第三章顯微鑒定的基本操作技能第一節顯微標本片的制作一、組織透化劑及應用：1、組織透化劑：使細胞組織內含物溶解除去或透明清晰、色素氧化退色、皺縮細胞壁膨脹透明的試劑。2、作用：（1）浸潤作用。（2）溶解、分解或氧化作用

3、常見的透化劑：（1）水合氯醛的特點：①能滲入組織細胞內，使干燥而皺縮的細胞發生膨脹；②能溶解多數組織內含物；③對觀察草酸鈣結晶極為適宜；④不加熱可立刻觀察菊糖。（2）氫氧化鉀（氫氧化鈉）溶液的特點：（1）5%水溶液為強力透化劑；②能迅速溶解除去淀粉和蛋白質，且能使細胞壁膨脹，作用持久；③對纖維素性細胞壁組織有解離作用；④透化后需將其洗去；⑤常用于解離組織標本片。二、組織封藏劑及應用：1、組織封藏劑：能保持原制片要求，利于組織和細胞形狀、顏色和內含物觀察的溶液。2、作用：保持原制片要求。3、常見的封藏劑：（1）蒸餾水加酚、苯甲酸、樟腦等防霉。特點：①能保持原形、原色，對皺縮的細胞壁可恢復原狀態；②用蒸餾水裝片可觀察淀粉粒；③可使黏液溶解，并破壞糊粉粒。（2）稀甘油加入酚等防霉。特點：①保持2～3天；②用稀甘油裝片可觀察糊粉粒、淀粉粒、油滴、樹脂等；③可在透化后滴加，以防水合氯醛析出結晶。三、顯微標本片：1、粉末標本片：以粉末裝片，粉末有細度要求。2、表面標本片：3、切片標本片：中藥鑒定中最多的一類。4、解離組織標本片。四、粉末標本裝片：1、暫時性粉末標本片：暫時性的，用完之后就洗掉的，載玻片、蓋玻片可重復使用。過程：（1）粉末加封藏劑、蓋蓋玻片、清潔、觀察。（2）粉末加水合氯醛溶液加熱透化三次，加稀甘油封藏、蓋蓋玻片、清潔、觀察。2、永久性粉末標本片：做法較復雜，一般我們在外面購買的就是永久性裝片，只要不損壞，可以一直看。五、表面標本片：主要用于葉片、萼片、花瓣和雄蕊等表皮的表面特征觀察。1、整體封藏法：取材料剪取正反2小片，加水合氯醛加熱透化3次，加稀甘油封藏，蓋蓋玻片，清潔，觀察。2、表皮撕離法：適用于較厚的葉片、萼片、花瓣等。六、切片制片法：此類與粉末裝片用得最多，有橫切和縱切。1、機器切片法：生活中很少用，只有生產廠家大量生產時運用。2、徒手切片法：實驗室常用此法。（1）材料的預處理：清潔，（除去非藥用部分，選取合適切片部分。）切成適當大小的塊，軟化。軟化方法：①在吸濕器中放置12～24h。②過硬，水浸或煮12h。③特硬，高壓鍋煮20min。如天麻。④過軟，浸入高濃度乙醇中20min。軟化注意事項：①需觀察糊粉粒、黏液、菊糖等水可溶性的物質的，不可與水接觸。②需觀察揮發油、樹脂等，不能與高濃度乙醇或其他有機溶劑接觸。（2）材料的分割：切薄片。（3）材料的挾持：方便切片，常用胡蘿卜、馬鈴薯。（4）徒手切片刀：雙面和單面，雙面切較柔軟，單面切較硬，單面應用較多。（5）持刀方法：右手持刀，刀身放平，刀口向切片者。（6）切片：材料和刀口蘸水，切掉不整齊一段，同左前外方向右內方迅速拉切，臂用力。（7）取片：合乎需要的立即浸入水中。（8）透化：置載玻片中央加水合氯醛加熱透化。（9）封藏：加稀甘油封藏，蓋蓋玻片。（10）清潔觀察。七、解離組織標本片：薄壁組織點大部分的用氫氧化鉀法；質地堅硬，木化組織較多用硝鉻酸法。1、氫氧化鉀法：供試樣置試管中加氫氧化鉀，加熱，傾去堿液，用水洗，放于載玻片上，用解剖針撕開，加稀甘油，蓋上蓋玻片。2、供試樣置于試管中，加硝鉻酸試液適量，放置，傾去酸液，加水洗，放于載玻片上，用解剖針撕開，加稀甘油，蓋上蓋玻片。第二節顯微測量法顯微測量：應用顯微鏡測量尺在顯微鏡下測量微細物體的大小。顯微測量尺分為目鏡測微尺和載物臺測微尺。1、目鏡測量尺：安裝在目鏡內的一個測量尺。2、載物臺測量尺：載玻片中央粘貼的測量尺。3、兩尺的關系及應用：臺微尺是不變的，每小格10um；目微尺隨目鏡和物鏡的變化而變化。4、目微尺的標定：（1）將臺微尺放置在載物臺上，目微尺放入目鏡鏡筒內。（2）先低倍鏡，將目微尺刻度移至視野中央。（3）旋轉目鏡，使兩尺平行。（4）移動臺微尺，使目微尺零端與臺微尺刻度的某刻度線相重合。（5）再找兩尺的第二條重合刻度線，數兩條重合線間兩尺的小格數，記錄。（6）計算出目微尺每一格在該物鏡條件下相當的長度（um）標定值=臺微尺小格數×10um/目微尺小格數。5、測量方法：（1）將需測量的載玻片放于載物臺上。（2）用目微尺測量目的物的小格數，記錄。（3）計算：實際長度um=測得小格數×標定值第三節顯微繪圖法顯微繪圖法的方法又分為平描和應用顯微描繪器描繪。一、平描：只憑肉眼描繪1、根據觀察到的實物進行繪圖。2、繪圖的要求：（1）要排列整齊、部位適中、比例恰當。（2）要做到形狀、比例、倍數正確。（3）以點、線表示。（4）圖中各部分用阿拉伯數字表示，在圖下端注明標號名稱。3、繪圖用具：16開白紙或A4白紙。鉛筆。4、繪圖：圖的類型一般分粉末圖及組織圖。（1）粉末圖：繪出其粉末特征。（2）組織詳圖：較詳細，需要所有組織全部繪出，較難，一般不繪此種圖。（3）組織簡圖：以線條表示，清晰，一目了然。實驗室常繪出的圖，但不實用于出版、做研究等。二、顯微描繪器描繪：分放映裝置和描繪器。第四節常用顯微化學分析一、細胞壁性質的鑒別：1、木質化細胞壁：加間苯三酚試液，放置，加鹽酸，顯紅色或紫紅色。2、木栓化或角質化細胞壁：加蘇丹Ⅲ試液或紫草試液，微熱，顯橘紅色至紫色。3、纖維素細胞壁：（1）加氯化鋅碘試液濕潤，放置，再加硫酸溶液，顯藍色或紫色。4、硅質化細胞壁：二、細胞內含物質性質的鑒別：1、淀粉粒：（1）加碘試液顯藍色或紫色。（2）用甘油醋酸試液裝片，末糊化的在顯微鏡下顯偏光。2、菊糖：加a-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，顯紫紅色并溶解。3、脂肪油、揮發油、樹脂：（1）加蘇丹Ⅲ試液或紫草試液，均顯橘紅色到紫紅色。（2）加90%乙醇，脂肪油和樹脂不溶解，揮發油溶解。4、糊粉粒：（1）加碘試液，顯棕色或黃棕色。（2）加三硝基苯酚試液，顯黃色。（3）加硝酸汞試液，顯磚紅色。5、黏液：（1）加墨汁，黏液呈無色透明塊狀。（2）加釕紅試液，顯紅色。

6、草酸鈣結晶：（1）加稀鹽酸溶解而無氣泡產生。（2）加硫酸逐漸溶解，片刻后析出針狀硫酸鈣結晶。7、碳酸鈣結晶：加稀鹽酸溶解，有氣泡發生。8、硅質：加硫酸不溶解。9、鞣質：（1）加三氯化鐵試液顯藍色或墨綠色。（2）加鎢酸鈉試液產生黃棕色或紅棕色沉淀。1、顯微標本有哪些制法？布置練習謝謝觀賞！內容總結第三章顯微鑒定的基本操作技能。1、組織透化劑：使細胞組織內含物溶解除去或透明清晰、色素氧化退色、皺縮細胞壁膨脹透明的試劑。2、作用：（1）浸潤作用。3、常見的封藏劑：（1）蒸餾水加酚、苯甲酸、樟腦等防霉。過程：（1）粉末加封藏劑、蓋蓋玻片、清潔、觀察。（2）粉末加水合氯醛溶液加熱透化三次，加稀甘油封藏、蓋蓋玻片、清潔、觀察。2、表皮撕離法：適用于較厚的葉片、萼片、花瓣等。軟化方法：①在吸濕器中放置12～24h。（8）透化：置載玻片中央加水合氯醛加熱透化。（9