實驗四血凝和血凝抑制試驗第一頁，共二十頁，2022年，8月28日一、實驗目的二、實驗原理三、實驗材料四、實驗步驟五、結果判定第二頁，共二十頁，2022年，8月28日了解血凝和血凝抑制試驗的原理。了解血凝價和血凝單位的概念。掌握血凝和血凝抑制試驗的操作步驟和結果判定的方法。一、實驗目的第三頁，共二十頁，2022年，8月28日二、實驗原理

（一）血凝試驗（HA）一些病毒能夠促使動物如雞、鵝、豚鼠和人的紅細胞發生凝集，叫做血凝試驗。病毒凝集紅細胞是一種較為普遍的現象，可以作為鑒定病毒的一個指標。第四頁，共二十頁，2022年，8月28日HA試驗的原理圖第五頁，共二十頁，2022年，8月28日一層RBC均勻鋪在孔底者為++++；基本同上，但邊緣不整齊，有下墜傾向者為+++；RBC在孔底形成一個環狀，四周有小凝集塊者為++；RBC在孔底形成一個小團，但邊緣不光滑，四周有小凝集塊為+;RBC在孔底形成一個小團，邊緣光滑，四周有似小凝集塊者為±;紅細胞在孔底形成一個小團，邊緣光滑，整齊者為-。++++++++++-血凝試驗結果判定第六頁，共二十頁，2022年，8月28日1:211:221:231:241:251:261:271:281:291:210CC

血凝價：能使紅細胞產生50%凝集的病毒最高稀釋度。第七頁，共二十頁，2022年，8月28日（二）血凝抑制試驗（HI）當病毒懸液中加入特異性抗體時，這種紅細胞凝集的現象就被抑制，稱紅細胞凝集抑制試驗，即血凝抑制試驗。因此，可以用已知病毒來檢測被檢血清中的相應抗體，也可以用已知血清來鑒定未知病毒。第八頁，共二十頁，2022年，8月28日HA試驗的原理圖第九頁，共二十頁，2022年，8月28日HI試驗的原理圖第十頁，共二十頁，2022年，8月28日三、實驗材料雞新城疫病毒：雞新城疫弱毒株（Lasota）接種雞胚、收獲尿囊液制備。雞紅細胞：采集健康雞血液，以阿氏液抗凝，以生理鹽水洗滌3~5次，將血漿、白細胞等充分洗去，用生理鹽水配置成1%紅細胞懸液使用。0.85%生理鹽水。被檢血清，采自被檢雞的健康血清。第十一頁，共二十頁，2022年，8月28日四、實驗步驟

（一）血凝試驗（HA）在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理鹽水。在第1孔中加入50μl病毒抗原，反復吸取混勻后吸50μl到第2孔，如此倍比稀釋直到第10孔，混勻后棄50μl；最后兩孔（11、12）為紅細胞對照。第十二頁，共二十頁，2022年，8月28日將1%的紅細胞輕輕搖動混勻，在1~12孔中每孔加入50μl。手工震蕩，37℃靜置25~30min后觀察結果。病毒液的血凝價是1:2？。血凝價：能使紅細胞產生50%凝集的病毒最高稀釋度。第十三頁，共二十頁，2022年，8月28日第十四頁，共二十頁，2022年，8月28日（二）血凝抑制試驗（HI）在血凝板的1~11孔加入25μl生理鹽水，最后一孔（12孔）加50μl。第1孔加待檢血清25μl，混勻后吸25μl至第2孔，倍比稀釋直至第10孔，混勻后棄25μl。從1~11孔，每空加稀釋好的25μl4個血凝單位的病毒懸液。37℃靜置25~30min如果血凝價為1:28，那么4個血凝單位就是1:26第11、12孔不加第12孔不加第十五頁，共二十頁，2022年，8月28日血凝價：能使紅細胞產生50%凝集的病毒最高稀釋度。1個血凝單位：能使50%的紅細胞發生凝集的病毒懸液。病毒濃度1:211:221:231:241:251:261:271:281:291:210CC

第十六頁，共二十頁，2022年，8月28日將1%的紅細胞輕輕搖動混勻，在1~12孔中每孔加入50μl。手工震蕩，在37℃靜置25~30min后觀察結果。結果判定：以紅細胞凝集100%的抑制作為結果判定的終點。血凝抑制價是1:2？，被檢血清為陰/陽性。≥1:24為陽性＜1:22為陰性＝1:23為可疑血凝抑制價第十七頁，共二十頁，2022年，8月28日第11孔為病毒對照，應該完全凝集，第12孔為細胞對照，應該完全沉積到孔底。第十八頁，共二十頁，