紫外可見吸收光譜分析演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有91頁\編輯于星期日（優(yōu)選）紫外可見吸收光譜分析現(xiàn)在是2頁\一共有91頁\編輯于星期日第一節(jié)概述

現(xiàn)在是3頁\一共有91頁\編輯于星期日一、儀器分析方法分類（回顧）：電化學(xué)分析法光學(xué)分析法色譜分析法其它分析方法原子光譜法分子光譜法

X射線光譜法核磁波譜

紫外—可見光光譜法熒光光譜法紅外吸收光譜法拉曼光譜法

現(xiàn)在是4頁\一共有91頁\編輯于星期日本章是儀器分析課程中光分析方法的第一章，光分析方法中的一些基本理論、基本概念、基本專業(yè)術(shù)語，在本章中首次出現(xiàn)并應(yīng)用。紫外－可見吸收光譜法歷史較久遠(yuǎn)，應(yīng)用十分廣泛，與其它各種儀器分析方法相比，紫外－可見吸收光譜法所用的儀器簡單、價(jià)廉，分析操作也比較簡單，而且分析速率較快。在有機(jī)化合物的定性、定量分析方面，例如化合物的鑒定、結(jié)構(gòu)分析和純度檢查以及在藥物、天然產(chǎn)物化學(xué)中應(yīng)用較多。

現(xiàn)在是5頁\一共有91頁\編輯于星期日光分析的基本過程：（1）能源提供能量；（2）能量與被測物之間的相互作用；（3）產(chǎn)生信號。基本特點(diǎn)：（1）所有光分析法均包含三個(gè)基本過程；（2）選擇性測量，不涉及混合物分離（不同于色譜分析）；（3）涉及大量光學(xué)元器件。現(xiàn)在是6頁\一共有91頁\編輯于星期日電磁幅射的波長分布γ射線：5～140pm

X射線：10－3～10nm光學(xué)區(qū)：10～1000μm

遠(yuǎn)紫外區(qū)：10～200nm

近紫外區(qū)：200～380nm

可見區(qū)：380～780nm近紅外區(qū)：0.78～2.5μm中紅外區(qū)：2.5～50μm遠(yuǎn)紅外區(qū)：50～1000μm微波：0.1mm～1m無線電波：>1m紫外－可見吸收光譜是基于分子內(nèi)電子躍遷，是分子光譜。現(xiàn)在是7頁\一共有91頁\編輯于星期日電磁輻射的基本性質(zhì)電磁輻射（電磁波）：以接近光速（真空中為光速）傳播的能量；

c=λν=ν/σ

E=hν=hc/λc：光速=2.998×1010cm·s；λ：波長；ν：頻率；σ：波數(shù)；E：能量；

h

：普朗克常數(shù)＝6.624×10-34J·s

電磁輻射具有波動性和微粒性；現(xiàn)在是8頁\一共有91頁\編輯于星期日分子光譜（帶狀光譜）：基于分子中電子能級、振-轉(zhuǎn)能級躍遷；紫外光譜法（UV）；紅外光譜法（IR）；分子熒光光譜法（MFS）；分子磷光光譜法（MPS）；核磁共振與順磁共振波譜（N）；現(xiàn)在是9頁\一共有91頁\編輯于星期日不同物質(zhì)具有不同的分子結(jié)構(gòu)，對不同波長的光會產(chǎn)生選擇性吸收，因而具有不同的吸收光譜。而各種化合物，無機(jī)化合物或有機(jī)化合物吸收光譜的產(chǎn)生在本質(zhì)上是相同的，都是外層電子躍遷的結(jié)果，但二者在電子躍遷類型上有一定區(qū)別。現(xiàn)在是10頁\一共有91頁\編輯于星期日有機(jī)化合物吸收可見光或紫外光，σ、π和n電子就躍遷到高能態(tài)，可能產(chǎn)生的躍遷有σ→σ*、n→σ*、π→π*和n→π*。各種躍遷所需要的能量或吸收波長與有機(jī)化合物的基團(tuán)、結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系，根據(jù)此原理進(jìn)行有機(jī)化合物的定性和結(jié)構(gòu)分析。

無機(jī)絡(luò)合物吸收帶主要是由電荷轉(zhuǎn)移躍遷和配位場躍遷而產(chǎn)生的。電荷轉(zhuǎn)移躍遷的摩爾吸收系數(shù)很大，根據(jù)朗伯－比爾定律，可以建立這些絡(luò)合物的定量分析方法。現(xiàn)在是11頁\一共有91頁\編輯于星期日現(xiàn)在是12頁\一共有91頁\編輯于星期日二、應(yīng)用：1．定量分析：

有色物質(zhì)→可見光區(qū)：340~800nm

對紫外線有吸收的無色物質(zhì)→紫外光區(qū)：

200~340nm

靈敏度ppm，精密度RSD:0.5%現(xiàn)在是13頁\一共有91頁\編輯于星期日二、應(yīng)用：2．定性分析：提供某些分子的部分結(jié)構(gòu)信息例：苯的B帶吸收（230~270nm間出現(xiàn)7個(gè)精細(xì)結(jié)構(gòu)的峰）現(xiàn)在是14頁\一共有91頁\編輯于星期日

第二節(jié)吸收定律與光譜圖現(xiàn)在是15頁\一共有91頁\編輯于星期日一、朗伯—比耳定律㈠吸光度(A)的定義I0It

當(dāng)一束平行光通過均勻的溶液介質(zhì)時(shí)，光的一部分被吸收，一部分被器皿反射。設(shè)入射光強(qiáng)度為I0，透射光強(qiáng)度為It。則吸光度(A)表示物質(zhì)對光的吸收程度，其定義為:現(xiàn)在是16頁\一共有91頁\編輯于星期日一、朗伯-比耳定律㈡朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。⒈當(dāng)C采用重量單位時(shí)，吸收定律表達(dá)為:

A=abc

式中：a：吸光系數(shù)，L/g*cmb：光程，cmc：濃度，g/L

可知：A與c呈線形關(guān)系，為定量分析的理論依據(jù)現(xiàn)在是17頁\一共有91頁\編輯于星期日一、朗伯—比耳定律2.當(dāng)C采用摩爾濃度時(shí)，吸收定律表達(dá)為:

A=εbc

ε:摩爾吸光系數(shù)，L/mol·cmc:摩爾濃度，mol/L現(xiàn)在是18頁\一共有91頁\編輯于星期日一、朗伯—比耳定律㈢透光率（T）

I0

It

定義為：

則：

應(yīng)用：儀器的調(diào)整

T（%）：0~100

（全吸收）

（無吸收）

A：∞

~0現(xiàn)在是19頁\一共有91頁\編輯于星期日二、紫外-可見吸收光譜圖定義：固定試樣濃度和吸收池厚度，以吸收度（或透光率）對波長所作的曲線。

[例]0.001mol·L-1高錳酸鉀、重鉻酸鉀光譜圖。掃描現(xiàn)在是20頁\一共有91頁\編輯于星期日-胡羅卜素咖啡因阿斯匹林丙酮幾種有機(jī)化合物的吸收光譜圖。現(xiàn)在是21頁\一共有91頁\編輯于星期日濃度與吸收曲線現(xiàn)在是22頁\一共有91頁\編輯于星期日紫外-可見吸收光譜圖的應(yīng)用

定量：一般總有一最大吸收峰，其對應(yīng)波長稱為最大吸收波長（λmax）,往往以λmax作為定量分析時(shí)的單色光波長，可最大限度地提高靈敏度。

簡單定性，回答“是不是”的問題。現(xiàn)在是23頁\一共有91頁\編輯于星期日第三節(jié)紫外-可見光分光光度計(jì)

現(xiàn)在是24頁\一共有91頁\編輯于星期日一、分類單光束分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)

單波長分光光度計(jì)

雙波長分光光度計(jì)可見光分光光度計(jì)

紫外-可見光分光光度計(jì)現(xiàn)在是25頁\一共有91頁\編輯于星期日現(xiàn)在是26頁\一共有91頁\編輯于星期日現(xiàn)在是27頁\一共有91頁\編輯于星期日二、基本光路圖現(xiàn)在是28頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）

光源單色器樣品室檢測器顯示現(xiàn)在是29頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）1.光源：提供穩(wěn)定的復(fù)合光

可見光區(qū)：鎢燈、碘鎢燈。其輻射波長范圍在320～2500nm。

紫外區(qū)：氫燈、氘燈。發(fā)射185～400nm的連續(xù)光譜。現(xiàn)在是30頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）2.單色器

作用：從光源的復(fù)合光中分離出所需單色光。組成：由色散元件和狹縫組成。光源單色器樣品室檢測器顯示現(xiàn)在是31頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）2.單色器①色散元件作用：將復(fù)合光分解成連續(xù)單色光。A.棱鏡（靠折射作用分光）可以得到波長非均勻分布的連續(xù)光譜，光強(qiáng)損失較大。400nm800nm現(xiàn)在是32頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）

棱鏡（Prism）：棱鏡的色散作用是基于構(gòu)成棱鏡的光學(xué)材料對不同波長的光具有不同的折射率。波長大的折射率小，波長小的折射率大。Cornu棱鏡bLittrow棱鏡現(xiàn)在是33頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）棱鏡：依據(jù)不同波長光通過棱鏡時(shí)折射率不同入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ2800400500

600現(xiàn)在是34頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。提供波長均勻分布的連續(xù)光譜，可用于吸收光譜的自動掃描。原理：

利用光通過光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光.。光柵衍射示意圖M1光屏透鏡平面透射光柵出射狹縫M2現(xiàn)在是35頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）ABCDdP0距離相對強(qiáng)度P’112光柵例：7530型紫外—可見光分光光度計(jì)。步進(jìn)馬達(dá)帶動光柵，得到勻速變化的單色光。光柵制作：機(jī)刻600～2880條/mm復(fù)制光柵（照相，化學(xué)腐蝕）現(xiàn)在是36頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）2.單色器②狹縫

由銳邊金屬片組成A.入射狹縫：位于光源與色散元件之間。作用：是限制雜散光進(jìn)入色散元件。B.出口狹縫：位于色散元件與吸收池之間。作用：把額定波長單色光分離出單色器。光源樣品室檢測器顯示現(xiàn)在是37頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）2.單色器②狹縫

狹縫寬度可調(diào)

定性分析時(shí)，窄一點(diǎn)，單色光純，但光強(qiáng)弱。

定量分析時(shí)，寬一點(diǎn)，靈敏度高。

例：7530型分光光度計(jì)0.2nm，1.0nm，2.0nm現(xiàn)在是38頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）3.

吸收池（也可稱為比色皿、樣品池）

作用：盛放試液。①材料

A.普通光學(xué)玻璃：用于可見光區(qū)，因?yàn)樗兆贤夤狻?/p>

B.石英玻璃：用于紫外光區(qū)，亦可用于可見光區(qū)。現(xiàn)在是39頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）3.吸收池（也可稱為比色皿、樣品池）

②寬度：0.5cm，1cm，2cm③使用注意事項(xiàng)固定使用同一比色皿，因?yàn)槊總€(gè)比色皿的壁厚、光程、吸光特性等不盡相同。現(xiàn)在是40頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）4.檢測器一類光電轉(zhuǎn)換元件。

常用類型有：①光電池②光電管③光電倍增管現(xiàn)在是41頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）4.檢測器①光電池

SeFe(Cu)h玻璃Ag(Au)透明膜-收集極塑料--對500~600nm光靈敏，用于可見光區(qū)。容易產(chǎn)生疲勞效應(yīng)，便易。72G型光電比色計(jì)。

現(xiàn)在是42頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）4.檢測器②光電管90VDC直流放大陰極R-+光束e陽極絲（Ni）抽真空靈敏度比光電池大例：721型可見光分光光度計(jì)現(xiàn)在是43頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）4.檢測器③光電倍增管1個(gè)光子產(chǎn)生106~107個(gè)電子石英套光束柵極，Grill陽極屏蔽對光特別敏感，靈敏度比光電管高200倍。對供電量要求高，需要達(dá)到0.01～0.05%的穩(wěn)定性。現(xiàn)在是44頁\一共有91頁\編輯于星期日一種新型檢測器：光電二極管陣列，PDASiO2窗p

型硅n型硅基pnpnpnpnpnpn0.025mm2.5mm側(cè)視(crosssection)頂視(topview)光束512個(gè)1024個(gè)現(xiàn)在是45頁\一共有91頁\編輯于星期日三、主要部件（以單光束分光光度計(jì)為例）5.顯示器將檢測器產(chǎn)生的光電流用直觀的形式顯示出來。例：72G型722型7530型

電表指針顯示數(shù)字形式顯示屏幕形式顯示現(xiàn)在是46頁\一共有91頁\編輯于星期日第四節(jié)測試條件現(xiàn)在是47頁\一共有91頁\編輯于星期日一、分析波長1.一般情況下，選λmax作分析波長，以便獲得最高的靈敏度。2.對于高濃度樣品，為保證足夠的工作直線的線形范圍，可選用靈敏度較低的吸收峰波長。3.λmax受到其它波峰干擾時(shí)，可選用別的吸收峰波長。現(xiàn)在是48頁\一共有91頁\編輯于星期日二、出口狹縫寬度最佳寬度的選擇方法：在A不減小時(shí)的最大狹縫寬度。（因?yàn)椋谝欢▽挾确秶鷥?nèi)，A不變；過大時(shí)，由于干擾譜帶或非吸收光出現(xiàn)在光譜通帶內(nèi)，A減小。）現(xiàn)在是49頁\一共有91頁\編輯于星期日三、合適的吸收度范圍根據(jù)吸收定律，A=0.4343時(shí)，吸收度測試量誤差最小。實(shí)際工作中，將試樣吸收度控制在0.2～0.8之間。控制方法：選擇合適的比色皿寬度，稀釋待測樣等。現(xiàn)在是50頁\一共有91頁\編輯于星期日第五節(jié)試樣體系條件的選擇現(xiàn)在是51頁\一共有91頁\編輯于星期日顯色反應(yīng)在分光光度分析中，利用顯色反應(yīng)把待測組分X轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩衔铮缓笤龠M(jìn)行測定。使試樣中的被測組分與化學(xué)試劑作用生成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)。

mX（待測物）＋nR（顯色劑）＝XmRn（有色化合物）顯色反應(yīng)主要有配位反應(yīng)和氧化還原反應(yīng)，其中絕大多數(shù)是配位反應(yīng)。現(xiàn)在是52頁\一共有91頁\編輯于星期日選擇顯色反應(yīng)的一般標(biāo)準(zhǔn)1、靈敏度高選擇較大(104～105)的顯色反應(yīng)。2、選擇性好顯色劑僅與被測組分顯色而與其它共存組分不顯色。避免共存組分干擾。3、有色物組成固定如：

Fe3++磺基水楊酸→三磺基水楊酸鐵(黃色)

（組成固定）

Fe3++SCN-→FeSCN2+、Fe(SCN)2+……

（組成不固定）現(xiàn)在是53頁\一共有91頁\編輯于星期日

4、有色物穩(wěn)定性高其它離子干擾才小。如三磺基水楊酸鐵的Kf=1042,F-

、H3PO4

對它無干擾。

5、顯色過程易于控制而且有色化合物與顯色劑之間的顏色差別應(yīng)盡可能大。現(xiàn)在是54頁\一共有91頁\編輯于星期日一、酸堿度①影響顯色劑的平衡濃度和顏色

HR?H++R-nR-+Mn+?MRn②影響被測物質(zhì)的存在狀態(tài)

pH升高，M→M(OH)……M(OH)n甚至↓③影響絡(luò)合物的組成及顏色在pH＝2～3Fe(ssal)+

紫紅色在pH＝4～7Fe(ssal)22-

棕橙色

在pH＝8～10Fe(ssal)3

黃色在pH>12Fe(OH)3

沉淀現(xiàn)在是55頁\一共有91頁\編輯于星期日一、酸堿度pH會影響顯色劑的解離，被測離子的水解等，所以，要選擇最佳酸度，并用緩沖液來控制。ApH選擇最佳pH值方法：固定試液濃度，改變pH值測A，做A-pH圖，找出對A影響最小的pH值范圍。現(xiàn)在是56頁\一共有91頁\編輯于星期日二、顯色劑濃度1、顯色劑的用量顯色反應(yīng)一般可表示為M+R?MR顯色劑用量，適當(dāng)過量。Aab(1)CRa(2)CR(3)CR現(xiàn)在是57頁\一共有91頁\編輯于星期日二、顯色劑濃度2、最佳濃度選擇作A-C顯色劑圖，找出對A影響最小的濃度范圍。AC顯色劑現(xiàn)在是58頁\一共有91頁\編輯于星期日三、顯色時(shí)間顯色反應(yīng)有快慢，有的有色配合物容易褪色，因此不同的顯色反應(yīng)需放置不同的時(shí)間，并在一定的時(shí)間范圍內(nèi)進(jìn)行比色測定。試液自加入顯色劑等且定容后開始計(jì)時(shí)，測A，制作A－t曲線，(2)、(3)用秒表控時(shí)t-minab(1)(3)t-mint-mina(2)現(xiàn)在是59頁\一共有91頁\編輯于星期日三、顯色時(shí)間試液顏色常隨時(shí)間而變化。

1.找到對顏色變化影響最小的時(shí)間段。2.每個(gè)試液都要有相同的顯色時(shí)間。A

t現(xiàn)在是60頁\一共有91頁\編輯于星期日四、溫度有些反應(yīng)需要加熱。有些顯色劑或有色配合物在較高溫度下易分解褪色。此外溫度對光的吸收及顏色深淺也有影響，要求標(biāo)準(zhǔn)溶液和被測溶液在測定過程中溫度一致。固定其它條件，改變T，作A~T曲線，尋找適宜反應(yīng)溫度。TATATATATA現(xiàn)在是61頁\一共有91頁\編輯于星期日四、溫度溫度能影響顯色反應(yīng)的速度，影響顏色的穩(wěn)定性。據(jù)此可以找到最佳的溫度。有些顯色反應(yīng)受溫度影響較大，這時(shí)候，要控制恒定的溫度。現(xiàn)在是62頁\一共有91頁\編輯于星期日

5、溶劑：有機(jī)溶劑可降低有色化合物的離解度。合適的表面活性劑可增溶、增敏、增穩(wěn)。6、共存干擾離子的影響及消除：包括：正干擾（共存離子本身有色or與顯色劑反應(yīng)，在測量條件下有吸收）和負(fù)干擾（共存離子引起顯色反應(yīng)不完全）消除干擾的方法(a)控制酸度； (b)加入掩蔽劑；(c)改變干擾離子價(jià)態(tài)； (d)分離干擾離子。現(xiàn)在是63頁\一共有91頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)：鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵

鐵鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0100mg/mL0.1%鄰二氮菲（又稱鄰菲咯琳）水溶液1%鹽酸羥胺水溶液HAc-NaAc緩沖溶液（pH=4.6）稱取136g優(yōu)級純醋酸鈉，加120mL冰醋酸，加水溶解后，稀釋至500mL現(xiàn)在是64頁\一共有91頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)：鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵

橙紅色配合物的最大吸收波長在508nm處，摩爾吸光系數(shù)ε508=1.1×104，反應(yīng)的靈敏度、穩(wěn)定性、選擇性均較好。此反應(yīng)可用于微量Fe2+的測定，如果鐵以Fe3+的形式存在，則應(yīng)預(yù)先加入還原劑鹽酸羥胺或?qū)Ρ蕉訉e3+還原成Fe2+。4Fe3++2NH2OH—→4Fe2++N2O+4H++H2O

羥胺現(xiàn)在是65頁\一共有91頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)：鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵

Bi3+、Cd2+、Hg+、Zn2+、Ag+等離子與鄰二氮菲生成沉淀；Cu2+、Co2+、Ni2+等離子則形成有色配合物，因此，當(dāng)這些離子共存時(shí)，應(yīng)注意它們的干擾。鋁和磷酸鹽含量大時(shí)，使反應(yīng)速度慢，CN－存在將與Fe2+生成配合物，嚴(yán)重干擾測定，需預(yù)先除去。酸度高時(shí)，反應(yīng)進(jìn)行慢；酸度太低，則Fe2+水解，影響顯色，測定時(shí)的酸度是控制在pH=4-6。現(xiàn)在是66頁\一共有91頁\編輯于星期日第六節(jié)定量分析法現(xiàn)在是67頁\一共有91頁\編輯于星期日定量分析方法：標(biāo)準(zhǔn)曲線法BlankStandardSampleSample現(xiàn)在是68頁\一共有91頁\編輯于星期日一、單組分的定量分析

（測定樣品中某一種成分的含量）1.工作曲線法（適用組成較簡單的、批量的樣品）依據(jù)：A-C呈線性關(guān)系，作A-C曲線。⑴配制一系列待測成分的標(biāo)準(zhǔn)溶液C1C2C3C4C5⑵測出相應(yīng)的吸光度A1A2A3A4A5BlankStandardSampleSample現(xiàn)在是69頁\一共有91頁\編輯于星期日⑶建立工作直線（A→C）①作圖法②回歸法現(xiàn)在是70頁\一共有91頁\編輯于星期日⑷測量待測樣品，得A樣①從工作直線上找到待測成分的濃度C樣②由回歸方程計(jì)算出C樣現(xiàn)在是71頁\一共有91頁\編輯于星期日2.增量法（適用于組成較復(fù)雜的樣品）

①

取若干份等體積待測液。②

加入與待測液等體積的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。③

作A-C標(biāo)曲線，此線與C標(biāo)軸交點(diǎn)即為C樣。C0=0（試劑空白）等體積標(biāo)液等體積待測液C0C3C2C1C4現(xiàn)在是72頁\一共有91頁\編輯于星期日理論依據(jù)：A=εbc=εb(C樣+C標(biāo))當(dāng)A=0時(shí)，C樣=-C標(biāo)方法特點(diǎn)：適用于組成較復(fù)雜的樣品，對于批量樣品較麻煩。AC標(biāo)0（C0）-C樣現(xiàn)在是73頁\一共有91頁\編輯于星期日二、多組分同時(shí)測定

（同時(shí)測定一個(gè)樣品中的幾個(gè)組分）溶液的總吸光度等于各組分的吸光度之和：

A=A1+A2+A3+……+An吸收峰互不重疊

A、B兩組分的吸收峰相互不重疊，則可分別在A、B處用單組分含量測定法測定組分A和B。現(xiàn)在是74頁\一共有91頁\編輯于星期日二、多組分同時(shí)測定

（同時(shí)測定一個(gè)樣品中的幾個(gè)組分）

（1）n個(gè)波長處分別測定樣品的吸光度。

（假設(shè)測定n個(gè)組分，一般選擇各個(gè)組分的λmax）（2）根據(jù)吸光度的加和性建立n個(gè)方程，解聯(lián)立方程，可得n個(gè)組分的濃度。原理：吸光度加和性現(xiàn)在是75頁\一共有91頁\編輯于星期日例：同時(shí)測某樣品中二個(gè)組分

分別在λ1、λ2處測樣品的吸光度A1、A2。

（設(shè)定光程b=1cm）

λ1:A1=ε11C1+ε12C2λ2:A2=ε21C1+ε22C2

εij：波長i處，j組分的摩爾吸光系數(shù)。

文獻(xiàn)，也可通過純組分的工作直線的斜率求得。現(xiàn)在是76頁\一共有91頁\編輯于星期日例：同時(shí)測某樣品中三個(gè)組分

分別在λ1、λ2、λ3處測樣品的吸光度A1、A2、A3。

（設(shè)定光程b=1cm）

λ1:A1=ε11C1+ε12C2+ε13C3λ2:A2=ε21C1+ε22C2+ε23C3λ3:A3=ε31C1+ε32C2+ε33C3現(xiàn)在是77頁\一共有91頁\編輯于星期日分光光度計(jì)的類型按光束分單光束分光光度計(jì)722、721、723、752雙光束分光光度計(jì)Jasco-UV/VISUV-2450/2550760CRT單波長單光束分光光度計(jì)0.575光源單色器吸收池檢測器顯示現(xiàn)在是78頁\一共有91頁\編輯于星期日第七節(jié)雙光束分光光度計(jì)的應(yīng)用

應(yīng)用：能克服光源不穩(wěn)定造成的誤差

一、光路圖

I0I0I0I1I2樣品參比切光器現(xiàn)在是79頁\一共有91頁\編輯于星期日單波長雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測器顯示光束分裂器現(xiàn)在是80頁\一共有91頁\編輯于星期日二、工作原理

參比：樣品：則：

作ΔA-C工作直線，定量。由于ΔA與I0無關(guān)，所以，能夠克服I0不穩(wěn)定所造成的誤差。

現(xiàn)在是81頁\一共有91頁\編輯于星期日第八節(jié)雙波長分光光度計(jì)的應(yīng)用

特點(diǎn)：能消除共存干擾組分的影響；能消除渾濁試樣的干擾；能用于高濃度試樣的測量。屬于背景吸