第1章

發(fā)酵工程第2節(jié)

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用第2課時

微生物的純培養(yǎng)傳統(tǒng)發(fā)酵通常直接利用原材料中天然酵母菌工業(yè)生產(chǎn)通常使用人工選育的高活性釀酒酵母如何獲得純種酵母菌？在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體成為培養(yǎng)物。3、純培養(yǎng)的步驟包括：配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)一、微生物的純培養(yǎng)1、培養(yǎng)物：2、純培養(yǎng)：由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。4、“平板劃線”一、微生物的純培養(yǎng)（1）原理：通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞

③試管口通過火焰

④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液

⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞

⑥將皿蓋打開一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃3-5條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連4、“平板劃線”重復(fù)實驗：劃3個平板空白對照：1個不劃線一、微生物的純培養(yǎng)（2）操作分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。菌落特征：大小、形狀、隆起程度、顏色等。二、探究·實踐

酵母菌的純培養(yǎng)不同菌落的顏色與形狀分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。菌落特征：大小、形狀、隆起程度、顏色等。功能：鑒定菌種的重要依據(jù)獲得單菌落的方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法二、探究·實踐

酵母菌的純培養(yǎng)方法步驟1、制備培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20g葡萄糖、15-20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml。滅菌將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15-30min。將5-8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃滅菌2h。倒平板待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。二、探究·實踐

酵母菌的純培養(yǎng)1234（1）拔出錐形瓶的棉塞（2）將瓶口迅速通過火焰（3）用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10-20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋（4）等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒轉(zhuǎn)過來放置倒平板的具體步驟二、探究·實踐

酵母菌的純培養(yǎng)1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。2.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。4.怎么確定所倒平板未被雜菌污染？3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？既可以防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。思考·討論2、接種和分離酵母菌通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)可以分離得到單菌落。單個細(xì)胞微生物群單個菌落連續(xù)劃線分散或稀釋生長繁殖原理：“平板劃線”實驗操作連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法二、探究·實踐

酵母菌的純培養(yǎng)①接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次②劃線首尾不能相接③每次劃線前接種環(huán)進(jìn)行滅菌④劃線后，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)注意：為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？思考：二、探究·實踐

酵母菌的純培養(yǎng)灼燒時期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細(xì)胞避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染菌種二、探究·實踐

酵母菌的純培養(yǎng)三種灼燒的目的不同3、培養(yǎng)酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右(培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h。思考：為什么要同時放入未接種的平板？作對照，該培養(yǎng)皿無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染二、探究·實踐

酵母菌的純培養(yǎng)1、下列為幾位同學(xué)描述的平板劃線接種法的劃線方式，其中正確的是（

）A.B.C.D.C課堂練習(xí)2、下列關(guān)于倒平板及對菌種純化的說法，正確的是()A.倒平板時左手將滅過菌的培養(yǎng)皿蓋完全打開，右手將錐形瓶中培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿(10～20mL)，左手立即蓋上培養(yǎng)皿蓋B.使用已滅菌的接種環(huán)及培養(yǎng)基之后不需要再滅菌C.平板冷凝后要將平板倒置，以防皿蓋上的冷凝水流入培養(yǎng)基D.平板劃線法是首先進(jìn)行梯度稀釋，然后將稀釋的菌種通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上連續(xù)劃線，從而將聚集的菌種逐漸分散形成單個菌落C課堂練習(xí)3、下面是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為1、2、3、4、5。下列敘述正確的是()A．在五個區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌B．劃線操作時完全打開皿蓋，劃完立即蓋上以防雜菌污染C．接種時不能劃破培養(yǎng)基，否則會影響菌落的分離和觀察D．1、5區(qū)的劃線最終要連接起來，以便比較前后的菌落數(shù)C課堂練習(xí)酵母菌的純培養(yǎng)2.接種和分離酵母菌1.制備培養(yǎng)基3.培養(yǎng)酵母菌①配制培養(yǎng)基（馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、水）②滅菌③倒平板（在酒精燈火焰附近操作）培養(yǎng)基：濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌鍋）培養(yǎng)皿：干熱滅菌（干熱滅菌鍋）課堂小結(jié)1、下列有關(guān)微生物的分離與培養(yǎng)的敘述中，不正確的是()A．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染B．倒置平板可防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落造成污染C．倒平板時將培養(yǎng)皿的蓋拿開，以便于將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿D．檢驗培養(yǎng)基是否被雜菌污染的最有效方法是將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)作業(yè)2、有關(guān)純化酵母菌實驗操作的敘述，錯誤的是()A.在第二區(qū)域內(nèi)劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液B.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物C.每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種D.劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)能及時殺死接種環(huán)上的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者CA3、下列有關(guān)細(xì)菌培養(yǎng)的敘述，正確的是()A．在瓊脂固體培養(yǎng)基上長出的單個菌落含有多種細(xì)菌B．在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進(jìn)細(xì)菌生長C．向液體培養(yǎng)基中通入氧氣能促