苯乙胺類擬腎上腺素第1頁/共50頁03:20:35學習要求掌握：藥物的結構和性質；主要藥物的鑒別、檢查和含量測定的原理和特點熟悉：主要藥物雜質的結構、危害、檢查方法與含量限度了解：影響藥物穩定性的主要因素、體內樣品與臨床監測方法第2頁/共50頁03:20:35第一節結構與性質分子結構中具有苯乙胺基本結構第3頁/共50頁03:20:35苯乙胺類藥物的基本結構*第4頁/共50頁03:20:35代表性藥物腎上腺素鹽酸去氧腎上腺素重酒石酸去甲腎上腺素鹽酸異丙腎上腺素鹽酸苯乙雙胍鹽酸麻黃堿第5頁/共50頁03:20:35鹽酸克侖特羅硫酸沙丁胺醇瘦肉精β2受體激動劑，能解除支氣管平滑肌痙攣第6頁/共50頁03:20:35第7頁/共50頁03:20:35第8頁/共50頁03:20:35化學性質酚羥基特性：鄰苯二酚（或苯酚）結構，與金屬離子絡合呈色；在空氣中或遇光、熱易氧化，色澤變深；在堿性溶液中更易變色。弱堿性：烴胺基側鏈，仲胺氮－弱堿性游離堿難溶于水，易溶于有機溶劑；其鹽可溶于水光學活性：手性碳原子，具有旋光性。苯環取代基特性：根據苯環取代基的電負性，最大吸收波長以254nm為中心紅移或者藍移；紫外、紅外吸收特性進行定性、定量分析。如鹽酸克倫特羅、鹽酸氨溴索--芳伯氨基第9頁/共50頁03:20:35第二節鑒別試驗(identification)一、與三氯化鐵反應藥物三氯化鐵腎上腺素Adrenaline0.1mol/L鹽酸液中顯翠綠色，加氨試液顯紫色，紫紅色鹽酸異丙腎上腺素深綠色，滴加新制5%碳酸氫鈉液，顯藍紫色，紅色重酒石酸去甲腎上腺素翠綠色，加5%碳酸氫鈉試液顯藍色，紅色鹽酸去氧腎上腺素紫色鹽酸多巴胺墨綠色，滴加1%氨溶液，顯紫紅色硫酸沙丁胺醇Salbutamolsulfate硫酸沙丁胺醇加三氯化鐵試液2滴，振搖，溶液顯紫色；加碳酸氫鈉試液，即成橙黃色渾濁液第10頁/共50頁03:20:35二、與甲醛－硫酸反應具有酚羥基取代的本類藥物，可與甲醛在硫酸中反應，形成具有醌式結構的有色化合物。腎上腺素顯紅色，鹽酸異丙腎上腺素顯棕色至暗紫色，重酒石酸去甲腎上腺素顯淡紅色，鹽酸去氧腎上腺素為顯玫瑰紅→橙紅→深棕紅的變化第11頁/共50頁03:20:35與甲醛－硫酸反應藥物甲醛－硫酸腎上腺素Adrenaline紅色鹽酸異丙腎上腺素Isoprenalinehydrochloride棕色，暗紫色重酒石酸去甲腎上腺素Noradrenalinebitartrate淡紅色鹽酸去氧腎上腺素Phenylephrinehydrochloride玫瑰紅，橙紅，深棕紅第12頁/共50頁03:20:35三、還原反應（酚羥基，易被碘、過氧化氫、鐵氰化鉀氧化呈現不同顏色）腎上腺素碘或過氧化氫中性或酸性腎上腺素紅放置棕紅色多聚體鹽酸異丙腎上腺素偏酸性條件碘異丙腎上腺素紅硫代硫酸鈉淡紅色溶液重酒石酸去甲腎上腺素酒石酸氫鉀飽和液pH3.56碘試液放置5min硫代硫酸鈉溶液為無色或僅顯微紅色或淡紫色腎上腺素或鹽酸異丙腎上腺素明顯的深紅棕色或紫色第13頁/共50頁03:20:35四、雙縮脲反應 鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿，芳環側鏈具有氨基醇結構，可顯雙縮脲特征反應。

例：Chp2000，鑒別鹽酸麻黃堿 方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸銅試液2滴與20%氫氧化鈉液1ml，即顯藍紫色，加乙醚1ml振搖、放置，乙醚層顯紫紅色，水層變為藍色。第14頁/共50頁03:20:35鹽酸去氧腎上腺素的鑒別：乙醚層不顯色，可與鹽酸麻黃堿區別第15頁/共50頁03:20:35五、脂肪伯胺的Rimini試驗與亞硝基鐵氰化鈉反應

重酒石酸間羥胺的脂肪伯氨基第16頁/共50頁03:20:355mg重酒石酸間羥胺0.5ml水溶解亞硝基鐵氰化鈉試液2d丙酮2d，碳酸氫鈉0.2g△紅紫色脂肪伯氨基的專屬反應丙酮不含有甲醛60℃，1min第17頁/共50頁03:20:35六、紫外光譜特征吸收紅外特征吸收：上述藥物還可采用紅外吸收光譜進行鑒別。第18頁/共50頁03:20:35第三節特殊雜質檢查

一、酮體檢查 生產工藝：酮體氫化還原制得，若氫化不完全則引入酮體雜質。 例如：腎上腺素、鹽酸異丙腎上腺素、重酒石酸去甲腎上腺素、鹽酸去氧腎上腺素和鹽酸甲氧明等苯第19頁/共50頁03:20:35藥物檢查的雜質溶劑樣品濃度(mg/ml)測定波長(nm)A腎上腺素腎上腺酮HCl(9→2000)2.0310不得過0.05重酒石酸去甲腎上腺素去甲腎上腺酮水2.0310不得大于0.05鹽酸去氧腎上腺素酮體水2.0310不得大于0.20鹽酸甲氧明酮胺水1.5347不得大于0.06硫酸沙丁胺醇酮體

10%HCl0.24310不得大于0.10硫酸特布他林酮體

0.01mol/LHCl20330不得大于0.47紫外分光光度法檢查酮體的條件及要求第20頁/共50頁03:20:35310酮體樣品利用酮體在紫外310nm處有最大吸收，而藥物本身在此波長幾乎沒有吸收，測定一定濃度下樣品溶液在310nm處的吸收度來控制酮體的限量。第21頁/共50頁03:20:35二、光學純度檢查大多數苯乙胺類擬腎上腺素藥物分子結構中存在手性碳原子通過比旋度測定控制藥物的質量第22頁/共50頁03:20:35手性藥物光學純度檢查的最佳方法是實現對映體分離分析，目前常用的方法為色譜法和電泳法重酒石酸去甲腎上腺素的光學純度檢查：稱取重酒石酸去甲腎上腺素消旋體約50mg溶于5ml蒸餾水中，滴加氨水調pH為78；以乙酸乙酯萃取3次，所得乙酸乙酯層用蒸餾水洗滌2次，再用1g硫酸鈉脫水，過濾除去硫酸鈉，得到溶液置于50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得手性分離系統適用性溶液。同法制備(R)-重酒石酸去甲腎上腺素供試品溶液。取20l注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定。用ChiralpakAD-H色譜柱，；以正己烷-乙醇-乙醇胺(800∶200∶2)為流動相；檢測波長為280nm；流速0.8ml/min。對映體的分離因子為7.2。通過手性高效液相色譜法分離，按峰面積歸一化法，可以測定重酒石酸去甲腎上腺素的光學純度第23頁/共50頁03:20:35三、有關物質檢查 例：鹽酸去氧腎上腺素檢查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取上述溶液適量，加甲醇稀釋成每1ml中含0.10mg的溶液，作為對照溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇－氯仿－濃氨溶液(80:5:15)為展開劑，展開后，晾干，噴以重氮苯磺酸試液使顯色。供試品溶液如顯雜質斑點，與對照溶液的主斑點比較，不得更深。第24頁/共50頁03:20:35腎上腺素中有關物質的檢查 供試品溶液：1mg/ml； 對照溶液0.2%（2μg/ml） 氧化破壞溶液：50mg供試品，加濃過氧化氫溶液1ml，放置過夜，加鹽酸0.5ml，加流動相稀釋至50ml 系統適用性試驗溶液：取重酒石酸去甲腎上腺素對照品適量，加氧化破壞溶液溶解并稀釋制成每1ml中含20μg的溶液 HPLC離子對色譜法：去甲腎上腺素峰與腎上腺素峰之間應出現兩個未知雜質峰。理論板數按去甲腎上腺素峰計算不低于3000，去甲腎上腺素峰、腎上腺素峰與相鄰雜質峰的分離度均應符合要求第25頁/共50頁03:20:35第四節含量測定

原料：非水溶液滴定法、溴量法制劑：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色譜法第26頁/共50頁03:20:35一、非水溶液滴定法

非水溶液滴定法是在非水溶劑中進行的酸堿滴定測定法。主要用來測定有機堿及其氫鹵酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽以及有機酸堿金屬鹽類藥物的含量。也用于測定某些有機弱酸的含量。酸性溶劑：冰醋酸堿性溶劑：DMF兩性溶劑：甲醇惰性溶劑：氯仿，甲苯，丙酮第27頁/共50頁03:20:35(一)基本原理BH+A-+HClO4BH+ClO4-+HA有機弱堿鹽被置換出的弱酸因此，要根據不同情況采用相應測定件。第28頁/共50頁03:20:35(二)一般方法供試品+冰醋酸（10ml~30ml）結果HClO4滴定空白試驗校正（8ml）第29頁/共50頁03:20:351.適用范圍

pKb＞8的有機堿及其鹽。pKb為8～13的弱堿性雜環類藥物采用本法滴定。pKb為8～10時，冰醋酸；pKb為10～12時，冰醋酸+醋酐；pKb＞12，醋酐。

(三)問題討論第30頁/共50頁03:20:35

2.酸根的影響：

在醋酸介質中的酸性以下列排序遞減：高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸＞磷酸＞有機酸

若置換出的HA酸性較強，需加Hg(Ac)2-冰HAc消除干擾。

2B·HX+Hg(OAc)2→2B·HOAc+HgX2量不足終點不明顯，結果偏低。過量(1～3倍)不影響測定結果第31頁/共50頁03:20:353.滴定劑的穩定性

若滴定供試品與標定HClO4溶液時溫差未超過10℃，HClO4濃度需用公式校正

超過10℃，重新標定第32頁/共50頁03:20:354.終點指示方法

常用電位法和指示劑法常用的指示劑是結晶紫5.其他干擾

對于有機堿性藥物，經堿化處理，有機溶劑提取分離出有機堿后，再用HClO4滴定。第33頁/共50頁03:20:35例：重酒石酸去甲腎上腺素－－直接滴定鹽酸克倫特羅－－加醋酸汞消除氫鹵酸干擾；由于堿性較弱，電位法指示終點硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突躍，結晶紫為指示劑注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解樣品后應放冷后再加醋酐。第34頁/共50頁03:20:35非水溶液滴定法--11種

第35頁/共50頁03:20:35二、溴量法鹽酸去氧腎上腺素及其注射液、重酒石酸間羥胺第36頁/共50頁03:20:35三、亞硝酸鈉法

鹽酸克侖特羅分子結構中含有芳伯氨基，在酸性溶液中可與亞硝酸鈉定量發生重氮化反應，生成重氮鹽，可用永停滴定法取本品約0.25g，精密稱定，置100ml燒杯中，加鹽酸溶液(1→2)25ml使溶解，再加水25ml，照永停滴定法，用亞硝酸鈉滴定液(0.05mol/L)滴定。每1ml亞硝酸鈉滴定液(0.05mol/L)相當于15.68mg的C12H18Cl2N2OHCl

第37頁/共50頁03:20:35四、紫外分光光度法&比色法鹽酸甲氧明注射液含量測定：精密量取本品適量(約相當于鹽酸甲氧明100mg)，置250ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法，在290nm的波長處測定吸光度，按C11H17NO3HCl的吸收系數()為137計算，即得第38頁/共50頁03:20:35紫外分光光度法&比色法—重氮化-偶合顯色或與亞鐵離子絡合顯色 以鹽酸克倫特羅為例，測定原理如下：注意：由于偶合劑（N-(1-萘基)-乙二胺）與亞硝酸也能顯色干擾測定，所以在重氮化后，應加入氨基磺酸銨分解剩余的亞硝酸。第39頁/共50頁03:20:35例：鹽酸克倫特羅栓（Chp2005） 【含量測定】對照品溶液的制備精密稱取鹽酸克侖特羅對照品適量，加鹽酸溶液(9→100)制成每1ml中含7.2μg的溶液。

供試品溶液的制備取本品20粒，精密稱定，切成小片，精密稱取適量（約相當于鹽酸克侖特羅0.36mg），置分液漏斗中，加溫熱的氯仿20ml使溶解，用鹽酸溶液(9→100)振搖提取3次(20ml、15ml、10ml)，分取酸提取液，置50ml量瓶中，用鹽酸溶液(9→100)稀釋至刻度，搖勻，濾過，收集續濾液，即得。

第40頁/共50頁03:20:35測定法精密量取對照品溶液與供試品溶液各15ml，分置25ml量瓶中，各加鹽酸溶液(9→100)5ml與0.1％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置3分鐘，各加0.5％氨基磺酸銨溶液1ml，混勻，時時振搖10分鐘，再各加0.1％鹽酸萘乙二胺溶液1ml,混勻，放置10分鐘，用鹽酸溶液(9→100)稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法（附錄ⅣB），在500nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得。第41頁/共50頁03:20:35五、高效液相色譜法高效分離，高靈敏度和高選擇性－可用于制劑常規分析，臨床藥物監測和體內藥物動力學研究。例1：重酒石酸去甲腎上腺素注射液分析色譜條件：色譜柱：ODS流動相：0.14%庚烷基磺酸鈉溶液－甲醇(65:35)，用磷酸調pH至3.0±0.1，流速：1.0ml/min檢測波長：280nm第42頁/共50頁03:20:35測定方法：精密量取本品適量（約相當于重酒石酸去甲腎上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀釋至刻度，搖勻，取2μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取重酒石酸去甲腎腺素對照品適量，精密稱定，加醋酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。第43頁/共50頁03:20:35第五節體內藥物分析)動物組織中的鹽酸克倫特羅殘留的測定—瘦肉精1.提取稱取動物肝臟組織樣品5g0.05g于帶蓋的聚四氟乙烯離心管中，加入乙酸乙酯15ml，再加入10.0%碳酸鈉溶液3ml，然后以10000r/min以上的速度勻質60秒，蓋上蓋子以5000r/min的速度離心2分鐘，吸取上層有機溶劑于離心管中，在殘渣中再加入乙酸乙酯10ml，在渦旋混合器上混合1分鐘，離心后吸取有機溶劑并合并提取液。第44頁/共50頁03:20:35在收集的有機溶劑中加入0.10mol/L的鹽酸溶液5ml，渦旋混合30秒，以5000r/min的速度離心2分鐘，吸取下層水溶液，同樣步驟重復萃取一次，合并兩次萃取液，用2.5mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至5.2。第45頁/共50頁03:20:352.凈化SCX小柱依次用甲醇5ml、水5ml和30mmol/L鹽酸5ml活化，然后將上述萃取液上樣至固相萃取小柱中依次用水5ml和甲醇5ml淋洗柱子，在溶劑流過固相萃取柱后，抽干SCX小柱，再用4%氨化甲醇溶液5ml洗脫，收集洗脫液。

第46頁/共50頁03:20:353.測定

(1)衍生化：在50℃水浴中用氮氣吹干上述洗脫液，加入甲苯100l和BSTFA(雙三甲基硅烷三氟乙酰胺)100l，試管加蓋后于渦旋混合器上振蕩30秒，在80℃的烘箱中加熱衍生1小時(