是一個吸光度，這個吸光度對我們沒有什么意義，我們要把這個吸光度轉(zhuǎn)化成一個濃度或是酶的活性。那就要乘上一個KK個吸光度。標準濃度－試劑空白K=A標準－A試劑空白〔0〕標準液的濃度我們是知道的，這兩個吸光度可以由儀器測出，這樣就得出一個KKK義，可以打算標本的準確性。K值的打算因素：我們看看K〔標準液最好與標本一樣是以血清為基質(zhì)的K個主要因素。如何確定K值是正確的？一般我們用質(zhì)控血清來檢查，最好是兩種水平的質(zhì)控來檢查，KKKK值的真面目：K值實際上代表了斜率，截距代表試劑空白，試劑空白每天都在變化，KK多長時間定一次標適宜？可以解決，有些工程要做兩點定標。酶的工程如何確定K值：一是計算出來的理論K值；TV×1000K= SV×L×ε類的工程，也有酶類的工程。測定特種蛋白為什么要用多點定標透射免疫比濁時，由于抗原與抗體結(jié)合的過程中，吸光度與濃度之間不成線性關系，一般程直線回歸運算所測結(jié)果僅在標準濃度上下波動，真正的過底過高值無法測定。生化自動分析中國進展概況41。1生化自動分析在中國的進展分期分期 年月 主要特征生疏時期 1974-1980 連續(xù)流淌式生化，開頭研制生化。從生疏到應用—自動化1980-198418型號共幾十套。的最初階段

第一個中外〔美〕合作試