2022-2023學(xué)年高二下生物期末模擬試卷請(qǐng)考生注意：1．請(qǐng)用2B鉛筆將選擇題答案涂填在答題紙相應(yīng)位置上，請(qǐng)用0．5毫米及以上黑色字跡的鋼筆或簽字筆將主觀題的答案寫在答題紙相應(yīng)的答題區(qū)內(nèi)。寫在試題卷、草稿紙上均無效。2．答題前，認(rèn)真閱讀答題紙上的《注意事項(xiàng)》，按規(guī)定答題。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求）1．下圖為色盲患者的遺傳系譜圖。以下說法正確的是（）A．Ⅱ－3與正常男性婚配，后代都不患病B．Ⅱ－3與正常男性婚配，生育患病男孩的概率是1／8C．Ⅱ－4與正常女性婚配，后代不患病D．Ⅱ－4與正常女性婚配，生育患病男孩的概率是1／82．某生物興趣小組的同學(xué)用河水、池泥、水藻、植食性小魚、廣口瓶、凡士林等材料制作了3個(gè)生態(tài)瓶(下圖所示)。下列說法中錯(cuò)誤的是A．甲瓶中的小魚很快死亡是因?yàn)槠績?nèi)分解者數(shù)量過少B．乙瓶中的生物存活的時(shí)間相對(duì)較長C．丙瓶中的分解者主要存在于河水及池泥中D．若想維持穩(wěn)定性，丙瓶不應(yīng)放在黑暗中3．下列有關(guān)細(xì)胞共性的敘述，正確的是A．都具有細(xì)胞膜但膜不一定具有膽固醇B．都具有細(xì)胞核但遺傳物質(zhì)不一定是DNAC．都能進(jìn)行細(xì)胞呼吸但不一定能合成ATPD．都能合成蛋白質(zhì)但合成場(chǎng)所不一定是核糖體4．在分離、純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)中，劃線接種（甲）、培養(yǎng)結(jié)果（乙）如下圖，且甲乙的對(duì)應(yīng)位置不變。有關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是（）A．配制培養(yǎng)基時(shí)需進(jìn)行髙壓蒸汽滅菌B．甲中a區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置C．連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落D．圖示實(shí)驗(yàn)過程中接種環(huán)灼燒了5次5．下列關(guān)于自然選擇的敘述，正確的是A．自然選擇是生物進(jìn)化的唯一動(dòng)力和機(jī)制B．自然選擇加速了同一物種不同種群間生殖隔離的進(jìn)程C．自然選擇導(dǎo)致生物的不定向變異積累成定向的變異D．自然選擇獲得的性狀都可以通過遺傳而積累6．草原植物物種多樣性可用樣方法調(diào)查，下列做法正確的是①在植物密集處選取樣方地②根據(jù)植物種類確定樣方面積③若調(diào)查區(qū)域?yàn)檎叫蔚貕K，宜用五點(diǎn)取樣法④統(tǒng)計(jì)樣方內(nèi)植物的個(gè)體數(shù)時(shí)，應(yīng)遵循計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右原則A．①③B．②④C．②③④D．①②④二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）下圖表示利用細(xì)菌中抗枯萎病基因培有抗枯萎病番茄的過程，其中①~⑦表示操作步驟，A、B表示相關(guān)分子，CE表示培養(yǎng)過程，其中D過程表示細(xì)菌與番茄細(xì)胞混合培養(yǎng)。請(qǐng)回答下列問題：

（1）先從細(xì)菌中提取DNA分子，再通過______技術(shù)擴(kuò)增，以獲取抗枯萎病基因。該技術(shù)的關(guān)鍵是設(shè)計(jì)引物，在設(shè)計(jì)引物時(shí)的依據(jù)是______。（2）培育抗枯萎病番茄最核心的步驟是_________（填圖中序號(hào)），B中包括的結(jié)構(gòu)有_______。（3）③過程需要用_______處理細(xì)菌，D過程常采用的方法稱為______；步驟⑥包括的兩個(gè)重要過程是_____。（4）經(jīng)過⑦過程得到的番茄植株，檢測(cè)其是否抗枯萎病的方法是_______。8．（10分）某XY型性別決定動(dòng)物皮毛的黑色對(duì)白色為顯性，相關(guān)等位基因用A、a表示，但是當(dāng)另一對(duì)同源染色體上的基因（B、b）中的B存在時(shí)，含A基因的個(gè)體表現(xiàn)為白色。現(xiàn)取白色純合品種的兩只該動(dòng)物甲和乙交配，得F1，F(xiàn)1中的雌雄個(gè)體相互交配得F2，結(jié)果如表。回答下列問題：（1）基因A、a與B、b的基因座位________（填“相同”或“不同”）。（2）親本乙的基因型為_____，F(xiàn)1雌果蠅產(chǎn)生的配子為_____。寫出甲乙雜交產(chǎn)生F1的遺傳圖解__________。（3）F2雌性個(gè)體中雜合子有_____________種基因型。令F2中的白色雌性個(gè)體與黑色雄性個(gè)體隨機(jī)交配，生出白色雌性純合子的概率為__________。9．（10分）前年冬季，我國北方再次爆發(fā)流感。專家指出，接種流感病毒疫苗仍是預(yù)防的有效措施。流感病毒為RNA病毒，M基因編碼流感病毒表面抗原（M蛋白）。請(qǐng)回答下列問題：（1）由病毒的RNA通過逆轉(zhuǎn)錄獲得的病毒DNA，若要通過PCR技術(shù)擴(kuò)增M基因，關(guān)鍵是設(shè)計(jì)M基因?qū)?yīng)的________。（2）構(gòu)建M基因表達(dá)載體所用的工具酶是________。（3）為保證M基因的表達(dá)，重組載體上應(yīng)含有特定的________（選填“復(fù)制原點(diǎn)”“啟動(dòng)子”或“標(biāo)記基因”），以便于被受體細(xì)胞的RNA聚合酶所識(shí)別，催化轉(zhuǎn)錄過程。（4）若要將M基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，以大量生產(chǎn)疫苗，通常先用鈣離子處理大腸桿菌。其目的是________。（5）新型疫苗——“DNA疫苗”是將含M基因的重組表達(dá)載體直接導(dǎo)入人體內(nèi)，在人體細(xì)胞內(nèi)通過M基因的表達(dá)產(chǎn)生M蛋白，刺激機(jī)體通過免疫過程，產(chǎn)生________，提高機(jī)體的免疫能力。10．（10分）請(qǐng)分析回答與微生物有關(guān)的問題：（1）微生物接種方法很多，最常用的是平板劃線法和_________。平板劃線時(shí)，接種環(huán)通過________滅菌，在第二次及以后的操作時(shí)，總是從上一次的末端開始，這一樣做的目的是_________________。（2）要從土壤中分離純化產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌時(shí)，常常需要進(jìn)行選擇培養(yǎng)，目的是__________，然后再接種并培養(yǎng)，接種時(shí)挑取了菌液在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中1塊平板的各劃線區(qū)均未見菌落生長，最可能的原因是_________________。（3）為了統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，在細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1ml，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191，則每克士壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量___________個(gè)。對(duì)菌落數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)時(shí)，應(yīng)選取菌落數(shù)日穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣做的原因是_______________________________。（4）為長期保存純化的優(yōu)質(zhì)菌種，可以采用__________________的方法。11．（15分）回答下列（一）、（二）小題：（一）以海藻酸鈉為載體固定化米曲霉生成的果膠酶。為研究海藻酸鈉濃度對(duì)果膠酶固定化率的影響，將不同濃度的海藻酸鈉分別與果膠酶混合后，過濾得到的固定化酶和上清液，然后檢測(cè)它們的酶活性，結(jié)果見下表。海藻酸鈉濃度/%2.02.53.03.54.04.55.0上清液酶活性/U12711200113810801019966938固定化酶酶活性/U87194310051062112411761205固定化率/%40.744.046.949.652.554.956.2請(qǐng)回答：（1）果膠酶可以通過米曲霉等微生物來生產(chǎn)，____________是篩選高表達(dá)菌株的最簡便方法之一。若需要對(duì)所得菌種進(jìn)行分離計(jì)數(shù)，應(yīng)采用____________法進(jìn)行接種。（2）3，5二硝基水楊酸(DNS)與果膠水解的主要產(chǎn)物____________共熱能夠產(chǎn)生棕紅色氨基化合物，在一定范圍內(nèi)果膠水解產(chǎn)物的量與呈色物溶液顏色成正比，在550nm處測(cè)定溶液____________可算出果膠水解的主要產(chǎn)物含量，從而計(jì)算果膠酶酶活。（3）在合適條件下，將果膠酶與海藻酸鈉混合后，滴加到一定濃度的鈣離子溶液中，使液滴形成凝膠固體小球，該過程是對(duì)酶進(jìn)行________________________。隨著海藻酸鈉濃度的升高，上清液中果膠酶酶活性逐漸________。當(dāng)海藻酸鈉濃度≥4%時(shí)，溶液黏度高，固定化時(shí)幾乎不成球，不利于固定化酶的回收，選取濃度為____________的海藻酸鈉為載體，可得到較好的固定化效果。（二）當(dāng)血糖濃度增加時(shí)，葡萄糖進(jìn)入胰島β細(xì)胞引起系列生理反應(yīng)，如下圖所示。請(qǐng)回答：（1）當(dāng)ATP升高引起ATP敏感的K+通道關(guān)閉，此時(shí)靜息電位的絕對(duì)值___________（填“增大”、“減小”或“不變”）；此時(shí)觸發(fā)了Ca2+大量內(nèi)流，進(jìn)而___________（填“促進(jìn)”或“抑制”）胰島素的釋放，該過程中細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的電位變化情況為___________。（2）胰島β細(xì)胞中具有生物學(xué)活性的胰島素存在于由___________形成的小泡中，據(jù)圖可知促進(jìn)胰島素分泌的刺激是_________________。機(jī)體胰島素濃度升高會(huì)引起靶細(xì)胞膜上的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體的數(shù)量增多，其意義是___________從而降低血糖濃度。（3）如果將正常胰島β細(xì)胞分別接種于含有5.6mmnol/L葡萄糖（低糖組）和16.7mmol/L葡萄糖（高糖組）的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)一段時(shí)間后分別檢測(cè)二組由養(yǎng)液中胰島素的含量，發(fā)現(xiàn)高糖組釋放胰島素多。此結(jié)果說明______________________。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求）1、B【解析】

A、Ⅱ-3與正常男性婚配，如果Ⅱ-3是攜帶者，后代男孩可能患病，A錯(cuò)誤；B、Ⅱ-3與正常男性婚配，生有患病男孩的概率是1/8。因?yàn)棰?3是攜帶者的可能性占1/2，攜帶者與正常男性婚配生有患病男孩占1/4，二者相乘即為1/8，B正確；C、Ⅱ-4與正常女性婚配，如果正常女性是攜帶者，后代男孩可能患病，C錯(cuò)誤；D、Ⅱ-4與正常女性婚配，生育患病男孩的概率是1/4，D錯(cuò)誤。故選B。2、A【解析】

甲瓶中小魚很快死亡的原因是小魚過多，瓶中水藻不能制造足夠的氧氣，小魚因缺氧致死，與分解者多少無關(guān)，A錯(cuò)誤；水藻豐富，小魚適當(dāng)，氧氣、有機(jī)物等完全可以自產(chǎn)自銷，所以可以生活時(shí)間最長，B正確；分解者主要存在于河水和河泥中，C正確；丙瓶在黑暗中水藻不能進(jìn)行光合作用制造氧氣，所以不會(huì)平衡。若想維持生態(tài)平衡，丙瓶應(yīng)放在散射光下，D正確。【點(diǎn)睛】本題考查生態(tài)瓶，意在考查考生識(shí)記所列知識(shí)點(diǎn)，并能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論的能力。3、A【解析】膽固醇是構(gòu)成動(dòng)物細(xì)胞膜的重要成分之一，所有細(xì)胞都具有細(xì)胞膜，但膜不一定具有膽固醇，A正確；原核細(xì)胞沒有細(xì)胞核，所有細(xì)胞的遺傳物質(zhì)都是DNA，B錯(cuò)誤；所有細(xì)胞都能進(jìn)行細(xì)胞呼吸，都能合成ATP，C錯(cuò)誤；核糖體是合成蛋白質(zhì)的場(chǎng)所，所有細(xì)胞都有核糖體，D錯(cuò)誤。4、B【解析】

平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。【詳解】為了能徹底滅菌，配制的培養(yǎng)基需進(jìn)行髙壓蒸汽滅菌，A正確；起始劃線的區(qū)域長出的菌落多且密，根據(jù)甲乙對(duì)應(yīng)區(qū)域?qū)Ρ龋字衋區(qū)域?yàn)閯澗€的結(jié)束位置，B錯(cuò)誤；連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落，C正確；由于每次使用接種環(huán)前后都要灼燒滅菌，從圖示甲中4次劃線接種就可推出，接種過程中接種環(huán)至少灼燒了5次，D正確。5、B【解析】

自然選擇是指在生存斗爭(zhēng)中，適者生存、不適應(yīng)者被淘汰的過程，自然選擇使種群基因頻率發(fā)生定向改變，導(dǎo)致同一物種不同種群間的基因庫出現(xiàn)差異。【詳解】A.自然選擇是進(jìn)化的一個(gè)重要?jiǎng)恿蜋C(jī)制，但自然選擇不是進(jìn)化的唯一因素，卻是適應(yīng)進(jìn)化的唯一因素，A錯(cuò)誤；B.自然選擇導(dǎo)致種群間的基因庫出現(xiàn)差異，當(dāng)這種差異變得顯著時(shí)，可導(dǎo)致種群間產(chǎn)生生殖隔離，進(jìn)而形成新物種，可見，自然選擇是生物進(jìn)化的重要?jiǎng)恿Γ铀倭朔N群生殖隔離的進(jìn)程，B正確；C.自然選擇是定向的，變異使不定向的，自然選擇不僅能保留有利變異，淘汰不利變異，而且能使有利變異積累起來，C錯(cuò)誤；D.自然選擇獲得的性狀，若為可遺傳變異，則可以通過遺傳進(jìn)行積累，D錯(cuò)誤。6、C【解析】

樣方法是指在被調(diào)查種群的生存環(huán)境內(nèi)隨機(jī)選取若干個(gè)樣方，通過計(jì)數(shù)每個(gè)樣方內(nèi)的個(gè)體數(shù)，求得每個(gè)樣方的種群密度，以所有樣方種群密度的平均值作為該種群的種群密度。取樣方法常常以五點(diǎn)取樣法和等距取樣法為主。常用于植物種群密度的取樣調(diào)查，適用范圍包括植物和昆蟲卵及蚜蟲、跳蝻等動(dòng)等。計(jì)算公式是：設(shè)各樣方的種群密度分別為nl、n2、n3……nm，則該種群密度的估計(jì)值=（nl+n2+n3+……+nm）／m。

注意事項(xiàng)：①宜選擇雙子葉草本植物，不宜選擇蔓生或叢生單子葉植物為調(diào)查對(duì)象。因?yàn)閰采蚵膯巫尤~植物地上部分往往難以辨別是一株還是多株。②植物的大小不同，樣方的面積也應(yīng)不同，如草本為1m2

，灌木為16m2，喬木為100m2。③樣方的選取應(yīng)做到隨機(jī)取樣、不滲入主觀因素，且盡量多一些。④計(jì)數(shù)時(shí)，樣方內(nèi)的植物個(gè)體數(shù)量統(tǒng)計(jì)遵循“樣方內(nèi)部個(gè)體全部統(tǒng)計(jì)、壓在邊界上的只統(tǒng)計(jì)相鄰兩條界線及夾角上的個(gè)體”原則。⑤要大膽舍棄特別懸殊的數(shù)值，取多組臨近的求平均值。【詳解】利用樣方法調(diào)查植物種群密度時(shí)，應(yīng)該注意隨機(jī)取樣，而不是在植物密集處選取樣方地，①錯(cuò)誤；統(tǒng)計(jì)時(shí)可根據(jù)植物密度確定樣方面積，密度低的樣方可大一些，②正確；樣方法中若調(diào)查區(qū)域?yàn)檎叫蔚貕K，可用五點(diǎn)取樣法，③正確；統(tǒng)計(jì)樣方內(nèi)植物的個(gè)體數(shù)時(shí)，應(yīng)遵循的計(jì)數(shù)原則是計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右，④正確；綜上所述，正確的說法有②③④，故選C。【點(diǎn)睛】熟悉樣方法的注意事項(xiàng)是分析判斷本題的關(guān)鍵。二、綜合題：本大題共4小題7、PCR抗枯萎病基因（目的基因）兩端的脫氧核苷酸序列（或堿基序列）②目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)CaCl2（Ca2+）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法脫分化和再分化用相應(yīng)的病原體感染番茄植株，（觀察是否患枯萎病）【解析】

圖中①為目的基因的獲取，②為基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③為將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。番茄為雙子葉植物，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入目的基因。【詳解】（1）提取DNA分子后，可根據(jù)DNA雙鏈復(fù)制的原理，通過PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，以獲取抗枯萎病基因。該技術(shù)的關(guān)鍵是根據(jù)抗枯萎病基因（目的基因）兩端的脫氧核苷酸序列（或堿基序列）設(shè)計(jì)引物。（2）培育抗枯萎病番茄最核心的步驟是②基因表達(dá)載體的構(gòu)建，B為基因表達(dá)載體，其中應(yīng)包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)等結(jié)構(gòu)。（3）③過程是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌，此時(shí)需要用CaCl2（Ca2+）處理細(xì)菌，以增大細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性；番茄為雙子葉植物，D過程是將目的基因?qū)敕鸭?xì)胞，常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；將植物細(xì)胞培養(yǎng)為新個(gè)體，需經(jīng)脫分化和再分化兩個(gè)步驟。（4）經(jīng)過⑦過程得到的番茄植株，檢測(cè)其是否抗枯萎病屬于個(gè)體水平的檢測(cè)，可用相應(yīng)的病原體感染番茄植株，觀察是否患枯萎病。【點(diǎn)睛】將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞生物種類植物動(dòng)物微生物常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)感受態(tài)細(xì)胞法受體細(xì)胞體細(xì)胞或受精卵受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上→表達(dá)將含有目的基因的表達(dá)載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動(dòng)物Ca2＋處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→重組表達(dá)載體DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子8、不同aaXbYAXB、aXB、AXb、aXb41/48【解析】

由題意可知，黑色的基因型組合為A-bb，白色的基因型為：A-B-、aa--。根據(jù)子二代中雌雄的表現(xiàn)型不一致可以推知，B、b位于X染色體上。故黑色的基因型為A-XbXb或A-XbY，白色的基因型為：A-XB--、aa--。甲的基因型為：AAXBXB，乙的基因型為aaXbY。【詳解】（1）基因A、a與B、b屬于非等位基因，基因座位不同。（2）根據(jù)子二代中雌雄的表現(xiàn)型不一致可知，其中一對(duì)基因位于X染色體上，又根據(jù)后代中雄性白色個(gè)體A-bb占3/8可知，B、b位于X染色體上。且根據(jù)子二代雄性中黑色即A-XbY占3/8即3/4×1/2可知，子一代雌性的基因型為：AaXBXb，結(jié)合子二代中雌性均為白色可知，子一代中雄性為AaXBY，進(jìn)而可以推知親本中甲的基因型為：AAXBXB，乙的基因型為aaXbY。F1雌果蠅AaXBXb產(chǎn)生的配子為AXB：aXB：AXb：aXb=1:1:1:1。甲乙雜交產(chǎn)生F1的遺傳圖解如下：。（3）子一代雌性的基因型為：AaXBXb，雄性為AaXBY，F(xiàn)2雌性個(gè)體的基因型為：--XBX-，共有3×2=6種基因型，其中雜合子有4種，AAXBXb、aaXBXb、AaXBXB、AaXBXb。F2中的白色雌性個(gè)體的基因型為：--XBX-（AA:Aa:aa=1:2:1，XBXB：XBXb=1:1）產(chǎn)生的配子中：A:a=1:1、XB：Xb=3:1；黑色雄性個(gè)體的基因型為：A-XbY（AA:Aa=1:2），產(chǎn)生的配子中：A:a=2:1，Xb：Y=1:1，故二者隨機(jī)交配，生出白色雌性純合子即aaXbXb的概率為1/2×1/3×1/4×1/2=1/48。【點(diǎn)睛】本題的關(guān)鍵點(diǎn)在于確定B、b位于X染色體上，且確定黑色和白色對(duì)應(yīng)的基因型，進(jìn)而進(jìn)行相關(guān)的概率計(jì)算。9、引物限制酶和DNA連接酶啟動(dòng)子使大腸桿菌處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的狀態(tài)（感受態(tài)）抗體和記憶細(xì)胞【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。【詳解】（1）PCR最關(guān)鍵的是需要設(shè)計(jì)M基因?qū)?yīng)的引物。（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體所用的工具酶是限制酶和DNA連接酶。（3）重組載體被受體細(xì)胞的RNA聚合酶所識(shí)別，催化轉(zhuǎn)錄過程需要重組載體上有啟動(dòng)子。（4）將目的基因?qū)氪竽c桿菌時(shí)，一般要先用鈣離子處理大腸桿菌，以使大腸桿菌處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的狀態(tài)（感受態(tài)）。（5）M蛋白作為抗原可以刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和記憶細(xì)胞，提高機(jī)體的免疫能力。【點(diǎn)睛】本題考查基因工程的基本過程，考生需要識(shí)記基因工程的基本過程進(jìn)行解答。10、稀釋涂布平板法灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落增大產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌的濃度接種環(huán)溫度過高，產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌被殺死1.75×108防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落數(shù)目甘油管藏【解析】

單菌落分離法包含劃線分離法和稀釋涂布平板法，常用于分離獲得單菌落。劃線分離法是用接種環(huán)以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來。稀釋平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落，即是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個(gè)細(xì)胞存在（否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計(jì)算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計(jì)數(shù)。【詳解】（1）平板劃線法和稀釋涂布平板法是兩種微生物接種最常用的方法。平板劃線時(shí)，將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒，進(jìn)行灼燒滅菌。在第二次及以后的操作時(shí)，總是從上一次的末端開始，菌體密度越來越小，這樣可以將聚集的菌體逐步稀釋，可以獲得單菌落。（2）要從土壤中分離純化產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌時(shí)，常常需要進(jìn)行選擇培養(yǎng)，把其它雜菌淘汰掉，增大脂肪酶細(xì)菌的濃度。3塊相同平板上劃線，只有1塊平板的各劃線區(qū)均未見菌落生長，說明原菌種及培養(yǎng)基都沒問題，最可能的原因是接種環(huán)溫度過高，產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌被殺死。（3）平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)只有三個(gè)（156、178、191）是符合要求的，則每克士壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108個(gè)。菌落形成需要時(shí)間，因此對(duì)菌落數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)時(shí)，應(yīng)選取菌落數(shù)日穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣做可防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落數(shù)目。（4）甘油管冷凍保藏法是利用微生物在甘油中生長和代謝受到抑制的原理達(dá)到保藏目的。長期保存純化的優(yōu)質(zhì)菌種，可以采用甘油管藏的方法。【點(diǎn)睛】識(shí)記、理解微生物的分離和培養(yǎng)方法是解答本題的關(guān)鍵。11、單菌落的分離涂布分離半乳糖醛酸光密度值（0D值）包埋減