植物組培快繁程序演示文稿現在是1頁\一共有87頁\編輯于星期六（優選）植物組培快繁程序現在是2頁\一共有87頁\編輯于星期六一、供體植株的培養與取材

二、外植體的滅菌與接種

三、培養

四、馴化移栽五、組培快繁計劃安排與實施主要內容現在是3頁\一共有87頁\編輯于星期六一、供體植株的培養與取材

一般來說，無論何種類型的細胞組織培養技術，起始階段均涉及外植體取材、滅菌與接種培養等基本過程。外植體來源的環境以及外植體的類型，均會影響將來培養的效果，而滅菌、接種和培養條件的選擇與控制，也與外植體的來源和類型有關。現在是4頁\一共有87頁\編輯于星期六1、外植體的來源-生長在自然環境下的植物-有目的地培育在溫室控制條件下生長的植物-無菌環境下已經過離體培養的植物自然環境中生長的植株，一般帶有微生物，甚至與某些微生物具有寄生關系，使植株具有內生菌。取自這些植物的外植體，在培養過程中會有微生物滋生，從而影響培養效果。

現在是5頁\一共有87頁\編輯于星期六自然環境生長植株現在是6頁\一共有87頁\編輯于星期六溫室控制條件下生長植株現在是7頁\一共有87頁\編輯于星期六已離體培養植株現在是8頁\一共有87頁\編輯于星期六

在多數情況下，應盡量使用溫室或人工氣候室控制培養的植物材料作為外植體來源，減少培養過程中的微生物感染概率。同時，生長在控制條件下的植物可以保持培養材料間的一致性，提高實驗的可重復性，也便于培養技術的規范。現在是9頁\一共有87頁\編輯于星期六

某些多年生植物或特殊材料，必須取自自然生長的植物，就需要盡可能避免使用那些生長過于潮濕和不潔凈環境中的植物。對于培養過程中可能出現內生菌污染的材料，應盡量取生長旺盛期的生長點部位作為起始培養的材料。

現在是10頁\一共有87頁\編輯于星期六2、供體植株的管理取自室外的外植體材料，供體植株的管理十分重要，這與外植體培養時的污染率密切相關。植株管理中應注意：⑴避免昆蟲危害許多昆蟲如蚜蟲、螨類和飛虱是許多植物病蟲害的傳播媒介，會引起植物組織的潛在感染?，F在是11頁\一共有87頁\編輯于星期六⑵注意防病尤其是真菌和細菌病害的侵染，取自感病植株的外植體，在培養中的污染率遠遠高于來自健康植株的外植體，必要時需使用化學藥劑防治病害。⑶控制濕度給供體植株澆水時應從根部給水，避免從上部澆水，以免上部形成易于病原侵染的濕度環境；盡可能降低溫室濕度；取材前盡可能保持植株干爽?，F在是12頁\一共有87頁\編輯于星期六3、材料取材⑴材料選擇培養材料應選擇有代表性的主要植物、選擇性狀優良的種質或特殊的基因型?？焖俜敝硶r應在植株生長的最適時期取材，如花藥培養應在花粉發育到單核期取材?，F在是13頁\一共有87頁\編輯于星期六現在是14頁\一共有87頁\編輯于星期六現在是15頁\一共有87頁\編輯于星期六⑵取材從生長健壯的無病蟲害的植株上選取發育正常的器官和組織。最好采用莖尖，后代性狀較穩定，攜帶細菌較少。選取材料的大小一般在0.5-1.0cm之間。胚胎培養或脫毒在0.5cm以下。材料太大易污染，材料太小難于成活。

現在是16頁\一共有87頁\編輯于星期六1、預處理先對植物材料進行修剪整理，去掉不需要部分，將準備使用的植物材料（外植體）在流水中沖洗20-60分鐘，備用。如特別不潔的外植體，可先用加有洗滌劑的水清洗10-15分鐘，再用流水沖洗干凈。二、外植體的滅菌與接種現在是17頁\一共有87頁\編輯于星期六2、表面滅菌（1）操作人員穿戴滅過菌的工作服、口罩。進入接種室前雙手用洗滌劑清洗干凈，操作前再用70%酒精或消毒劑擦洗雙手。（2）操作期間雙手和臺面常用70%酒精或消毒劑擦拭。超凈工作臺使用前必須用紫外燈照射殺菌，然后開啟風機。現在是18頁\一共有87頁\編輯于星期六

（3）接種用工具（解剖刀、剪刀、鑷子）可放入70-75%酒精中，使用時需火焰灼燒滅菌，冷卻后使用。（4）外植體放入超凈工作臺內，置70-75%酒精中5-60秒，0.1％氯化汞6-10分鐘，或10%的漂白粉上清液中10-15分鐘，然后用無菌水沖洗3-5次。滅菌時需進行攪動?，F在是19頁\一共有87頁\編輯于星期六

常用滅菌藥劑的使用和效果

滅菌劑使用濃度（%）清除的難易消毒時間效果次氯酸鈉9—10易5—30很好次氯酸鈣2易5—30很好漂白粉飽和濃度易5—30很好氯化汞0.1—1較難2—10最好酒精70—75易0.2—2好過氧化氫10—12最易5—15好溴水1—2易2—10很好硝酸銀1較難5—30好抗菌素4—50mg/L中30—60較好現在是20頁\一共有87頁\編輯于星期六（1）材料吸干后，一手拿鑷子，一手拿剪子或解剖刀，對材料進行適當的切割。如葉片切成0.5cm見方的小塊；莖切成含有一個節的小段。微莖尖要剝成只含l—2片幼葉的莖尖大小等。在接種過程中要經常灼燒接種器械，防止交叉污染。（2）解開包口紙，將培養瓶口幾乎水平拿著，避免灰塵落入瓶中。使瓶囗靠近酒精燈火焰，并將瓶口在火焰上方轉動，使管口里外灼燒數秒鐘。3、外植體的接種現在是21頁\一共有87頁\編輯于星期六（3）迅速用鑷子夾取切割分離下的所需組織、細胞、器官，送入培養容器內，輕輕插入培養基。若是葉片直接附在培養基上，以放1—3塊為宜。接完種后，將管口在火焰上再灼燒數秒鐘。然后及時蓋上瓶蓋或封口。注意：所有操作均應嚴格保持瓶口在操作區以內，且不遠離酒精燈；工具用后應及時滅菌，避免交叉污染；工作人員操作時禁止不必要的談話?，F在是22頁\一共有87頁\編輯于星期六三、培養

指把離體植物材料放在培養室(有光照、溫度條件)里，使之生長，分裂和分化形成愈傷組織或進一步分化成再生植株的過程。1、培養含義現在是23頁\一共有87頁\編輯于星期六2、培養方法(1)固體培養法即用瓊脂固化培養基來培養植物材料的方法。是現在最常用的方法。

(2)液體培養法即用不加固化劑的液體培養基培養植物材料的方法?，F在是24頁\一共有87頁\編輯于星期六

培養步驟初代培養繼代培養生根培養3、培養步驟現在是25頁\一共有87頁\編輯于星期六（1）初代培養目的：獲得無菌材料和無性繁殖系。無性繁殖系：是指由一個外植體繼代增殖，繁殖出的具有相同遺傳物質的植株群體。包括：芽叢、不定芽、胚狀體、原球莖等。培養基：誘導或分化培養基。培養基中CTK多，IAA少。類型（根據發育方向）：

叢生芽增殖型器官發生型胚狀體發生型原球莖發生型現在是26頁\一共有87頁\編輯于星期六

根、芽胚狀體根、芽愈傷組織芽根

芽

外植體

試管苗★

原球莖根、芽

外植體成苗途徑根現在是27頁\一共有87頁\編輯于星期六類型方式事例叢生芽增殖型腋芽萌發，以芽增殖芽，擴大繁殖系數甘蔗、香蕉、香石竹、絲石竹器官發生型通過脫分化形成愈傷組織，再分化出苗煙草、油菜等胚狀體發生型從愈傷組織或直接從子葉、下胚軸和花藥培養中產生甘蔗、胡蘿卜、石刁柏等原球莖型由莖尖或腋芽產生原球莖放入培養基中發育成小植株蘭花球莖芽型葉柄表面產生圓球形小突起（球莖芽），一端出芽一端出根觀葉海棠塊莖型葉片或葉柄上形成粒狀芋塊，進一步分化出芽和根花葉芋鱗莖型鱗片近軸面或邊緣直接形成帶根的小鱗莖百合、郁金香、貝母等孢子型用成熟或未成熟的孢子進行培養地錢、狼尾蕨等根莖型蕨類具有橫向的莖及直立的短根莖，為組培的最佳外值體腎蕨、裂葉腎蕨、波士頓蕨等微枝扦插型帶芽的小插條在試管內進行無菌扦插葡萄、楊樹現在是28頁\一共有87頁\編輯于星期六頂芽腋芽叢生芽增殖型Ⅰ現在是29頁\一共有87頁\編輯于星期六微型扦插頂芽CTK刺激帶芽的莖切段側芽接種培養形成的莖梢節長，直立向上呈小灌木叢狀獲得較多嫩莖梢莖段培養繼代擴繁試管苗生根培養無愈傷組織產生初代繼代叢生芽增殖型Ⅱ現在是30頁\一共有87頁\編輯于星期六器官發生型Ⅰ現在是31頁\一共有87頁\編輯于星期六脫分化分化愈傷組織芽、芽叢切割芽叢繼代培養大量芽叢試管苗生根培養外植體初代繼代器官發生型Ⅱ①②現在是32頁\一共有87頁\編輯于星期六愈傷組織培養

愈傷組織具分裂能力的細胞已分化細胞脫分化繼代

愈傷組織分裂誘導期

分裂期

分化期現在是33頁\一共有87頁\編輯于星期六愈傷組織誘導◆雙子葉植物>單子葉植物和裸子植物◆

幼年細胞和組織>成年細胞和組織◆

二倍體細胞>單倍體細胞◆

根據培養目的選取外植體現在是34頁\一共有87頁\編輯于星期六愈傷組織誘導◆

外植體大小一般為0.5cm的圓柱形或方形塊◆

添加植調劑和天然提取物利于誘導和維持◆

生長旺盛的愈傷組織一般呈乳黃色或白色或淺綠色或綠色，老化的多為黃色或褐色現在是35頁\一共有87頁\編輯于星期六脫分化因植物種類、器官及生理狀況有大差異：◆禾谷類植物脫分化較難?！艏毮劢M織脫分化較易；成熟組織較難。◆花器脫分化較易；莖葉難?，F在是36頁\一共有87頁\編輯于星期六誘導期◆誘導期長短與植物種類、生理狀態有關?！粽T導期長短與環境因素有關。

母株生長在弱光下的外植體易于誘導，分裂頻率高。

增加O2和迅速釋放CO2利于細胞分裂。

◆添加植調劑誘導分裂效果好。

◆合成代謝迅速?，F在是37頁\一共有87頁\編輯于星期六分裂期特征：細胞分裂快，結構疏松，缺少有組織的結構，顏色淺而透明?，F在是38頁\一共有87頁\編輯于星期六分化期特征：形成瘤狀結構的外表和內部分化；出現多種類型的細胞?，F在是39頁\一共有87頁\編輯于星期六石龍芮下胚軸培養產生胚狀體過程體細胞胚狀體發生型Ⅰ現在是40頁\一共有87頁\編輯于星期六

外植體愈傷組織小孢子游離單細胞器官

胚狀體

試管苗體細胞胚狀體發生型Ⅱ現在是41頁\一共有87頁\編輯于星期六胚狀體形成植株的特征：1.具兩極性

2.胚狀體的維管組織與外植體的維管組織無解剖結構上的聯系

3.胚狀體的維管組織的分布是獨立的“Y”形

4.數量多，速度快，結構完整，成苗率高現在是42頁\一共有87頁\編輯于星期六原球莖：縮短的、呈珠粒狀的、由胚性細胞組成的、類似嫩莖的器官。原球莖發生型現在是43頁\一共有87頁\編輯于星期六1.初代培養時外植體發育途徑有幾條？2.正常的愈傷組織一般為何種顏色？其誘導有何特點？思考題：現在是44頁\一共有87頁\編輯于星期六目的：擴繁無根苗（生產上邊擴繁邊生根）。擴繁方法：以幾何級數增加，可切割莖段，分離芽叢、胚狀體、原球莖。培養基：基本培養基或分化培養基實質：增殖培養物。（2）繼代培養現在是45頁\一共有87頁\編輯于星期六現在是46頁\一共有87頁\編輯于星期六現在是47頁\一共有87頁\編輯于星期六（3）壯苗和生根培養◆生根培養基：1／2或1／4MS基本培養基；不加或少加CTK，適量添加NAA；糖濃度1-1.5%?！襞囵B條件：增加光強，達3000-10000lx。◆壯苗

現在是48頁\一共有87頁\編輯于星期六◆生根方法與途徑

①新梢基部浸入50或100ppmIBA液4－8h；②在含IAA類培養基中培養4－6d；③移入含活性碳的生根培養基培養。⑤其它方法④生根困難的則在培養基中搭濾紙橋或按①現在是49頁\一共有87頁\編輯于星期六生根其它方法

延長在增殖培養時間

降低增殖倍率，減少CTK用量

對易生根植物，切割粗壯嫩枝在營養缽中直接生根

胚狀體發育成小苗不經生根階段，但需壯苗生根現在是50頁\一共有87頁\編輯于星期六

接種只是完成了離體培養的第一步，植物離體培養和栽培植物一樣，生長過程中也受到各種環境因素的影響。培養條件是離體培養能否成功的關鍵。在培養基條件適宜的基礎上，影響試管苗生長的主要因素有光照、溫度、濕度、氧氣。（4）培養條件現在是51頁\一共有87頁\編輯于星期六光照1）光強

★影響外植體細胞的增殖、組織和器官的分化。一般培養室的光照強度要求1000～5000lx?！镉鷤M織的誘導有的在光照下有促進作用；光照強，幼苗生長健壯；光照弱，幼苗生長弱小，容易徒長。現在是52頁\一共有87頁\編輯于星期六★不同波長的光對細胞的分裂和器官的分化有影響。

2）光質②白光促進小花天竺葵愈傷組織的生長，藍光則無作用。如：①紅光促進楊樹愈傷組織的生長，藍光阻礙其生長?，F在是53頁\一共有87頁\編輯于星期六3）光照時間根據植物生物學特性決定；光照長短對試管內花的形成是個重要影響因素，一般給予周期性光照比較好。多數植物8-10小時黑暗為宜。光周期長短因植物種類而異。在胡蘿卜組織培養中隨著日照長度的增加，而促進生長。

現在是54頁\一共有87頁\編輯于星期六

1）大多數植物23-32℃，一般控制在25±2oC。低于15C或高于35C，對生長都是不利的。

2）植株種類及外植體的不同，其最適溫度也是不同的。如百合20℃；月季25－27℃；番茄28℃。

△

溫度現在是55頁\一共有87頁\編輯于星期六濕度1）瓶內的濕度：

一般為100％，主要受到培養基含水量和封口膜透性的影響。如培養基過硬，則不利于外植體接觸和插入培養基，導致生長遲緩；封口膜過于透氣，也會使瓶內濕度下降?，F在是56頁\一共有87頁\編輯于星期六

濕度過低會使培養基喪失大量水分，滲透勢升高，影響材料對營養物質的吸收，也會阻礙外植體的生長。濕度過高會造成雜菌滋長，導致大量污染。一般為70－80%。2）環境濕度：現在是57頁\一共有87頁\編輯于星期六1）培養基適宜pH值5-6.5，一般為5.8，調整用0.1M的NaOH和HCl溶液。

pH值2）ｐH影響培養基的硬度。ｐH＞6.5培養基會變硬；ｐH＜5.0培養基不易凝固。3）滅菌之前，培養基的pH要比標準提高0.2－0.3個單位?，F在是58頁\一共有87頁\編輯于星期六氣體(必要條件)1）培養瓶內氧氣的充足與否與封口材料有關。可用棉塞或特制的封口塑料。通氣最好的是棉塞，但棉塞易使培養基干燥，夏季易引起污染。現在是59頁\一共有87頁\編輯于星期六2）培養基內氧氣充足與否與培養基的種類和培養方式有關?！艄腆w培養基可加進活性炭來增加通氣度,以利于發根。◆液體培養時，可考慮采取振蕩培養的方式，以增加通氣性。

現在是60頁\一共有87頁\編輯于星期六2）２個大氣壓以上就對生長有阻礙作用，5～６個大氣壓生長就完全停止，６個大氣壓細胞就不能生存。滲透壓

1）1-2個大氣壓促進生長?，F在是61頁\一共有87頁\編輯于星期六復習思考題：1.繼代培養有何意義？其目的和實質是什么?2.組培苗生根方法有哪些？3.外植體成苗途徑有幾條？現在是62頁\一共有87頁\編輯于星期六四、馴化移栽現在是63頁\一共有87頁\編輯于星期六高溫且恒溫

高濕

弱光

無菌1、試管苗生態環境與自然環境的差異▼

現在是64頁\一共有87頁\編輯于星期六2、試管苗的特點

生長細弱，角質層不發達光合作用差葉片氣孔數少，活性差根吸收功能弱對逆境的適應性和抵抗能力較差現在是65頁\一共有87頁\編輯于星期六3、試管苗的馴化

目的：提高試管苗的適應性，促其健壯，最終提高移栽成活率原則：★從溫、光、濕度及有無雜菌等環境因素考慮?！锺Z化開始數天內，與培養環境條件相似；后期與預計栽培條件相似，逐步適應。方法：即煉苗。不開口自然光下2-3天，然后開口1-2天?，F在是66頁\一共有87頁\編輯于星期六試管苗的移栽方法Ⅰ

現在是67頁\一共有87頁\編輯于星期六組培馴化移栽常用基質

現在是68頁\一共有87頁\編輯于星期六組培馴化移栽用穴盤

現在是69頁\一共有87頁\編輯于星期六試管苗的移栽方法Ⅱ現在是70頁\一共有87頁\編輯于星期六現在是71頁\一共有87頁\編輯于星期六現在是72頁\一共有87頁\編輯于星期六試管苗的移栽

移栽方法：取出試管苗，全部輕洗去培養基栽入基質(事先澆透水)后，栽后輕澆薄水，移入高濕環境(90%以上)。

移栽場所：日光溫室塑料大棚馴化室注意：1.保持小苗水分供需平衡2.防止菌類滋生3.給予一定溫光條件4.注意基質配比并保持適當的通氣性現在是73頁\一共有87頁\編輯于星期六1）保持小苗水分供需平衡

1周內：

環境高濕，遮光。

1周后：

小苗生長后逐漸降濕，拱棚兩端通風。

半個月后：

揭膜，控水，增加光強。▼

現在是74頁\一共有87頁\編輯于星期六2）防止菌類滋生

◆基質高壓滅菌或3h烘烤滅菌或太陽能滅菌?！暨m當使用殺菌劑、消毒劑。◆移栽時少傷苗?！魢娝?.1%尿素或1/2MS大量元素液追肥，加快苗生長?，F在是75頁\一共有87頁\編輯于星期六3）給予一定溫光條件

適宜生根溫度：18－20℃，溫度低可加地熱線。移栽初期弱光，后逐漸加強光照，過渡到自然光照。

▼

現在是76頁\一共有87頁\編輯于星期六◆保持基質通氣性：選顆粒狀基質，澆水勿多。4）注意基質配比并保持適當的通氣性▼

現在是77頁\一共有87頁\編輯于星期六◆基質配比：珍：蛭：草(腐殖土)=1：1：0.5珍：草(腐殖土)=1：1現在是78頁\一共有87頁\編輯于星期六

提高試管苗移栽成活率的途徑？1、壯苗移栽比弱苗移栽成活率高2、生長素（NAA）利于生根3、低無機鹽濃度生根效果好4、活性炭利于嫩莖生根5、避免太陽直射，溫度25-30℃，濕度在85%以上6、使試管苗逐漸從無菌向有菌過渡現在是79頁\一共有87頁\編輯于星期六現在是80頁\一共有87頁\編輯于星期六組織培養工廠化育苗生產流程簡圖

五、組培快繁計劃安排與實施現在是81頁\一共有87頁\編輯于星期六

商業化生產規模的確定應以市場需求為標準，否則試管苗難以銷售，造成經濟損失。

外植體的入瓶；器官形成及增殖；試管小植株出瓶等試管苗生產過程均是在無菌條件下進行的，因此，試管苗生產規模可以用無菌工作臺的數量來衡量的。1.試管苗生產規模的確定現在是82頁\一共有87頁\編輯于星期六

一般一個單人無菌工作臺可年生產10萬～15萬株苗，一個1.2m×0.6m×2.0m的6層培養架可年繁殖1.5萬～2萬株試管苗。年產100萬株的組培苗生產工廠，需8～10個無菌工作臺，培養架40～50個。接種室面積應為40～50m2，培養室面