紅細胞膜缺陷的檢驗紅細胞膜成分

人的紅細胞胞膜由蛋白質、脂質、糖類及無機離子等組成。脂質占50%、蛋白質占40%、糖類占8%。磷脂分子比較特殊，它主要有一個圓球狀的頭部（親水端）和兩個細長的尾部（疏水端）。而細胞膜是由磷脂雙分子層為基本支架，其間鑲嵌著多種膜蛋白。紅細胞膜結構紅細胞膜的特點：1.膜的不對稱性

2.膜的流動性紅細胞膜缺陷檢驗方法紅細胞膜蛋白電泳分析紅細胞滲透脆性試驗紅細胞孵育滲透脆性試驗自身溶血試驗及其糾正試驗酸化甘油溶血試驗高滲冷溶血試驗紅細胞膜蛋白電泳分析

方法：紅細胞膜蛋白的十二烷基硫酸鈉聚丙酰胺凝膠電泳原理：SDS與紅細胞膜蛋白結合成SDS多肽復合物，并進行SDS電泳，根據各種膜蛋白相對分子質量的不同，得到電泳圖譜，求出各膜蛋白組分百分率應用評價：操作復雜，但可直接反應紅細胞膜蛋白缺陷，有助于溶貧病因查找，是紅細胞膜缺陷性疾病診斷的主要依據紅細胞滲透脆性試驗實驗原理：

紅細胞滲透脆性試驗是檢測紅細胞對不同濃度低滲鹽溶液抵抗力的一個半定量試驗。根據不同NaCl濃度的低滲鹽溶液中紅細胞溶血的情況間接反映紅細胞表面積與容積的比值，反映對低滲鹽溶液的抵抗性。比值愈小，紅細胞抵抗力愈小，易于破裂，滲透脆性增高；反之抵抗力增大，不易破裂，滲透脆性減低。紅細胞滲透脆性試驗結果示意圖紅細胞滲透脆性試驗結果示意圖紅細胞滲透脆性試驗參考范圍：簡易半定量法開始溶血：3.8~4.6g/LNaCl溶液。完全溶血：2.8~3.2g/LNaCl溶液。

紅細胞滲透脆性試驗臨床意義：1.增高

主要見遺傳性球形紅細胞增多癥、遺傳性橢圓形紅細胞增多癥和部分自身免疫性溶血性貧血、遺傳性口型紅細胞增多癥等。2.減低

主要見于珠蛋白生成障礙性貧血、血紅蛋白C、D、E病，低色素性貧血，阻塞性黃疸，脾切除術后（紅細胞胞膜面積增大）、肝炎、肝硬化、肝癌等。某些中藥（如當歸）、磁場、紫外線亦可降低紅細胞滲透脆性。球形紅細胞橢圓形紅細胞紅細胞滲透脆性試驗應用評價1.本試驗簡便實用，但應嚴格控制影響試驗因素；本試驗敏感性較差，需結合其他試驗項目檢查結果進行綜合分析。2.本試驗對溶血性貧血的病因診斷有參考價值，滲透脆性增高、減低和正常，分別提示溶血可能是由于紅細胞的膜、血紅蛋白和酶的異常所引起。3.對紅細胞變形性輕型病例的診斷，采用敏感性更高的紅細胞滲透脆性孵育試驗更有價值。紅細胞孵育滲透脆性試驗原理：將患者血液置于37℃孵育24小時，使紅細胞代謝繼續進行。由于能源葡萄糖的消耗，儲備的ATP減少，紅細胞膜對陽離子的主動傳遞受阻，造成鈉離子在紅細胞內聚集，細胞膨脹，孵育滲透脆性增加。有細胞膜缺陷及某些酶缺陷的紅細胞內能源容易耗盡，使孵育脆性明顯增加臨床意義：多用于輕型遺傳性球形紅細胞增多癥、遺傳性非球形紅細胞溶血性貧血的診斷與鑒別診斷自身溶血試驗及其糾正試驗

實驗原理：紅細胞在37℃孵育48小時，其間由于膜異常引起Na+內流傾向明顯增加，鈉泵作用增加，ATP消耗過多，或糖酵解途徑酶缺乏所引起的ATP生成不足等原因，導致ATP儲備量減少，鈉泵功能減弱，Na+和水在細胞內蓄積，紅細胞膨脹，破解溶血，稱為自身溶血試驗（autohemolysistest）。在孵育時，加入葡萄糖或ATP作為糾正物，觀察溶血能否有一定的糾正，稱為糾正試驗（correctingtest）。自身溶血試驗及其糾正試驗參考范圍：紅細胞在無菌條件下孵育48小時，不加糾正物的溶血率一般<4.0%,加葡萄糖的溶血率<0.6%，加ATP的溶血率<0.8%.自身溶血試驗及其糾正試驗

臨床意義：1.遺傳性球形紅細胞增多癥自身溶血率增加，能被葡萄糖或ATP糾正。2.G6PD缺乏癥等戊糖旁路代謝缺陷的患者自身溶血率增加，能被葡萄糖糾正。3.PK缺乏癥時，不能利用葡萄糖產生ATP，其自身溶血率明顯增加，不能被葡萄糖糾正，但能被ATP糾正。4.獲得性自身溶血性貧血或自身免疫性溶血性貧血時，試驗結果常各有不同，對診斷的意義不大。自身溶血試驗及其糾正試驗

應用評價：本試驗不夠敏感和特異，僅對遺傳性球形紅細胞增多癥有較大的診斷價值。若結合其他試驗，對多種原因導致的溶血性貧血的鑒別診斷有參考價值。酸化甘油溶血試驗實驗原理：酸化甘油溶血試驗（acidifiedglycerinhemolysistest,AGLT）的原理是：當甘油存在于氯化鈉磷酸緩沖液的低滲溶液時，可阻止低滲溶液中的水快速進入紅細胞內，減慢溶血過程。但甘油與膜脂質又有親和性，可使膜脂質減少，促進紅細胞溶血。檢測時，吸光度隨溶血的增加而下降。當紅細胞膜蛋白與膜脂質有缺陷時，它們在Ph6.85的甘油緩沖液中較正常紅細胞溶解速度快，導致紅細胞懸液的吸光度下降至起始吸光度一半時所需的時間（AGLT50）明顯縮短。酸化甘油溶血試驗參考范圍：AGLT50>290s。臨床意義：1.縮短遺傳性球形紅細胞增多癥AGLT50可明顯縮短（25~150s），自身免疫性溶血性貧血、腎衰竭、妊娠等AGLT50也可縮短。2.HbH紅細胞溶解明顯減少，與缺鐵性貧血不同，可作為初篩試驗。應用評價：本試驗對遺傳性球形紅細胞增多癥診斷的敏感性和特異性較高，也是進行家系調查的較理想方法。本試驗操作簡單，但應準確配制所用試劑盒，嚴格控制試驗溫度，以保證結果的可靠性。高滲冷溶血試驗實驗原理：在高滲狀態下，溫度驟然變化影響紅細胞膜脂質的流動性，并可能累及膜磷脂和膜骨架蛋白結合位點，紅細胞容易破裂而發生溶血。當膜蛋白缺陷導致膜表面積與體積比值降低，溶血率明顯增加；反之，溶血率降。本試驗即測定紅細胞在不同濃度高滲緩沖液中，從37℃水浴立即置于0℃水浴一定時間的最大溶血率。參考范圍：

9mmol/L或12mmol/L蔗糖：最大溶血率66.5%~74.1%。

7mmol/L蔗糖：最大溶血率0.1%~16.9%。高滲冷溶血試驗臨床意義：增加遺傳性球形紅細胞增多癥明顯增加。降低珠蛋白生成障礙性貧血和異常血紅蛋白病明顯降低。正常自身免疫性溶血性貧血基本正常。應用評價：本試驗簡便、易行，無需特殊試劑和儀器，是遺傳性球形紅細胞增多癥的篩檢試驗之一。紅細胞膜缺陷檢驗方法紅細胞膜蛋白電泳分析紅細胞滲透脆性試驗紅細胞孵育滲透脆性試驗自身溶血試驗及其糾正試驗酸化甘油溶血試驗高滲冷溶血試驗病例女，36歲，因“中期妊娠、重度貧血”入院。既往史：無特殊。查體：貧血面容，心肺查體未見明顯異常，無頭暈、眼花，無胸悶、氣促，無心悸，無惡心、嘔吐，無皮膚瘀點、瘀斑，無咳嗽、咳痰，無腹痛、腹脹，無陰道流血、流水，無血尿、黑便等不適。檢驗檢查結果：網織紅細胞比率:3.18%，未成熟網織紅細胞:0.09%，平均網織RBC體積:157.4fLRBC(1012/L)Hb(g/L)Hct(%)MCV(fL)MCH(pg)2016-01-131.086312.8118.558.32016-02-231.265816.0124.6462016-02-290.965414.0145.756實驗室檢查抗核小體抗體：陰性，抗SS-A抗體:陽性(+)，抗SS-B抗體:陰性，抗Sc1-70抗體:陰性，抗Sm抗體:陰性，抗著絲點B蛋白抗體:陰性，抗Jo-1抗體:陰性，抗nRNP/Sm抗體:陰性，抗核糖核蛋白抗體:陰性，抗組蛋白抗體:陰性，抗雙鏈DNA抗體:陰性，抗核抗體定量:141.17U/mL。白蛋白:33.7g/L，總膽紅素:33.7umol/L，直接膽紅素:6.5umo