貼壁生長和接觸抑制2019版高中生物學選擇性必修三說，動物細胞體外培養有細胞貼壁生長和接觸抑制現象：那么，為什么會有細胞貼壁生長和接觸抑制現象？動物細胞為什么會貼壁生長以鱗翅目昆蟲斜紋夜蛾(Spodopteralitura)為例，其血細胞在體內是分散的，但是如果將這些血細胞分離出來進行原代培養，就會發現這些原本分散的細胞出現了貼壁生長的現象"。為什么同樣的細胞在體內是分散的而在體外卻出現貼壁生長的現象呢?想一想,如果體內生活的血細胞是彼此連接,那么勢必會堵塞血管，但如果將這些細胞轉移到培養瓶中制成細胞懸液，則由于細胞的密度稍大于培養液的密度，而會在重力作用下造成這些細胞沉積到培養瓶的底部。同時,由于細胞生活的內環境發生改變，遂使細胞會向外表達產生一些黏連分子,如基膜黏連蛋白和Ⅰ型、IV型膠原蛋白等。這些黏連蛋白一方面與細胞外基質相連,另一方面與培養瓶(招)發生黏連作用,結果導致體外培養的細胞發生貼璧生長的現象",可見,導致細胞貼璧最主要的原因是基因選擇性表達所產生的相應的黏連蛋白。接觸抑制是細胞在生長過程中達到相互接觸時停止分裂的現象，是一種密度依賴性的生長抑制，但其原因目前也不是十分清楚，一般認為這是細胞間的一種識別作用，當細胞增殖到一定程度而互相挨在一起的時候，細胞膜上的糖蛋白就識別了這種信息，進而使細胞停止繁殖。當然，接觸抑制現象跟細胞貼壁生長一樣，也不是所有細胞都必須的，當其中的少數細胞獲得了不死性或癌變了，也會在相同培養條件下對密度依賴性生長抑制失去敏感性，不會在形成單層時停止生長，而是可以相互堆積形成多層生長的聚集體。另外，原本可以懸浮生長的細胞更談不上接觸抑制了。因此，動物細胞培養，動物組織塊要經剪碎然后酶解為細胞懸液。細胞分散成單個細胞容易培養，因為細胞所需的營養容易供應，其代謝廢物也容易排出，但這并不意味著動物細胞培養時非得分散成單個細胞才行，有時候培養的細胞甚至還不能分散。組織塊培養跟植物組織培養一樣，動物組織塊也可直接培養，而且是最常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法，早期的動物細胞的培養多采用此法，將剪成的組織團塊(1mm3的小塊)接種(間距0.2~0.5cm)于培養瓶(或皿)壁即可。細胞懸液培養如果是上皮組織，獲得細胞懸液的最佳方案還不是酶解，而是用EDTA(乙二胺四乙酸)來分散，因為該化學物質能與細胞膜上的鈣、鎂離子結合成螯合物，利用結合后的機械力使細胞變圓而分散或使貼壁細胞從瓶壁上脫離。器官培養有時整個器官不進行組織分離而直接在體外特定環境條件下也能培養，當然，為確保器官中心不發生因缺乏營養和氧氣而壞死的現象，其厚度或直徑不宜太厚，另外，除仍保持5%CO，外，一般要加注純氧，使氧分壓達到90%。要使細胞相互分離，可以用酶將細胞間粘連著的蛋白質(如膠原蛋白、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、彈性蛋白等)消化了。教材采用的酶是胰蛋白酶或膠原蛋白酶，這里的“或”不是任意選擇的意思，因為這2種酶的作用對象并不一樣。胰蛋白酶是一種胰臟制品，能強烈地消化細胞間質較少的軟組織如肝、腎、甲狀腺﹑羊膜、胚胎組織等，而對含結締組織較豐富的如乳腺、滑膜、子宮、纖維肉瘤﹑腫瘤組織等則無效，而且如果消化時間過長，還會損害細胞的呼吸酶和細胞膜蛋白，對細胞有損傷作用，因此，消化后要馬上對培養細胞進行洗滌。膠原蛋白酶則是一種從細菌中提取出來的酶，適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織，它對細胞間質中的膠原成分有較好的消化作用，雖然作用緩慢但因對細胞本身影響不大，故還是能達到分散細胞的目的。例1、下列關于動物細胞培養的敘述，正確的是A.

因動物細胞具有接觸抑制特性，可在培養瓶壁上出現多層細胞B.

原代培養過程中大多數細胞的基因型會發生改變C.

二倍體細胞的傳代培養次數通常是無限的D.

培養液中加入抗生素以防培養過程的污染【答案】D【解析】動物細胞培養流程：除癌細胞外，細胞一般都為貼壁生長，且當貼壁細胞分裂到表面相互接觸時，因為細胞的接觸抑制就會停止分裂增殖，從而無法形成多層細胞，A錯誤；克隆培養法即細胞培養過程中，細胞進行的是有絲分裂，所以培養出來的多數細胞基因型相同，只有少數細胞可能在培養過程中遺傳物質改變，B錯誤；一般來說二倍體細胞傳代培養過程中一般傳至10代后就不易傳下去了，到10~50代左右，增殖會逐漸減緩，甚至停止，繼續培養時，細胞的細胞核型可能會發生變化，在保持二倍體核型的條件下，傳代培養的次數不可能達到無限次，C錯誤；在進行動物細胞培養液時，為了防止培養過程被細菌污染，可以在培養液中添加抗生素，D正確。故選D。例2、下列有關動物細胞培養的敘述，正確的是（） A． 動物細胞培養技術依據的原理是動物細胞的全能性 B． 需用胰蛋白酶或胃蛋白酶將動物組織分散成單個細胞 C． 動物細胞培養過程中通常具有貼壁生長和接觸抑制的特點 D． 10-50代以內傳代培養的動物細胞均能保持正常的二倍體核型【答案】C【解析】1、細胞貼壁：懸液中分散的細胞很快就貼附在甁壁上．

2、細胞的接觸抑制：細胞表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖．（癌細胞無接觸抑制）．

3、原代培養：從機體取出后立即培養的細胞為原代細胞，初次培養稱為原代細胞培養．

4、傳代培養時需要用胰蛋白酶處理貼壁生長的細胞，然后分瓶繼續培養，讓細胞繼續增殖．

5、動物細胞培養的原理是：細胞增殖．動物細胞培養技術的原理是細胞增殖（有絲分裂），不是細胞的全能性，A錯誤；傳代培養時需要