微生物試驗室的質量管理一、試驗室設施與設備和管理（法規要求）無菌檢查、微生物限度檢查與抗生素微生物檢定的試驗室，應嚴格分開。無菌檢查、微生物限度檢查試驗室分無菌操作間和緩沖間。無菌操作間應具備相應的空調凈化設施和環境，接受局部百級措施時，其環境應符合萬級干凈度要求。進入無菌操作間應有人流凈化和物流凈化的設施。無菌操作間應依據檢驗品種的須要，保持對鄰室的相對正壓或相對負壓，并定期檢測干凈度。無菌操作間內禁放雜物，并應制定地面、門窗、墻壁、設施等的定期清潔、滅菌規程。無菌檢查在干凈度100級單向流空氣區域內進行，其全過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區與工作臺面，必需進行干凈度驗證。微生物限度檢查的全過程，均應遵守無菌操作，嚴防再污染。微生物試驗室的質量管理為滿足微生物學試驗要求，微生物試驗室應具有：嚴格分開的無菌檢查、微生物限度檢查、無菌采樣室。菌種處理與微生物鑒別室有局部百級措施。各自分開的抗生素微生物檢定、細菌內毒素檢查、抗菌作用測定半無菌室。培育室（一般為100，000級）。試液及培育基的配制室。滅菌室。試驗器皿洗滌、烘干室。人員辦公休閑室。試驗用品、易耗品貯存室。微生物試驗室的質量管理設施和設備的管理特殊標準品——菌種培育基、緩沖液、試劑消毒劑文件管理培訓內審微生物試驗室的質量管理微生物室試驗室的質量管理制定干凈室（無菌室）的運用管理規程（SOP）菌種處理相關的標準操作規程（SOP）生物平安柜的運用標準操作規程（SOP）帶菌廢棄物的處理標準操作規程（SOP）環境消毒標準操作規程（SOP）環境清潔、消毒標準操作規程（SOP）試液及培育基配制的標準操作規程（SOP）試驗器皿洗滌標準操作規程（SOP）建立無菌室運用登記冊運用日期，時間，運用人，設備運轉狀況，溫、濕度，干凈度狀況（沉降菌數、浮游菌數、塵埃粒子數），報修緣由，報修結果，清潔工作（臺面、地面、墻面、天花板、傳遞窗、門把手），消毒液名稱等微生物試驗室的質量管理試驗室運用管理每天工作前用消毒液消毒工作臺，開紫外燈（最少半小時）進行空氣消毒，每月定期做徹底清潔工作，適當時用消毒劑進行熏蒸。非必要品禁止帶入試驗室，必要資料和記錄應消毒后進入并應遠離操作臺。試驗人員進入干凈室（無菌室）不得化妝、戴手表、戒指等首飾；不得吃東西。應嚴格按更衣程序更衣。記錄溫濕度是否在規定的范圍內，每次試驗時，對操作室和層流臺做微生物沉降菌落計數并記錄；如發覺問題應找緣由，剛好報修和報告并將報修緣由和結果記錄歸檔。如遇停電，應立刻停止試驗，重新進入無菌室前，至少開啟機房運轉1小時以上。在每次試驗結束時，應用消毒劑剛好按消毒規程中的要求消毒操作臺和干凈室（區），并開啟室內紫外燈以殺滅存留微生物。運用后的器具如平皿、試管，全部微生物培育物，染菌/帶菌物品等應用消毒液浸泡（至少24小時以上），經煮沸或滅菌后清洗或丟棄。微生物試驗室的質量管理干凈室（無菌室）的運用管理每季度定期進行清潔度再驗證，以確保干凈度符合規定，保存原始記錄及趨勢分析資料，定期歸檔保存。至少每年一次定期更換新的紫外燈管并記錄，以確保紫外燈管滅菌持續有效，定期歸檔保存。至少2年1次，或按干凈度驗證明際狀況，定期更換初效、中效、高效頭。以確保凈化系統的功能持續有效，并同時在運用登記本上做好更換記錄。定期歸檔保存。平常試驗室內應盡可能削減人員的走動或活動，通向干凈室的門要關閉或安裝自動閉門器使其保持關閉狀態。發覺干凈度不符合規定時，應立刻停止運用，找尋緣由，徹底清潔、消毒，須經清潔度再驗證符合規定后，才再運用，并將狀況記錄在無菌室運用登記冊上，定期歸檔保存。非微生物室檢驗人員不得進入干凈室（無菌室），對必需進入的外來人員或修理人員應進行指導和監督。微生物試驗室的質量管理一、試驗室設施與設備和管理設施—干凈室、凈化工作臺、生物平安柜。設備—高壓蒸汽滅菌器、電熱恒溫干烤箱、培育箱、冰箱。試驗儀器—全封閉薄膜過濾裝置、電動勻漿儀、電熱恒溫水浴箱、離心機、顯微鏡，及刻度吸管、試管、三角燒瓶、培育皿等。建立主要設施、設備、儀器的明細記錄，內容包括名稱、型號、生產廠家、購買日期。質量保證檔案：購買發票、安裝驗收或開箱驗收記錄、調試記錄、計量檢定或運行校驗合格證、指定專人負責、制訂標準操作規程（SOP）、建立運用登記冊，修理、保養記錄、改造或更新記錄、直至報廢記錄。微生物試驗室的質量管理一、試驗室設施與設備和管理定期監測生物平安柜和（或）超凈工作臺的內表面的微生物學質量及其內部的空氣質量（粒子和微生物）。運用時檢查壓差指示表。培育箱、冰箱需在設備的每個腔室內放置經校準過的玻璃溫度計，每天檢查設備腔室內的溫度狀況并且在日志上做好相應的記錄。定期回顧每個設備的溫度記錄數據，以考察設備的運行狀態。定期用中性的清潔劑或消毒劑清洗培育箱（或室）、冷藏箱（或室）、冷凍冰箱及水浴的腔室內表面。高壓滅菌柜、電熱恒溫干燥箱等須要驗證和持續監控。儀器的校準和確認。微生物試驗室的質量管理須要確認和驗證試驗和持續的質量監控的設備高壓滅菌柜和電熱恒溫干燥去熱原烘箱安裝確認（IQ）：要確認限制系統及其他儀器儀表的設計是否得當并經過校驗。檢查有關共用介質（如蒸氣、水和空氣等）符合滅菌工藝的要求。運行確認（OQ）：要求證明空載狀態下驗證方案中所述腔室內全部關鍵位置的溫度是否均處在規定范圍內。建立熱分布圖譜。空載狀態下，濕熱滅菌當腔室工作溫度不低于121℃時，各點溫度與腔室內平均溫度之差不超過±1℃，于熱除熱源，當運行溫度不低于250℃時，腔室內的溫差應不得超過±15℃。性能確認（PQ）：要求在滿載條件，溫度探頭插入待滅菌物品的內部，同時加入確定濃度的微生物或獨立的生物指示劑。對不同的工藝條件（物品、包裝和裝載方式、滅菌參數等），分別進行性能確認試驗，包括熱穿透試驗和生物指示劑挑戰試驗。包括：高壓滅菌柜、除熱源電熱恒溫干燥箱、自動微生物鑒別系統和計數系統。微生物試驗室的質量管理品種：5~20倍稀釋的碘伏水溶液0.10%新潔爾滅簡潔1:50的84消毒液75%乙醇溶液3%碘酒溶液5%石碳酸（來蘇兒）消毒溶液2%戊二醛水溶液尼泊金酒精消毒液等應定期更換消毒劑品種，按標準精確配制。清潔、消毒劑的管理微生物試驗室的質量管理一、菌種的保存與管理菌種—特殊的標準品應保持基生長特性和削減污染，是微生物試驗結果一樣性的重要保證。制定菌種保藏管理制度微生物試驗室應制定菌種的保藏管理規程來規范菌種的來源、申購、保管、轉種傳代、存儲和領用等方面的要求，確保菌種的溯源性和穩定性；防止試驗用菌種因多次傳代而失去典型生物學特征發生變異或死亡，保證菌種長期正確、穩定，從而確保試驗的靈敏度和重現性。菌種名稱：金黃色葡萄球菌菌種系列號：[CMCC(B)26003]傳代次數：第

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代有效期：年月日制備日期：年月日傳代人：王熙鳳微生物試驗室的質量管理菌種保存應有專人負責，加鎖保存于冰箱中。試驗室的標準菌株應來自CMCC（中國藥品生物制品檢定所醫學菌種保藏中心或ATCC（美國菌種保藏中心）等國際法定菌種保藏機構。有接收、確認記錄。菌種的轉種等均應在超凈工作臺進行，以防污染。各種菌種應按規定時間接種，全部保藏的菌種均應貼有相應的標簽，有菌種清單。驗證明驗常用菌種枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]生孢梭菌[CMCC（B）64941]銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]大腸埃希菌[CMCC（B）44102]乙型副傷寒沙門菌[CMCC（B）50094]白色念珠菌[CMCC（B）98001]黑曲霉[CMCC（B）9003]菌種保藏步驟干燥菌種復蘇，劃平板選擇特征典型的純菌菌落；（制菌懸液運用）確定保藏的合格菌體形態；選擇最適宜的保存方法，定期對保藏菌種進行檢查，視察是否發生變更，若有變更，須變更保藏方法。保藏期滿應剛好進行移種。菌種的接收標準菌種一般是玻璃安平裝的凍干粉劑接收時應檢查名稱/數量和完整性。貼好標簽后儲存于-20℃一般安平凍干品可在5年之內運用運用時應按（菌種保藏中心供應的）相關資料的要求進行復溶、培育和保存。菌種的復活菌種的復活用70%的酒精擦拭清潔安瓿，自然風干用一小砂輪在安瓿的上部劃一條線，用手輕輕將安瓿開無菌操作，用一無菌吸管無菌移取1~2ml適宜的液體培育基到瓿中；輕輕地旋轉安瓿以使凍干菌種和液體培育基充分混合并完全溶解；用無菌吸管將安瓶內菌液轉移到相應的液體培育基中，依據不同菌種類型而將其培育于適宜的溫度下24-72小時。菌種的確認菌種復活后，應確認菌種的純度與特性從培育肉湯中取細菌培育物接種到平板上，上劃線分別出單個菌落。培育后視察其是否具有典型的菌落形態然后挑取單一的純菌落，進行革蘭染色、鏡檢，視察其染色特性及菌形。最終再做生化試驗以進一步鑒定該菌種，或用API鑒定系統做鑒定工作。對已經過鑒定確認的菌種就可以進行菌種的傳代和保藏了。菌種的傳代和保藏菌種的保藏方法使菌種的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態，從而在確定時間內不發生變異并保持生命活力。一般來說，低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝實力降低的三個重要因素無論運用那種菌種保藏方法，都應進行驗證，以確保在相應保存條件下的菌種不會變異并且性能穩定。菌種的傳代次數（自原始菌種凍干粉起）不得超過5代（GMP，藥典）將微生物接種至一簇新培育基上/內，每萌發一次即稱為“一代”。冷凍真空干燥保藏法主要是將待保藏菌種混于有疼惜作用介質內制成菌液，分裝在安瓿中于冷凍條件下使其快速凍結，因凍結可使晶型細致，不致損傷活菌細胞。然后用真空抽氣減壓，是安瓿內的冰晶液體升華，水氣快速被真空抽走，冰晶型的菌液很快變成疏松的干燥固體物，最終在真空狀態下熔封管口，使干燥物在局部真空條件下封存，并置冷暗處，在很長時間內菌種仍可維持活力不變。甘油冷凍管保藏法將待保藏菌接種至平板或瓊脂斜面，培育用無菌接種環輕輕刮取菌臺，用接種環使細菌充分擴散到預先裝于試管中的無菌蒸餾水中調整菌液濃度，使其等同于麥氏比濁管第10號管向已制備好的菌懸液中加入等體積、濃度為20%的無菌甘油，得到10%甘油菌懸液。輕輕振搖小管，使內容物充分混合，分裝于無菌小試管。制好的甘油冷凍管最好在-30℃條件下貯存。有效期至少為2年。氧細菌和酵母菌可用此法保藏，霉菌和厭氧菌則不適于用此法保藏。液體石蠟覆蓋保藏法將菌種穿刺接種于半固體高層培育基中培育，無菌操作在層流臺下用無菌吸管吸取無菌液體石蠟至培育好的菌種管內，并使石蠟高出菌種表面約1cm，將試管直立，置于2~8℃冰箱中或室溫下保存，如銅綠假單胞菌。此法保藏霉菌、放線菌、芽胞桿菌可保藏兩年以上，酵母菌可保藏1~2年，一般無芽胞細菌也可保藏1年左右。此法制備簡潔，不須要其他特殊設備，并且效果好，是傳代培育的變相方法，可適當延長保藏時間。瓊脂斜面低溫保藏法保藏法（廠家常用）將菌種接種在適宜的固體斜面培育基上，生長充分后，移至2~8℃冰箱中保藏。保藏時間：霉菌、放線菌及芽胞的菌保存2~4個月，移種一次；酵母菌2個月移種一次；細菌最好每1月移種一次。優點：操作簡潔，運用便利，不需特殊設備，對大多數微生物都適用。缺點：保藏期太短；傳代次數多，易發生變異及污染。此法為試驗室工作用菌種的最常用的保藏方法，僅能用于工作用菌種的短期保藏。保藏芽胞液對產芽胞的微生物宜制成芽胞菌懸液后再保藏，無菌操作，取1ml孢子液接入茄形瓶或培育皿內，輕輕轉動使菌液勻整分布于培育基表面。將培育皿在適當的溫度下培育。一般須要7天或更長時間在層流臺下，取3~5ml氯化鈉磷酸鹽緩沖液（pH7.0）加入培育皿內用無菌玻璃L棒輕輕刮下菌苔，留意不要劃破培育基。用無菌注射器或無菌吸管吸取菌懸液，收集于試管中。將收集的芽胞液放在80~90℃水浴中加熱15分鐘，冷卻。做好標記，放至2~8℃冰箱中保藏。原始芽胞液可保存1年。每次運用前用平皿法重新標定其濃度。微生物菌種的傳代保藏過程按菌種說明書要求復溶菌粉菌（標準菌株），轉種于適當的增菌培育基內（此為第一代G1），復壯后轉接至平板上，并于適當溫度下培育適當時間，分別出單個純種菌落（此為其次代G2）菌種鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，冷凍或低溫保存（標準儲備菌株G2）；同時挑取純菌落轉接斜面菌種作為工作用菌種（工作菌株W3），于適當溫度下培育適當時間后可用于試驗，直至轉為W5為止，需重新開啟安瓶，再重復上述操作程序。菌種被分為兩類，傳代用菌種和工作用菌種，傳代用菌種（標準儲備菌株）用甘油冷凍管法保藏工作用菌種（工作菌株）用斜面低溫保藏法保藏試驗用菌液的制備傳代：取菌液0.1ml接種至10ml液體培育基，按規定培育、稀釋比照用菌種在運用過程中，亦應檢查其生物學特性。如菌落形態（在可能狀況下，用選擇性培育基進行生長檢查）、革蘭染色、鏡檢菌體形態、主要生化特性（必要時應作菌種鑒定試驗）。如發覺染菌或或變異，衰退等現象時，應剛好處理。為保證試驗的牢靠性和精確性，試驗室還應嚴格依據相關規程制備和運用菌種，并對每種微生物的存貯條件（需/厭氧狀態、溫度和時間）進行確認。室溫下菌懸液應在制備后的2小時內運用低溫保存（2-8℃）時細菌和酵母菌的菌懸液應在制備后的24小時內運用霉菌孢子液則應在制備后的7天內運用（黑曲霉孢子懸液可保存在2~8℃，在驗證過的貯存期內運用）在運用時（在24小時之內）均應同時進行菌數復核檢查。試驗時可接受分光光度法或麥氏比濁法估計菌液濃度。4、菌種運用記錄當菌種超過有效期或被污染以后應滅菌后丟棄。□是□否說明：試驗室菌種編號原則：名稱+傳代代數+制備日期培育基管理一般接受購自中國藥品生物制品檢定所合格的商品脫水培育基。同時依據運用說明書進行配制，需留意培育基的pH值應符合規定，否則必需校正后，按說明書規定滅菌。商品脫水培育基應在有效期內運用，運用前應留意核對名稱，檢查外觀，遇有結塊、吸潮現象，應廢棄。簇新培育基的配制，應按質量標準規定的配方進行，對培育基的原材料要進行選擇，試劑應為化學純試劑規格。制成的培育基要求無沉淀。必要時以適當方法過濾，調整pH值，分裝滅菌備用。滅菌：應閱歷證合格的滅菌程序（確定裝載方式下滅菌方法和條件）。驗證：無菌性試驗，促生長試驗，滅菌器蒸汽循環系統。培育基的質量限制建立質量限制程序全部配好的培育基均需進行質量限制（pH、適用性檢查試驗）培育基有效期的確定：定期的穩定性檢查以確定有效期（2~25℃，避光，非密閉容器3周內運用，密閉容器1年內運用。質量限制的頻率：用同1批脫水培育基，接受閱歷證的配制和滅菌方法制備的培育基，可只做1次靈敏度檢驗。質量限制菌株的選擇（養分、靈敏、代表性）對無菌培育基的無菌性、靈敏度檢查與比照培育基進行比較無菌檢查用需氣厭氣培育基的指示劑氧化層不得超過培育基深度的1/5，否則須經水浴煮沸10分鐘，但只限加熱一次。無菌檢查結束時，指示劑氧化層應不超過培育基深度的1/2。大腸埃希菌檢查用MUG培育基配制前應選擇無熒光的試管進行配制，視察結果時應用同批培育基配制的空白管和陽性菌管同時視察。培育基的靈敏度檢查：已知菌生長試驗①細菌組：取每管裝量為12ml硫乙醇酸鹽液體培育基9支，分別接種小于100cfu試驗菌各2支；菌種：金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌空白比照：另一支不接種，培育24~72小時逐日視察結果②霉菌組：取每管裝量為9ml的改良馬丁液體培育基5支，分別接種小于100cfu試驗菌各2支；菌種：白色念珠菌黑曲霉空白比照：另一支不接種，培育5天逐日視察結果結果判定空白管培育基無菌生長加菌的培育基管均生長良好判靈敏度檢查合格。培育基管理配制好的培育基，按無菌要求進行滅菌。培育基的配制須有記錄，記錄內容含有：配制日期和配制人員的標識；培育基/溶液的類型、體積；成分、每個成分物質的含量、制造商、批號；pH（最初和最終）值無菌措施，包括實施的方式、時間和溫度。按日期編制滅菌后的培育基編號將制備完畢的培育基按品種放置在陰涼的指定位置，備用。留意保存期滅菌法濕熱高壓蒸汽滅菌法：依115℃、121℃或132℃，應用于培育基滅菌、試驗器械、工作服、橡膠物品和試驗室廢棄物，也可用于玻璃器皿的滅菌。一般121℃30min干熱法：利用物理學，171℃-1小時，160℃-2小時、121℃-3小時：玻璃器皿濕熱：蛋白質簡潔凝固干熱：氧化檢驗方法學驗證：在化學測試中，藥品的測定方法須要驗證，與此相應，當建立藥品的無菌、微生物限度檢查法時，也應進行分析方法的驗證，以證明所接受的方法適合于該產品的無菌、微生物限度檢查。證明接受藥典的某種方法和檢驗條件，在該供試品的檢驗量、檢驗條件下，無抑菌活性或活性已消逝，保證檢驗結果的精確性。檢驗方法學驗證：驗證時機；建立檢驗方法時；修訂檢驗方法時；組分和檢驗條件發生變更時；定期再驗證。人員人是無菌藥品生產中的主要污染源，在管理比較到位。生產設備自動化程度較好，操作人員素養較高的企業，人員操作所致的污染率超過70%。具微生物專業學問經無菌技術培訓對試驗結果能進行充分全面的評價。其它重要影響因素藥品本身的抑菌性；培育基的促菌生長實力；培育條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）；過濾系統的材質檢驗的進展強調檢驗的過程限制，提高檢出率，保證檢驗結果的牢靠性。人員的要求環境、設施要求培育基適用性檢驗數量方法驗證培育時間試驗用菌全封閉過濾培育器、隔離系統檢驗結果的保證要求有一個取樣支配來涵蓋整個批號有足夠的取樣量和檢驗量選擇適用的培育基接受閱歷證的無菌檢驗方法良好的環境監控人員保證無菌檢查無菌檢查定義：無菌原料藥是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑和原料藥，包括無菌制劑和無菌原料藥。無菌檢查是檢查要求無菌的藥品、醫療器具、原料、輔料以及要求無菌的其他物品是否染有活菌的一種方法。符合無菌檢查法的規定僅表明白供試品在該檢驗條件下未發覺細菌和真菌污染。無菌檢查法建立在批產品受微生物污染是勻整的假設上（其實非勻整）。無菌檢出低污染的概率極低的。因此，無菌檢查存在風險和局限性。無菌檢查的局限性無法對整批產品進行100%檢驗只進行細菌和真菌的檢驗培育基培育條件（如溫度和時間）是有限的我們的工作環境及操作是在相對無菌的狀態。無菌檢查：注射劑、植入劑、部特殊用藥鼻用制劑：用于手術或創傷的鼻用制劑。凝膠劑：用于嚴峻創傷的凝膠劑。乳膏劑：用于燒傷或嚴峻創傷的乳膏劑。新增的無菌檢查中藥制劑散劑：用于燒傷或嚴峻創傷的外用散劑。鼻用制劑：用于嚴峻創傷的鼻用制劑。眼用制劑：用于傷口的眼用制劑。軟膏劑：用于燒傷或嚴峻創傷的乳膏劑。氣霧劑、噴霧劑：用于燒傷或嚴峻創傷的氣霧劑、噴霧劑。GMP—取樣取樣留意事項，包括為降低取樣過程產生的各種風險所實行的預防措施，尤其是無菌或有害物料的取樣以及防止取樣過程中污染和交叉污染的留意事項；在生產的每一階段，應當疼惜產品和物料免受微生物和其他污染。附錄1無菌藥品質量限制第八十條無菌檢查的取樣支配應當依據風險評估結果制定，樣品應當包括微生物污染風險最大的產品。無菌檢查樣品的取樣至少應當符合以下要求：（一）無菌灌裝產品的樣品必需包括最初、最終灌裝的產品以及灌裝過程中發生較大偏差后的產品；（二）最終滅菌產品應當從可能的滅菌冷點處取樣；（三）同一批產品經多個滅菌設備或同一滅菌設備分次滅菌的，樣品應當從各個/次滅菌設備中抽取。一般隨機抽樣，保證樣品的代表性和原始性，復試樣品應盡量重現原取樣。留意事項只要供試品的性狀允許，應接受薄膜過濾法（首選）只要供試品的性狀允許（溶解性、抑菌性），應將全部容器內的全部內容物過濾驗證用供試品用最大量陽性比照分開培育大腸埃希菌代替銅綠假單胞菌（G+敏感，保證結果有效）無菌檢測14天（補償生長條件、潛在的低生長者、修復受損細胞）優先選用密閉式過濾器，或一次性過濾器濾膜材質（抗用低吸附），濾膜的完整性，沖洗量。干脆法接種供試品體積不得大于培育基體積的10%，每管裝量硫乙醇酸鹽流體培育基不少于15ml，改良馬丁培育基不少于10ml，可用濃縮培育基，或增加培育容器數。結果推斷陽性管生長良好，陰性管不得長菌，否則試驗無效。以一次檢出為準，不得復試。（低檢出率，試驗環境、條件改善當符合下列至少一個條件時，方可判試驗結果無效；無菌檢查試驗所用的設備及環境的微生物監控結果不符合無菌檢查法的要求。回顧無菌試驗過程中，發覺有可能引起微生物污染的因素。陰性比照管有菌生長。供試品管中生長的微生物經鑒定后，確認是因無菌試驗中所運用的物品和（或）無菌操作技術不當引起的。結果保證有效的結果牢靠的結論培育基保證結果推斷SOP操作人方法驗證的一般程序與環節需前處理不需前處理有抑菌作用樣品無抑菌作用去除抑菌作用檢查①驗證前處理方法對污染菌生長、檢出的影響。②可以通過驗證明驗推斷③驗證抑菌活性去除的有效性，以及去除方法對污染菌生長、檢出的影響。無菌檢查驗證明驗：供試品干脆接種法薄膜過濾法100ml/筒①試驗組（供試品+菌）金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸、枯草桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉②培育基比照組③陽性菌比照組（加菌同試驗組）規定T培育3~5天視察結果書寫驗證報告④稀釋劑比照組微生物限度檢查微生物限度檢查：口服、外用限制項目雜菌數：細菌數、霉菌和酵母菌數。限制菌（致病菌）：大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、梭菌、白色念珠菌。制定原則：非無菌藥品的微生物限度標準是基于藥品的給藥途徑及對患者潛在的危害而制定的。依據標準檢查限制菌不含藥材原粉的制劑含藥材原粉的制劑：丸劑含動物藥的制劑外用制劑滴眼劑一般局部用藥直腸給藥制劑尿道、陰道給藥制劑滴鼻劑不同制劑的限度留意事項接受稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯合運用這些方法消退供試品的抑菌活性供試液從制備到加入檢驗用培育基不得超過1小時供試液制備若需用水浴加溫時，溫度不應超過45℃供試品須符合微生物限度標準和菌數報告規則，應接受使微生物生長的更高稀釋級進行驗證。（10-3，1000）無合適方法消退抑菌性的檢驗方法，選擇回收率更接近要求的方法和條件應對生產工藝和產品特性進行風險評估，保證檢驗結果的精確性和產品質量。報告規則（平均數，300cfu）培育溫度、培育時間變更檢驗量（中藥膜劑，沙門菌）樣品稀釋級的選擇（驗證）離心法500轉/分，3分鐘（中藥混懸劑重新驗證，只適用細菌）限制菌-培育基的適用性（促生長實力、指標實力和抑制實力）—參照培育基（比較菌落形態、大小、指標劑反應、生長速度）—最長（抑）、最短（生）培育時間。疑似菌確認，選擇認可的菌種鑒定方法，陽性比照試驗至少進行到分別的步驟。微生物限度檢查法驗證細菌、霉菌及酵母菌數計數方法驗證定量——回收率測定試驗限制菌檢查方法驗證定性——能否生長、專屬性試驗回收率計算試驗組的菌回收率=[（試驗組平均菌落數-供試品組平均菌落數）/菌液組平均菌落數]﹡100%稀釋級比照組的菌回收率=[（稀釋劑比照組的平均菌落數/菌液組的平均菌落數）]﹡100%在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑比照組、試驗組的回收率均不低于70%，若任一次試驗中回收率低于70@，應重新選擇方法再驗證。方法驗證：限制菌限制菌：大腸埃希菌，銅綠假單胞菌、沙門菌、大腸菌群、生孢梭菌計數方法：平皿法、薄膜過濾法。特殊：生孢梭菌（加菌量：10~100cfu，只要求生長不要求回收率制定原則：非無菌藥品的微生物限度標準是基于藥品的給藥途徑及對患者潛在的危害而制定的。依據標準檢查限制菌原料藥/賦形劑量微生物檢查微生物能否在原料或賦形劑中生長或存活？供應支持數據，不必做微生物限度檢查和制定認可標準原料或賦形劑是否無菌？不需進一步做微生物限度檢查法或制定認可標準原料/賦形劑合成/工藝相關步驟本身是否會削減微生物依據協議后藥典各論制訂微生物限度認可標準依據協議后藥典各論制訂微生物限度認可標準逐批檢查微生物限度和指示菌抽批檢驗微生物限度和指示菌是否有科學證明削減步驟會造成原料/輔料中微生物量認可限度（未檢出覺指示菌）？供應支持數據，不必做微生物限度檢查和制訂認可標準所監控的微生物量/指示菌量是否都低于規定限度？是否是是是否是是非無菌制劑的微生物檢查制劑中是否含防腐劑或本身是否有抗微生物實力？制訂防腐劑認可標準和認證在低于或等于指定的最小防腐劑濃度時是否有效，并證明制劑本身的抗微生物實力逐批進行微生物限度試驗依據協議后藥典各論制訂微生物限度認可標準不必做微生物限度檢查和制訂認可標準是否每批都符合微生物限度標準？供應支持數據，不必做微生物限度檢查和制訂認可標準是否是否是制劑是否為固體劑型？是否有科學證據證明制劑有抑制微生物生長的特性？否否是保證藥品微生物檢驗結果牢靠的有效途徑藥品微生物試驗環境微生物的監測環境微生物的監測環境細菌與藥品細菌的比較結論2010版藥典無菌檢查法的主要