人類許多重大疾病如糖尿病、帕金森氏癥、亨廷頓氏癥都與關鍵細胞或器官的不可逆損傷有關；世界上每天都有數(shù)以十萬計的嚴重腎臟衰竭病人、心臟衰竭病人掙扎在生死線上，等待器官更換。然而，現(xiàn)行的器官移植卻存在諸多的問題，如：供體器官資源緊缺；傳統(tǒng)的器官移植方法造價昂貴；傳統(tǒng)的器官移植存在異體排斥等等。現(xiàn)在是1頁\一共有123頁\編輯于星期一科學家們一直希望找到一種辦法，在體外開設自身身體部件的“生產車間”，利用自己的材料，為自己生產“零部件”，以用于衰老、壞死、損傷組織或器官的替換。但是，生命好像在和我們開玩笑：癌癥細胞可以穩(wěn)定而持續(xù)地增長；而健康的、正常的細胞離開身體后，很難有效地繁殖。現(xiàn)在是2頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞研究的突破性進展為生命開拓了新的契機

現(xiàn)在是3頁\一共有123頁\編輯于星期一

StemCell第一節(jié)干細胞生物學第二節(jié)干細胞的臨床應用和研究狀況4現(xiàn)在是4頁\一共有123頁\編輯于星期一MEDICALCELLBIOLOGYMEDICALCELLBIOLOGY5

一、WhatisStemCell?

是具有自我更新、高度增殖和多向分化潛能的細胞群體，即這些細胞可通過分裂維持自身細胞的特性和大小，又可進一步分化為各種組織細胞，從而在組織修復等方面發(fā)揮積極作用。現(xiàn)在是5頁\一共有123頁\編輯于星期一6

二.干細胞特性1.干細胞的形態(tài)和生化特點形態(tài)特點：圓形或橢圓形，體積較小，核質比較大，核中多為常染色體。

生化特點：a.具有較高端粒酶活性;b.具有不同的生化標志：角蛋白15、nestin（巢素蛋白）。現(xiàn)在是6頁\一共有123頁\編輯于星期一

2，干細胞的增殖特點

能力強：高度增殖是干細胞生物學特性之一。自穩(wěn)性：會自我更新維持自身數(shù)目的恒定。（self-maintenance）7干細胞維持自穩(wěn)性的機制：對稱分裂和不對稱分裂

現(xiàn)在是7頁\一共有123頁\編輯于星期一

8

干細胞的對稱分裂和不對稱分裂對稱分裂（symmetrydivision）不對稱分裂（asymmetrydivision）干細胞

分化細胞

干細胞

分化細胞現(xiàn)在是8頁\一共有123頁\編輯于星期一9

3，干細胞的分化特點

1）.多潛能性現(xiàn)在是9頁\一共有123頁\編輯于星期一10

在不同生長因子刺激下干細胞可表現(xiàn)出不同分化潛能現(xiàn)在是10頁\一共有123頁\編輯于星期一11

（內胚層）

胃上皮（中胚層）

骨、軟骨、平滑肌、橫紋肌（外胚層）

神經(jīng)表皮、神經(jīng)節(jié)、復層鱗狀上皮人胚胎干細胞具分化的多潛能性

小鼠皮下注射

混合組織人胚胎干細胞現(xiàn)在是11頁\一共有123頁\編輯于星期一12

（1）去分化

一種干細胞向其前體細胞的逆向轉化的過程。2）.去分化和轉分化的能力現(xiàn)在是12頁\一共有123頁\編輯于星期一（2）轉分化（transdifferentiation）

一種組織類型的干細胞在適當條件下分化為另一種組織類型細胞的過程。

例一：將成年雄性小鼠的造血干細胞移植到雌鼠體內，3天后在雌鼠的神經(jīng)膠質細胞中檢測到Y染色體的存在，證明成體動物的造血干細胞可轉分化成為神經(jīng)膠質細胞。現(xiàn)在是13頁\一共有123頁\編輯于星期一14

例二：造血干細胞向骨骼肌細胞的轉分化現(xiàn)在是14頁\一共有123頁\編輯于星期一全能干細胞多能干細胞單能干細胞按分化潛能按發(fā)育狀態(tài)(來源)胚胎干細胞embryostemcell成體干細胞三，干細胞的分類現(xiàn)在是15頁\一共有123頁\編輯于星期一全能干細胞（Totipotentstemcell）

是指具有無限分化潛能,能分化成所有組織和器官的干細胞。換句話說,也就是具有形成完整個體分化潛能。16現(xiàn)在是16頁\一共有123頁\編輯于星期一多能干細胞：（pluripotentstemcell）具有分化出多種細胞組織的潛能。如造血干細胞、神經(jīng)干細胞。單能干細胞：（multipotentstemcell）只能向一種或兩種密切相關的細胞類型分化。如上皮組織基底層的干細胞，肌肉中的成肌細胞。17現(xiàn)在是17頁\一共有123頁\編輯于星期一多能干細胞具有增殖、分化兩種功能。

例如骨髓造血干細胞就是典型的多能干細胞。造血干細胞一般條件下處于休止狀態(tài)(Go期)，一定條件下能大量增殖、分化，然后由定向干細胞再分化成血液中至少12種類型的血細胞。18現(xiàn)在是18頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是19頁\一共有123頁\編輯于星期一二.干細胞來源上分:來源于胚胎---胚胎干細胞ESC

（EmbryonicStemCell）胚胎性生殖細胞EGC

（EmbryonicGermCell）來源于成體---成體組織來源的干細胞ASC（Adult-derivedStemCell）20現(xiàn)在是20頁\一共有123頁\編輯于星期一1981年，最早埃文斯(Evans)和考夫曼(Kaufman)從小鼠早期胚胎中分離出胚胎干細胞并在體外培養(yǎng)建立細胞系。1995年，美國從恒河猴囊胚中分離并克隆建立了第一個靈長類動物的胚胎干細胞系(一)胚胎干細胞現(xiàn)在是21頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是22頁\一共有123頁\編輯于星期一體細胞核移植（SCNT）是得到多能性干細胞的另一種途徑現(xiàn)在是23頁\一共有123頁\編輯于星期一成體誘導干細胞（iPS）現(xiàn)在是24頁\一共有123頁\編輯于星期一誘導產生的多功能性干細胞2006年，Takahashi和Yamnaka將幾個轉錄因子導入已分化的小鼠皮膚成纖維細胞，進而獲得了類似于胚胎干細胞的多能性干細胞，稱之為“誘導產生的多功能性干細胞”（inducedpluripotentstemcells,iPS細胞）。這一研究明確地證實了分化的細胞可以通過少數(shù)幾個因子的外源導入而被重編程到具有多能性的狀態(tài)，因而受到了整個生命科學領域的廣泛關注。現(xiàn)在是25頁\一共有123頁\編輯于星期一1.胚胎干細胞（embryonicstemcell,ES細胞）ESC定義：指從著床前的內細胞團或原始生殖細胞獲得的一種具有多潛能性、可發(fā)育成為各種細胞、同時可保持不分化狀態(tài)而持續(xù)生長的克隆細胞系。經(jīng)體外分化抑制培養(yǎng)分離的一種全能性細胞。可以分化成任何一種組織類型的細胞。26現(xiàn)在是26頁\一共有123頁\編輯于星期一2.胚胎干細胞的生物學特性

(1)ES細胞形態(tài)結構與核型：

各種動物的ES細胞具有與早期胚胎細胞相似的形態(tài)結構，細胞體積小、核大、有1個或多個核仁。

27現(xiàn)在是27頁\一共有123頁\編輯于星期一

(2)ES細胞的生長特性：增殖速度：18－24h分裂增殖一次

hES必須在含有白血病抑制因子（LIF）的培養(yǎng)基保持不分化狀態(tài)。28現(xiàn)在是28頁\一共有123頁\編輯于星期一鳥巢狀生長保持未分化的ES細胞

第一個人體胚胎干細胞（ES細胞)29現(xiàn)在是29頁\一共有123頁\編輯于星期一30現(xiàn)在是30頁\一共有123頁\編輯于星期一

(3)ES細胞高度分化潛能：

現(xiàn)在是31頁\一共有123頁\編輯于星期一（二）成體干細胞1.定義：存在于成人各種組織中，具有自我更新和向前分化為一種或多種成熟功能細胞的幼稚細胞。意義：1.負責更新死亡細胞，維持正常個體、組織、器官的結構和功能的完整性。2.病例情況下，負責分化和增殖，修復組織損傷。32現(xiàn)在是32頁\一共有123頁\編輯于星期一2.成體干細胞的生物學特性：（1）具有自我更新和分化潛能（2）數(shù)量少（3）存在于特定的微環(huán)境中（4）處于相對靜止狀態(tài)（5）體積小，細胞漿少，細胞核較大（6）成體干細胞的數(shù)量和活性隨年齡增加而減少現(xiàn)在是33頁\一共有123頁\編輯于星期一3.成體干細胞的分布現(xiàn)在是34頁\一共有123頁\編輯于星期一胚胎干細胞成體干細胞①來自胚泡的內細胞群來源于骨髓、外周血、角膜、視網(wǎng)膜、腦、骨骼肌、齒髓、肝、皮膚、胃腸道粘膜層和胰腺等②發(fā)育全能性，可誘導分化為機體分化較局限，部分成體干細胞（造血干細胞、骨髓間充質干細胞、神經(jīng)干細胞）有一定跨系、跨胚層的“可塑性”③無限的自我更新能力病理條件下才顯出一定的自我更新潛能④增殖能力強，便于應用增殖能力較弱，故不能完全取代胚胎干細胞4.與胚胎干細胞的比較現(xiàn)在是35頁\一共有123頁\編輯于星期一36間胚層組織類型干細胞轉分化為同胚層另一組織類型細胞間胚層組織類型干細胞轉分化為內胚層組織類型細胞間胚層組織類型干細胞轉分化為外胚層組織類型細胞由此認為，成體干細胞有較大的可塑性。血細胞肌細胞血細胞肝細胞血細胞腦細胞5.成體干細胞的可塑性：現(xiàn)在是36頁\一共有123頁\編輯于星期一第二節(jié)干細胞的醫(yī)學應用和研究狀況37現(xiàn)在是37頁\一共有123頁\編輯于星期一381999年，Science雜志編者Bloom：“干細胞給人類提供了極大的可能性：用干細胞修復病損的臟器和細胞缺損”，他還說“最終可能用干細胞制成像腎、肝這樣復雜的器官”。現(xiàn)在是38頁\一共有123頁\編輯于星期一

干細胞研究成為繼人類基因組大規(guī)模測序之后最具活力、最有影響和最有應用前景的生命學科研究領域，1999年干細胞研究被美國《科學》雜志評為1999年度世界十大科學之冠，2000年干細胞研究再次被《科學》雜志評為該年度世界十大科學成就之一。

現(xiàn)在是39頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞的應用最基本的，多能干細胞可以幫助我們理解人類發(fā)育過程中的復雜事件人體多能干細胞研究也能大大地改變研制藥品和進行安全性實驗的方法人體多能干細胞最為深遠的潛在用途是用來生產細胞和組織，它們可用于所謂的“細胞療法”。

現(xiàn)在是40頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是41頁\一共有123頁\編輯于星期一42源于胚胎干細胞的細胞已能或可能治療許多疾病神經(jīng)細胞心肌細胞B型胰島細胞軟骨細胞白細胞皮膚細胞肝細胞骨細胞視細胞骨骼肌細胞帕金森病心肌梗死糖尿病骨關節(jié)炎白血病燒傷和創(chuàng)傷肝炎骨質疏松癥視網(wǎng)膜退化肌營養(yǎng)不良治療現(xiàn)在是42頁\一共有123頁\編輯于星期一43成體干細胞中，造血干細胞（包括骨髓、臍血、羊膜和外周血中的干細胞）已用于治療某些遺傳病或慢性病。現(xiàn)在是43頁\一共有123頁\編輯于星期一44成體干細胞及其子代細胞移植或動員腦組織內的干細胞治療神經(jīng)退行性疾病已獲初步成效。動物實驗證實移植的神經(jīng)元可替代修復已損壞的神經(jīng)通路。臨床試驗也證實細胞替代治療可使癥狀緩解。現(xiàn)在是44頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞治療的特點1.一次性或幾次介入，永久性治療；2.不需要完全了解疾病發(fā)生的確切機理。現(xiàn)在是45頁\一共有123頁\編輯于星期一46造血干細胞移植

臨床應用

與新進展現(xiàn)在是46頁\一共有123頁\編輯于星期一什么是造血干細胞？造血干細胞(HemapoieticStemCell,HSC)是指一群在特定時期能夠分裂的未分化細胞，具有自我更新能力和產生高度特異性的功能后代細胞。現(xiàn)在是47頁\一共有123頁\編輯于星期一

胸腺、淋巴結造血干細胞定向造血干細胞造血祖細胞（CFU-GEMM）CFU-LCFU-ECFU-GMCFU--MKCFU-GCFU-M原淋原紅原粒原單原巨幼淋早幼紅早幼粒幼單幼巨中幼紅中幼粒顆粒巨大小淋巴晚幼紅晚幼粒產板巨網(wǎng)織紅裸巨

淋巴

紅細胞

粒細胞單核細胞血小板CD34+MNC現(xiàn)在是48頁\一共有123頁\編輯于星期一什么是造血干細胞移植？

造血干細胞移植(HemapoieticStemCellTransplantation,HSCT)是指將異體或自體的造血干細胞植入到受者體內，使其造血及免疫功能恢復。現(xiàn)在是49頁\一共有123頁\編輯于星期一根據(jù)供體的不同，HSCT分：

1、同基因(Syngeneic)：指同卵雙胎，供受者基因型完全相同。2、異基因(Allogeneic)：非同卵雙胎，人類白細胞抗原（HLA）相合，來自患者的兄弟姐妹，無關供髓者，臍帶血。

3、自體(Autologous)：自體解救措施。現(xiàn)在是50頁\一共有123頁\編輯于星期一根據(jù)HSCT來源的不同分為：骨髓移植：1～3×108有核細胞/kg

2.外周血造血干細胞移植：>2×106CD34+細胞/kg

3.臍帶血干細胞移植：>3×107有核細胞/kg

現(xiàn)在是51頁\一共有123頁\編輯于星期一主要適應癥(EBMT)淋巴瘤和骨髓瘤：53％，其中異基因4％，自體96％。白血病：32％，其中異基因76％，自體24％，包括AML、ALL、CML、MDS、CLL。實體腫瘤：7％，其中異基因8％，自體92％，包括、神經(jīng)母細胞瘤、腦膠質細胞瘤、胚胎細胞瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌等。非惡性疾病：4％，其中異基因92％，自體8％，包括再生障礙性貧血、范可尼氏貧血、地中海貧血、嚴重聯(lián)合免疫缺陷癥、自身免疫性疾病等。現(xiàn)在是52頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞移植過程自體造血干細胞移植：異體造血干細胞移植：供者細胞無須凍存，直接輸注。

合適患者凍存干細胞動員采集患者預處理支持治療植活40度水浴現(xiàn)在是53頁\一共有123頁\編輯于星期一APBSCT治療步驟和策略1、常規(guī)化療4～5個療程白血病患者達到CR后，鞏固治療4～5次；實體腫瘤消失或進入平臺期。2.外周血干細胞動員、采集及冷凍保存。3.預處理、細胞回輸。4.并發(fā)癥的防治及支持治療。現(xiàn)在是54頁\一共有123頁\編輯于星期一目前常規(guī)動員方案可歸納為2種方式:正常健康人采用：

G-CSF5ug/Kg/d×5-7dorGM-CSF5ug/Kg/d+G-CSF5ug/Kg/d病人作自身移植的動員方案為：化療方案+細胞因子（G-CSForGM-CSF+G-CSF）現(xiàn)在是55頁\一共有123頁\編輯于星期一三種不同冷藏方法的優(yōu)缺點1．4℃冰箱（直接冷藏）優(yōu)點：方法簡便，不需配制冷凍保存液。缺點：如>72h，細胞存活率及干細胞回收率明顯減少2．-80℃冰箱（緩慢降溫法）優(yōu)點：操作容易，花費時間短。缺點：需要專箱專用，保存時間只能在3—6個月之間。彌補方法：-80℃冰箱保存2小時后，再置入-176℃的液氮，可長期保存。3.程序降溫儀及-196℃液氮保存優(yōu)點：細胞經(jīng)程序降溫，損傷少，細胞存活率高且干細胞回收率高，保存的時間長。缺點：需要相應設備配置，操作時間長現(xiàn)在是56頁\一共有123頁\編輯于星期一

預處理預處理：指移植前給予患者亞致死劑量的化療和全身放療。預處理的目的

治療腫瘤最大程度清除患者體內殘存的腫瘤細胞為移植的干細胞留出空間，以便于其定位、增殖分化免疫抑制治療非腫瘤性疾病免疫抑制清除異常細胞提供細胞植入的空間現(xiàn)在是57頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞技術臨床應用

目前的研究表明，當組織器官受到損傷時，干細胞被激活，對受損的組織進行修復重建。但這種自身修復畢竟是有限的，必須通過移植干細胞才能達到治療相關疾病的目的。但是成體干細胞由于數(shù)量很少，難于克隆而使其應用受到限制。

現(xiàn)在是58頁\一共有123頁\編輯于星期一比較成熟的干細胞移植

臨床應用￥造血干細胞移植1.下肢缺血性疾病：糖尿病足、血栓閉塞性脈管炎、動脈硬化閉塞癥等。2.股骨頭壞死。3.缺血性心臟病：心梗……4.失代償期肝硬化。5.神經(jīng)系統(tǒng)疾患：腦梗死、肌萎縮性側索硬化癥（ALS）、腦脊髓損傷（因創(chuàng)傷、缺血、變性疾病等造成神經(jīng)元損傷）等。現(xiàn)在是59頁\一共有123頁\編輯于星期一來源大部分來源于骨髓或經(jīng)動員后采集的外周血干細胞。少數(shù)來源于臍血干細胞。現(xiàn)在是60頁\一共有123頁\編輯于星期一采集方法骨髓：密度梯度離心分離細胞。吸取單個核細胞。外周血：生長因子動員后細胞分離機采集單個核細胞。現(xiàn)在是61頁\一共有123頁\編輯于星期一糖尿病的干細胞治療現(xiàn)在是62頁\一共有123頁\編輯于星期一

胚胎干細胞的全能性為研究糖尿病的細胞治療開辟了新途徑。研究人員相繼用不同的方法獲得了分泌胰島素的細胞。

現(xiàn)在是63頁\一共有123頁\編輯于星期一

用胚胎干細胞誘導為胰島素分泌細胞并用于治療糖尿病的策略：

用細胞因子、天然化學物質與胚胎干細胞共培養(yǎng)，將胚胎干細胞誘導分化為胰島素分泌細胞。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些因子和特定的培養(yǎng)系統(tǒng)結合，可以誘導胚胎干細胞分化。

現(xiàn)在是64頁\一共有123頁\編輯于星期一

科學家將小鼠的胚胎干細胞誘導分化成能分泌胰島素的類似于胰島的結構。他們先將小鼠的胚胎干細胞培養(yǎng)成類胚體，并在此基礎上誘導出了α、β等多種胰島細胞的細胞群。現(xiàn)在是65頁\一共有123頁\編輯于星期一

這些細胞在植入糖尿病小鼠的皮下后糾正高血糖水平（未到正常），細胞在植入12天后發(fā)生血管化，其形態(tài)類似于胰腺的胰島，并保持著分泌胰島素的能力。

現(xiàn)在是66頁\一共有123頁\編輯于星期一

最近的研究結果表明，人胚胎干細胞也能分化成分泌胰島素的細胞。有實驗室培養(yǎng)了人胚胎干細胞，并讓它們自發(fā)形成類胚體；然后用多種生長因子誘導類胚體分化。現(xiàn)在是67頁\一共有123頁\編輯于星期一

試驗結果提示了類胚體可以自發(fā)分化成胰島β細胞。也有實驗進一步證實了人胚胎干細胞可自發(fā)分化為β細胞的現(xiàn)象。

現(xiàn)在是68頁\一共有123頁\編輯于星期一

類胚體中有1%～3%的細胞是胰島β細胞。在葡萄糖存在的情況下，這些細胞可以向培養(yǎng)基中分泌胰島素。現(xiàn)在是69頁\一共有123頁\編輯于星期一

由胚胎干細胞向胰島細胞分化的研究剛剛起步，如何完善誘導方案以獲得大量純化的功能性β細胞替代物是今后急需解決的問題。

現(xiàn)在是70頁\一共有123頁\編輯于星期一

干細胞定向分化為胰島β細胞的研究為糖尿病患者點燃了新的希望,也為研究人員提供了新的突破口,其勿庸置疑的成為治療糖尿病的最佳種子細胞,雖然目前存在很多問題,但隨著干細胞生物學的發(fā)展,相信將來肯定能克服以上困難,用細胞治療攻克糖尿病。現(xiàn)在是71頁\一共有123頁\編輯于星期一

干細胞移植在糖尿病足臨床研究

2003年11月-2007年4月治療380例，總有效率達87.2%，使患者疼痛、冷感緩解，行走間距延長，潰瘍愈合，免除了截肢致殘的嚴重后果。現(xiàn)在是72頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞移植術在手術室進行干細胞移植術患者接受全憑靜脈麻醉MNC配制成（1-6）×108細胞/ml細胞懸液按3cm×3cm間距進行肌肉注射

現(xiàn)在是73頁\一共有123頁\編輯于星期一

移植后臨床情況

疼痛緩解（87.2%）1-28d

冷感消失（90.8%）1-21d

行走間距延長（44.6%）4-6m

潰瘍縮小愈合（92.3%)3-6m

壞疽好轉(20.2%）4-6m現(xiàn)在是74頁\一共有123頁\編輯于星期一臨床研究病例選擇2004年7月～2007年4月224例股骨頭壞死患者接受動脈內骨髓干細胞移植治療病因皮質激素、外傷、飲酒、原因不明診斷髖關節(jié)X線攝片、MRI、CT核素掃描

現(xiàn)在是75頁\一共有123頁\編輯于星期一經(jīng)動脈干細胞移植術

股動脈穿刺DSA血管造影導管超選插入旋股內旋股外閉孔動脈骨髓單個核細胞懸液緩慢灌注入動脈內現(xiàn)在是76頁\一共有123頁\編輯于星期一治療結果—臨床指標

髖關節(jié)疼痛緩解率82.7%

行走間距延長54%

關節(jié)功能改善30.2%

總有效率達80.6%現(xiàn)在是77頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞移植6m血管造影前后對照現(xiàn)在是78頁\一共有123頁\編輯于星期一自體干細胞移植

治療失代償肝硬化36例失代償肝硬化:

乙型肝炎肝硬化27例

酒精肝硬化9例現(xiàn)在是79頁\一共有123頁\編輯于星期一術后1、4、8、12周觀察臨床癥狀：12周1.腹水減輕19例52.7%2.食欲改善28例77.7%3.體力好轉20例58.3%4.腹脹減輕17例47.2%現(xiàn)在是80頁\一共有123頁\編輯于星期一1.谷丙轉氨酶（ALT）逐漸減低

25例69.4%2.總膽紅素逐漸下降22例61.1%3.白蛋白逐漸升高27例75%4.凝血酶原活動度全部不同程度升高。現(xiàn)在是81頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞治療:自體骨髓干細胞、自體間充質干細胞、人臍帶間充質干細胞治療(2005年德國科學家率先將骨髓細胞治療肝損傷的研究應用于臨床，發(fā)現(xiàn)移植的骨髓干細胞可促進肝臟再生.)現(xiàn)在是82頁\一共有123頁\編輯于星期一臍血干細胞新技術預防和治療老年性癡呆（AD）

現(xiàn)在是83頁\一共有123頁\編輯于星期一老年性癡呆即阿爾茨海默病性癡呆（dementiaAlzheimerDisease）:大腦細胞退化萎縮，細胞密度降低的器質性疾病。導致死亡的第4位原因，神經(jīng)科疾病的第1位。多種機制下神經(jīng)元的損傷引起臨床用藥受到限制,抗癡呆藥物的研究與開發(fā)相對困難

背景現(xiàn)在是84頁\一共有123頁\編輯于星期一創(chuàng)意主體

一．采集臍血干細胞

二．干細胞保存及體外增殖

三.體外培養(yǎng)神經(jīng)干細胞定向誘導及基因修飾

四．神經(jīng)干細胞的植入及植入后監(jiān)測

現(xiàn)在是85頁\一共有123頁\編輯于星期一采集臍血干細胞臍帶靜脈血采集臍血庫密度梯度法有核細胞DMSO處理添加保護劑冷凍管程控降溫自動化監(jiān)探的保存系統(tǒng)現(xiàn)在是86頁\一共有123頁\編輯于星期一？干細胞的保存問題現(xiàn)在是87頁\一共有123頁\編輯于星期一體外增殖模型SCFGM-CSF5ML增殖前增殖后６０ＭＬ庫血現(xiàn)在是88頁\一共有123頁\編輯于星期一？神經(jīng)干細胞進入腦的持續(xù)分化如何克服AD患者腦內不利環(huán)境現(xiàn)在是89頁\一共有123頁\編輯于星期一神經(jīng)干細胞定向誘導、基因修飾及植入

解凍干細胞神經(jīng)干細胞神經(jīng)干細胞體外基因修飾

體外培養(yǎng)加入優(yōu)勢誘導劑

測定細胞因子發(fā)揮將細胞因子排在該球中包被了細胞因子最大效率的時間（Tx）距球心（R-VTx）的球面上的生物降解球測生物可降解球降解速度（v）損壞腦區(qū)定位

定期復查植入腦內現(xiàn)在是90頁\一共有123頁\編輯于星期一R-VTxX=1現(xiàn)在是91頁\一共有123頁\編輯于星期一神經(jīng)干細胞定向誘導、基因修飾及植入

解凍干細胞神經(jīng)干細胞神經(jīng)干細胞體外基因修飾

體外培養(yǎng)加入優(yōu)勢誘導劑

測定細胞因子發(fā)揮將細胞因子排在該球中包被了細胞因子最大效率的時間（Tx）距球心（R-VTx）的球面上的生物降解球測生物可降解球降解速度（v）損壞腦區(qū)定位

定期復查植入腦內現(xiàn)在是92頁\一共有123頁\編輯于星期一社會價值及其優(yōu)越性治療徹底，無復發(fā)可能；可行性強；利用自身干細胞，不產生免疫排斥；無需長期用藥，對機體不產生副作用；針對性強，成功率高；一次性治愈，減輕病人痛苦；自身干細胞建庫，無須等待移植源；給生命一種保障，減輕患者經(jīng)濟負擔。減輕家庭負擔。提高老年人生活質量，享有幸福晚年；一定程度上減輕社會負擔除用于治療外，亦可用于預防。可望實現(xiàn)人類夢寐以求的“永葆青春”的愿望。現(xiàn)在是93頁\一共有123頁\編輯于星期一造血干細胞現(xiàn)在是94頁\一共有123頁\編輯于星期一造血干細胞移植治療白血病造血干細胞移植是從60年代逐漸發(fā)展起來的一種醫(yī)療技術，最初是通過抽取供體骨髓而救治，使急性白血病的長期生存率提高到50—70％。為發(fā)展此項技術作出重要貢獻的美國醫(yī)學家托馬斯（E.D．Thomas）因此而獲得了1990年度的諾貝爾醫(yī)學獎。現(xiàn)在是95頁\一共有123頁\編輯于星期一造血干細胞移植過程的示意圖HLA配型供體造血干細胞的采集患者超大劑量放化療預處理，摧毀其免疫系統(tǒng)供體造血干細胞輸入患者體內，重建其免疫系統(tǒng)現(xiàn)在是96頁\一共有123頁\編輯于星期一造血干細胞的來源骨髓從外周血富集造血干細胞臍帶血提取干細胞解決HLA配型問題*建立骨髓庫發(fā)達國家現(xiàn)已建立了多達數(shù)百萬人的骨髓庫網(wǎng)絡．多達70％需要移植的病人可獲捐贈造血干細胞而得以挽救生命*臍帶血干細胞庫現(xiàn)在是97頁\一共有123頁\編輯于星期一神經(jīng)干細胞過去認為成年腦內沒有干細胞,神經(jīng)細胞終生成活，損傷也是永久的；1988年Frederken等在發(fā)育的胚胎中得到干細胞樣細胞---神經(jīng)干細胞成人腦紋狀體培養(yǎng)出干細胞樣CNS多潛能細胞，后在腦內不同部位都發(fā)現(xiàn)了神經(jīng)干細胞的存在現(xiàn)在是98頁\一共有123頁\編輯于星期一成人腦中至少在3個腦區(qū)存在：室管膜下層（subventricularzone,SVZ）,海馬的齒狀回和嗅回。人類胚胎來源的神經(jīng)干細胞在體外培養(yǎng)，能分化產生神經(jīng)元、星型細胞和少突膠質細胞等。對成體神經(jīng)干細胞行為的研究為腦損傷修復及神經(jīng)細胞功能性疾病的治療提供了新的思路。現(xiàn)在是99頁\一共有123頁\編輯于星期一神經(jīng)干細胞的分布Back現(xiàn)在是100頁\一共有123頁\編輯于星期一腎臟疾病的干細胞治療現(xiàn)在是101頁\一共有123頁\編輯于星期一雄性小鼠骨髓細胞移植雌性小鼠雌性小鼠腎臟遷移腎小管上皮細胞分化腎小管內現(xiàn)在是102頁\一共有123頁\編輯于星期一

結果表明，骨髓內的干細胞能橫向分化為腎小管上皮細胞，有助于腎小管上皮細胞的正常更新和腎小管損傷后的再生修復，為干細胞移植治療腎小管壞死提供了理論依據(jù)。現(xiàn)在是103頁\一共有123頁\編輯于星期一原理：

1.胚胎干細胞一方面可以新生腎小球的毛細血管內皮細胞、臟層細胞以及恢復腎小球基膜，恢復和提高腎小球的濾過膜，對由于腎小球病變所造成的尿液改變、高血壓、水腫等癥狀都會有明顯的改善；現(xiàn)在是104頁\一共有123頁\編輯于星期一2.胚胎干細胞還可以分化產生免疫平衡細胞，如：Ts細胞、Th細胞等，平衡免疫反應，消除造成腎小管損傷的各種因素，避免對腎小球的持續(xù)損傷，防止病情進一步惡化。胚胎干細胞移植對各種腎小球疾病都有很好的治療效果。現(xiàn)在是105頁\一共有123頁\編輯于星期一胚胎干細胞、臍血干細胞、骨髓間充質干細胞的應用比較現(xiàn)在是106頁\一共有123頁\編輯于星期一1.骨髓移植是用針插入骨中抽取，需骨髓穿刺，麻醉并住院一天，局部有時會淤血或疼痛。移植時HLA須完全相合，同胞間約有25%的機會相合，非親屬間的配對成功率只有十萬分之一。排斥反應較重，常是造成移植失敗的主因。現(xiàn)在是107頁\一共有123頁\編輯于星期一2.臍帶血采集時對產婦、新生兒無影響。臍帶血移植時HLA不須完全相合，發(fā)生排斥反應程度相對較輕。胚胎干細胞由于采集的時間,干細胞表面抗原表達很少,因此不產生排斥免疫反應,而且由于其外源性，病人本身沒有創(chuàng)傷。相對于骨髓內的干細胞和臍帶血干細胞移植，胚胎干細胞所引發(fā)的后遺癥更低，而且干細胞的排斥機率也低。現(xiàn)在是108頁\一共有123頁\編輯于星期一2.胚胎干細胞的濃度高而且品質優(yōu)良，約為骨髓干細胞濃度的20到50倍，為胚胎干細胞濃度的5倍左右，細胞的增生能力也比較高。

3.移植胚胎干細胞比移植臍帶血干細胞或骨髓或周邊血干細胞帶感染到病毒的可能性也較低。現(xiàn)在是109頁\一共有123頁\編輯于星期一

干細胞基礎研究進展現(xiàn)在是110頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是111頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是112頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞改善疾病的可能機制（一）1.內源性調控：（1）細胞內蛋白對干細胞分裂的調控

（2）轉錄因子的調控2.外源性調控：（1）分泌因子

（2）膜蛋白介導的細胞間的相互作用

（3）整合素與細胞外基質3.干細胞具有可塑性與細胞相關現(xiàn)在是113頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞改善疾病的可能機制（二）與微環(huán)境相關現(xiàn)在是114頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是115頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是116頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞治療的機制—微環(huán)境分化干細胞是保持靜止狀態(tài)還是自我復制,或定向分化,是由其鄰近的體細胞組成的微環(huán)境決定的。這個微環(huán)境能夠提供一些因子維持干細胞的未分化狀態(tài)并能把誘導干細胞發(fā)生分化的因子排斥在外。但這個微環(huán)境的容納能力有限,一旦干細胞的數(shù)量超過這個微環(huán)境的容納能力,干細胞就會從這個微環(huán)境中分離出來并發(fā)生分化。現(xiàn)在是117頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞改善疾病的可能機制（三）與系統(tǒng)環(huán)境相關現(xiàn)在是118頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是119頁\一共有123頁\編輯于星期一干細胞改善疾病的可能機制（四）可能的分子機制現(xiàn)在是120頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是121頁\一共有123頁\編輯于星期一Cytokine

ReceptorBCAPPDK1Gab1