利用多管發(fā)酵法檢測(cè)水中大腸菌群數(shù)量作者：摘要：本實(shí)驗(yàn)利用多管法檢測(cè)水中大腸菌群數(shù)量，以反映城市供水是否符合標(biāo)準(zhǔn)。關(guān)鍵詞：多管發(fā)酵法大腸桿菌最大可能數(shù)（MPN）發(fā)酵試驗(yàn)平板分離前言：城市生活供水水質(zhì)與人們生活息息相關(guān)，為確保飲水合用水安全，必須對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格的常規(guī)監(jiān)測(cè)。但是水體中直接檢測(cè)出病原微生物比較困難，因?yàn)樗鼈償?shù)量極少，而且培養(yǎng)條件苛刻，分離鑒定比較困難。因此常選用指示微生物作為水體中病原微生物數(shù)量的指標(biāo)。大腸菌在人體內(nèi)和糞便中存在很多，受氣污染的水體中較容易檢測(cè)到大腸菌的存在，并且檢測(cè)方法簡(jiǎn)單。因此，常用大腸菌群為指標(biāo)評(píng)價(jià)水的衛(wèi)生質(zhì)量。原理：多管發(fā)酵法是根據(jù)大腸桿菌群細(xì)菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣及具備革蘭氏染色陽(yáng)性、無(wú)芽孢呈桿狀等有關(guān)特性，通過(guò)三個(gè)步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以求得水樣中的總大腸菌群數(shù)，最大可能數(shù)（MPN）來(lái)表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)2.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡等。2.1.2培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨培養(yǎng)基（分裝于10支試管中，內(nèi)涵倒置杜氏小管）、3倍濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)基（分裝于5支試管中，內(nèi)涵倒置杜氏小管）、伊紅一美藍(lán)（EMB）培養(yǎng)基。（培養(yǎng)基均為滅過(guò)菌的）2.1.3染色劑：草酸銨結(jié)品紫染色液、路哥碘液、番紅染色液。2.1.4水樣：擰開(kāi)龍頭流水5分鐘后取自來(lái)水。2.1.5其他：滅菌移液管、載玻片、接種環(huán)、酒精燈、香柏油、二甲苯、無(wú)菌水、擦鏡紙等。2.2實(shí)驗(yàn)步驟2.2.1初發(fā)酵試驗(yàn)：a取5支裝有3倍濃度乳糖蛋白胨無(wú)菌培養(yǎng)基的試管，標(biāo)記水樣名稱和加水體積10ml；取5支裝有乳糖蛋白胨無(wú)菌培養(yǎng)基的試管，標(biāo)記水樣名稱和加水體積1ml；取5支裝有乳糖蛋白胨無(wú)菌培養(yǎng)基的試管，標(biāo)記水樣名稱和加水體積0.1ml。b用滅菌移液管分別吸取10ml水樣加入到標(biāo)記號(hào)的3倍濃度培養(yǎng)基試管中；分別吸取1ml水樣加入到標(biāo)記號(hào)的1倍濃度培養(yǎng)基試管中；分別吸取0.1ml水樣加入到標(biāo)記號(hào)的1倍濃度培養(yǎng)基試管中。c將以上接種后的所有試管都置于37r恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)。d培養(yǎng)48小時(shí)后觀察記錄各加水量試管中產(chǎn)酸產(chǎn)氣（產(chǎn)酸的培養(yǎng)基會(huì)變?yōu)辄S色）的情況，產(chǎn)酸產(chǎn)氣的即為陽(yáng)性管。注意觀察過(guò)程中若只見(jiàn)產(chǎn)酸不見(jiàn)產(chǎn)氣的話，可輕輕拍打試管壁，產(chǎn)生的氣體可能在杜氏管內(nèi)。記錄各澆水量陽(yáng)性管數(shù)，并從下表查出MPN。以下為大腸菌群檢數(shù)表：陽(yáng)性管組合每100ml水樣中細(xì)菌mpn000<2001201021204100210141114120620052017210721192209230123008301113101131114其余部分省略2.2.2平板分離：a將初發(fā)酵試驗(yàn)中產(chǎn)酸產(chǎn)氣試管中培養(yǎng)物以無(wú)菌操作技術(shù)分別在EMB平板上三區(qū)劃線接種，于37r培養(yǎng)24小時(shí)。b培養(yǎng)24小時(shí)后觀察菌落特征。菌落特征類型為：Q菌落深紫色，有金屬光澤一一典型大腸菌群特征9菌落深紫色，無(wú)金屬光澤一一典型大腸菌群特征。菌落粉紅色、粘液狀、不透明一一非典型大腸菌群菌落Q其他特征c挑取呈Q99菌落特征的菌進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，觀察革蘭氏染色結(jié)果和芽孢有無(wú)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果a陽(yáng)性管觀察情況記錄如下表:加樣管數(shù)/支水樣量/ml產(chǎn)酸產(chǎn)氣管數(shù)/支陽(yáng)性管數(shù)51022511150.100查閱大腸菌群檢數(shù)表可得每100ml水樣中細(xì)菌MPN為7。b陽(yáng)性管培養(yǎng)物劃線接種培養(yǎng)24小時(shí)后，EMB培養(yǎng)基中長(zhǎng)出深紫色無(wú)金屬光澤的單菌落，菌落較小，呈圓形，表面和邊緣光滑，是典型大腸菌群菌落。c從EMB培養(yǎng)基中挑取上述特征的菌進(jìn)行革蘭氏染色，觀察得菌體呈藍(lán)色，為革蘭氏陽(yáng)性菌，細(xì)菌呈八字、柵狀和單個(gè)分布。鏡檢照片如下：

實(shí)驗(yàn)結(jié)論城市供水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)表:微生物學(xué)指標(biāo)細(xì)菌總數(shù)^80CFU/mL總大腸菌群每100mL水樣中不得檢出耐熱大腸菌群每100mL水樣中不得檢出余氯（加氯消毒時(shí)測(cè)定）與水接觸30min后出廠游離氯NO.3mg/L；或與水接觸120min后出水總氯NO.5mg/L；臭和味無(wú)異臭異味，用戶可接受渾濁度1NTU（特殊情@3NTU）①肉眼可見(jiàn)物無(wú)氯化物250mg/L該實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到每100ml自來(lái)水中最大可能存在7個(gè)