植物組織培養(yǎng)復(fù)習(xí)資料緒論?

一、概念:植物組織培養(yǎng)：在無菌條件下,將離體的植物器官，組織，細(xì)胞以及原生質(zhì)體，培養(yǎng)在人工培養(yǎng)基上和人工控制的環(huán)境中,使其生長，分化，增殖，甚至長出新的植株的過程和技術(shù)。?外植體：在無菌條件下，離體培養(yǎng)于人工培養(yǎng)基上的，用于達成某種培養(yǎng)目的的原始植物材料。?培養(yǎng)基:根據(jù)植物營養(yǎng)原理和植物組織離體培養(yǎng)的規(guī)定而人工配制的營養(yǎng)基質(zhì)即為培養(yǎng)基。

細(xì)胞全能性：植物體每一個細(xì)胞都具有該植物所有的遺傳信息,在合適的條件下,具有形成完整植株的能力。

脫分化：一個成熟細(xì)胞恢復(fù)到分生狀態(tài)或胚性細(xì)胞狀態(tài)的現(xiàn)象。

再分化：是脫分化細(xì)胞重新恢復(fù)細(xì)胞分化能力，沿著正常的發(fā)育途徑，形成具有特定結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞。?二、組織培養(yǎng)的類型，不同分類依據(jù)。

（根據(jù)培養(yǎng)材料不同)可分為植株培養(yǎng),胚胎培養(yǎng),器官培養(yǎng),組織或愈傷組織培養(yǎng)，細(xì)胞或原生質(zhì)體培養(yǎng)5類;

(根據(jù)培養(yǎng)目的)可分為試管嫁接,試管受精，試管加倍,試管育種等;?(根據(jù)培養(yǎng)方法）可分為平板培養(yǎng),微室培養(yǎng),懸浮培養(yǎng),單細(xì)胞培養(yǎng)等；

(根據(jù)培養(yǎng)過程）可分為初代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)；

（根據(jù)培養(yǎng)基類型）可分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)。?三、三個發(fā)展階段的關(guān)鍵人物。?1,haberlandｔ--－于１９20２３提出植物細(xì)胞全能性理論，被稱為“組織培養(yǎng)之父”。?2，white--－于194３年出版《植物組織培養(yǎng)手冊》。

3,mｕrashinｅ和skoog--－在1９62年篩選出MS培養(yǎng)基。四、植物全能性表達的過程?培養(yǎng)脫分化再分化培養(yǎng)組織培養(yǎng)的特點：?1、植物基礎(chǔ)學(xué)科研究的良好系統(tǒng)。

２、生物技術(shù)的基礎(chǔ)。?3、經(jīng)濟高效，管理方便,利于自動化。?4、技術(shù)含量高,實驗誤差小,人工控制能力強。?5、生長周期短,生長速度快,實驗反復(fù)性好。

６、實驗材料經(jīng)濟，來源單一。缺陷：需要設(shè)備負(fù)復(fù)雜，投入資金多,電能消耗大;對人員技術(shù)水平規(guī)定高，對實驗場合規(guī)定也高，不能代替田間實驗。第二章植物組織培養(yǎng)設(shè)備與培養(yǎng)條件

一、實驗室的組成及重要儀器和設(shè)備

準(zhǔn)備室：干燥箱,高壓滅菌鍋,電子天平,酸度計,水浴鍋,冰箱。?接種室：超凈工作臺，紫外燈，接種工具。

培養(yǎng)室：培養(yǎng)架，搖床,控溫控光設(shè)備。二、植物組織培養(yǎng)所需要的環(huán)境條件

１、溫度:一般植物生長的最適溫度在２3~2７℃之間。

２、光照：光照16h,接著8h的黑暗培養(yǎng),光照強度一般在1000~5０00Lx。

３、濕度：一般規(guī)定7０%~８０%。

4、氣體:低氧有助于胚狀體的形成;高氧有助于根的形成；高濃度乙烯對正常的形態(tài)發(fā)生不利。

5、培養(yǎng)基滲透壓：培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基之間處在等滲或略低于培養(yǎng)基滲透壓。

6、pH值：常在５．6~5.8.調(diào)高不調(diào)低。?三、物理滅菌的方法及條件有哪些?化學(xué)滅菌的藥劑有哪些？

1、物理滅菌

濕熱滅菌：運用高壓蒸汽實現(xiàn)滅菌。在１１8kPa的壓力下，121℃,維持２0分鐘。?干熱滅菌:運用烘箱烘烤滅菌的方法。1６0℃,滅菌時間2~3小時?過濾滅菌

射線滅菌:紫外線照射滅菌?離心沉淀,大量無菌水反復(fù)沖洗等技術(shù)。?２、化學(xué)滅菌?升汞、酒精、次氯酸鈉、來蘇水、高錳酸鉀、雙氧水、漂白粉、抗生素等。

四、高壓滅菌鍋的使用級注意事項：?（1）一方面將內(nèi)層滅菌桶取出,再向外層鍋內(nèi)加入適量的水,使水面與三角擱架相平為宜。

（２)放回滅菌桶,預(yù)熱。裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠,以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果，或堵塞排氣孔。?（3)加蓋,并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓,使螺栓松緊一致,勿使漏氣。

(4）用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥,使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后,關(guān)上排氣閥，此操作反復(fù)兩次。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時,控制熱源,維持壓力至所需時間。1２1.3℃，20分鐘滅菌。?（5）滅菌所需時間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降,當(dāng)壓力表的壓力降至０時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子,取出滅菌物品。

（6)將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時,經(jīng)檢查若無雜菌生長,即可待用。(僅供參考）:培養(yǎng)基及其制備一、培養(yǎng)基有哪些組成成分?其作用是什么？重要成分：１.無機營養(yǎng)①大量元素,N(作用是蛋白質(zhì)、酶的組成物質(zhì));P（是磷脂的重要成分）;S(是含S氨基酸和蛋白質(zhì)的組成成分）;Ｋ（能促進碳水化合物的合成、轉(zhuǎn)移，以及與氮素代謝有密切關(guān)系）；Ca(是細(xì)胞壁的組成成分，Cａ及鈣調(diào)素在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用）；Mg（是葉綠體的組成成分、激酶的活化劑）;②微量元素Fｅ(是某些氧化酶的組成成分,是葉綠素形成的必要條件)；Cｕ（能促進離體根的形成);Mn(參與植物光合和呼吸代謝,是氧化還原酶的成分）；B（影響碳水化合物的運送）；Ｚn(是合成色氨酸的成分）;Ｍo(是合成硝酸還原酶的成分)；2、有機營養(yǎng)成分①碳源（作用是提供骨架和能源;維持滲透壓；影響分化；促進胚狀體的發(fā)育）②維生素類（作用是以各種輔酶的形式參與多種代謝活動，促進生長和分化，Ｖc能防止褐化）③肌醇（作用是促進糖的轉(zhuǎn)化;是細(xì)胞壁的構(gòu)成原料；促進愈傷組織的生長以及胚狀體和芽的形成)④氨基酸（作用是是蛋白質(zhì)的組成部分,也是很好的有機碳源)⑤天然復(fù)合物(作用是促進某些愈傷組織和器官的生長)植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。①生長素類（誘導(dǎo)愈傷組織的形成,根的分化以及細(xì)胞的分裂和伸長,誘導(dǎo)胚狀體產(chǎn)生)②細(xì)胞分裂素類（促進細(xì)胞的分裂、分化,誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的形成，延緩組織的衰老并增強蛋白質(zhì)的合成）③赤霉素(加速細(xì)胞的伸長生長,促進細(xì)胞分裂。）④脫落酸(克制細(xì)胞分裂和伸長、促進脫落和衰老、促進休眠和提高抗力能力等作用。)⑤多胺（調(diào)控部分外植體不定根、不定芽、花芽、體細(xì)胞胚發(fā)生發(fā)育和延緩原生質(zhì)體衰老、促進原生質(zhì)體分裂及細(xì)胞克隆方面有顯著作用)多效挫(重要用于試管苗的壯苗,生根,提高抗逆性以及移栽成活率等方面)4、其他成分。①凝固劑（支持物，重要是對培養(yǎng)材料起固定或支持作用)②活性炭(作用是吸附培養(yǎng)基和培養(yǎng)物分泌物中的克制物質(zhì)，可克制外植體褐變,防止玻璃苗的產(chǎn)生,還能促進培養(yǎng)物的生長和分化以及促進生根)③抗生素(作用是防止外植體內(nèi)生菌導(dǎo)致的污染)④抗氧化物(作用是克制外植體褐變）⑤硝酸銀(作用是克制乙烯氣體的活性,少量的AgNＯ３促進愈傷組織器官的發(fā)生或體細(xì)胞胚的發(fā)生,并能使本來再生困難的物種分化出再生植株，對克服試管苗玻璃化及早衰和落葉有明顯效果）。二、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類,溶解及作用?1、生長素類作用是誘導(dǎo)愈傷組織、根的分化以及細(xì)胞的分裂和伸長;與一定量的細(xì)胞分裂素配合可誘導(dǎo)不定芽,以及胚狀體的產(chǎn)生一般生長素溶于９５％酒精或0.1ｍoｌ/L的NaOH(或ＫOH）中2、細(xì)胞分裂素作用是促進細(xì)胞的分裂和分化,誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的形成,延緩組織的衰老并增強蛋白質(zhì)的合成細(xì)胞分裂素一般溶于0.5或1mol／L的ＨCl或稀薄的NaＯｈ3、赤霉素類作用是加速稀薄的伸長生長和促進細(xì)胞分裂，對組織培養(yǎng)中的器官和胚狀體的形成表現(xiàn)克制作用,但對以形成的器官和胚狀體的生長則有促進作用赤霉素最佳以95％酒精配成母液在冰箱保存4、脫落酸類作用是促進體細(xì)胞胚的發(fā)生，克制異常體細(xì)胞的發(fā)生,對部分之物語組織培養(yǎng)中不定芽的分化有一定促進作用溶解:實驗室很少用到5、多胺類作用是調(diào)控部分植物外植體不定根、不定芽、花芽、體細(xì)胞胚發(fā)生發(fā)育以及延緩原生質(zhì)體衰老,促進原生質(zhì)體分裂及細(xì)胞克隆形成方面具有明顯的效果溶解:多胺與乙烯的生物合成有共同的前體6、多效挫重要用于試管苗的壯苗,生根,提高抗逆性以及移栽成活率等方面多效挫可溶解于水中三、儲備液的制備及注意事項:儲備液Ｉ大量元素，濃縮20倍，配制1Ｌ培養(yǎng)基應(yīng)取5０ｍl儲備液II微量元素，濃縮200倍，配制1L培養(yǎng)基應(yīng)取5ml儲備液ＩII鐵鹽，濃縮２００倍，配制1L培養(yǎng)基應(yīng)取５ｍl儲備液IV有機物，濃縮２0０倍,配制1L培養(yǎng)基應(yīng)取5mｌ植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，母液濃度一般為1mg／mＬ或0.1ｍg/mｏL(fēng)，用時根據(jù)需要取用。注意事項:(1)配制母液及培養(yǎng)基要用純度較高的蒸餾水或去離子水，藥品應(yīng)采用純度等級較高的分析純或化學(xué)純,以免帶入雜質(zhì)和有害物質(zhì)對培養(yǎng)材料產(chǎn)生不利影響。藥品稱量、定容時應(yīng)特別細(xì)心、準(zhǔn)確,特別是生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和微量元素。(3）每次稱量藥品時,應(yīng)特別注意防止藥匙污染而引起的藥品交叉污染。（4）各種藥品先以少量水令其充足溶解，然后依次混合。（5）母液配制前應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基配方及所需制成母液配制表,按表逐項配制。四、培養(yǎng)基的制備及注意事項準(zhǔn)備工作1.實驗用品的準(zhǔn)備。2.試劑、藥品的準(zhǔn)備。３.根據(jù)培養(yǎng)基的配方、母液擴大倍數(shù)及需要配制的培養(yǎng)基體積計算母液移取的量。配制過程具體操作：１.取規(guī)定數(shù)量的糖源(常用蔗糖）和凝固劑，置于燒杯或搪瓷鍋內(nèi)，加蒸餾水或去離子水，使用電爐加熱溶解；若是液體培養(yǎng)基，無需加熱。注意事項：不斷攪拌防止瓊脂凝固，溶解充足，放置石棉網(wǎng)，以免粘鍋及燒焦底部蔗糖；注意火候，以免溢出。2.根據(jù)計算所需量依次加入儲備液Ⅰ、儲備液Ⅱ、儲備液Ⅲ、儲備液Ⅳ、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)母液及其他特殊附加物，攪拌均勻。注意事項:移液器（移液管或移液槍)對號專用,避免交叉污染;母液發(fā)生沉淀或變色，則不能使用，應(yīng)重新配制;若出現(xiàn)結(jié)晶,應(yīng)加熱使其完全溶解后再使用。３.加水定容至規(guī)定體積,攪拌均勻。注意事項：定容準(zhǔn)確，注意溫度的變化影響定容體積。調(diào)整培養(yǎng)基的pH值:５.5-6．０注意事項:ｐH值要適宜,偏大，會使培養(yǎng)基發(fā)硬，反之培養(yǎng)基太軟不易凝結(jié);1mol/Ｌ的HＣl或NaＯH調(diào)節(jié);高溫滅菌后，pH值常下降約0.1-0．5個單位。5．分裝注意事項:盡快分裝;直接注入法或虹吸分注法;避免將培養(yǎng)基粘到容器內(nèi)壁及容器口；已經(jīng)分裝的培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)占該容器的１／3－１/4；應(yīng)當(dāng)做上標(biāo)記,注明配制日期和培養(yǎng)基種類。6、封口注意事項：封口膜應(yīng)具有透光、透氣性,但不通透塵埃、微生物等雜質(zhì),以免培養(yǎng)基污染;封閉容器所用材料的尺寸應(yīng)為被覆蓋容器上口直徑的３-4倍見方。７、培養(yǎng)基滅菌高壓蒸汽滅菌過濾滅菌注意事項及為高壓滅菌時需注意的規(guī)定(結(jié)合自己理解記憶）８、冷卻取料，封存?zhèn)溆谩５谒恼?植物材料一、概念---幼年期：指植物初期生長發(fā)育過程成年期:指植物后期生長發(fā)育過程。復(fù)壯:指用來描述樹木組織或細(xì)胞形態(tài)發(fā)生幼態(tài)特性的恢復(fù)過程。二、外植體的選擇的原則:１植物的種質(zhì)（種類及品種或類型）選擇一般選a易于離體培養(yǎng)的種類及品種或類型b選生產(chǎn)上或研究上意義比較大的種類及品種或類型c考慮褐變2選擇有良好增殖能力的外植體３選擇合適大小的外植體，一般在０．5~1cm，脫毒培養(yǎng)植物材料應(yīng)在0.２~0.5cｍ4外植體的年齡和著生部位幼年植物的外植體、成年樹的下部取材、有年數(shù)的下部取材、帶芽的外植體分生組織、分化組織構(gòu)成的外植體5取外植體的季節(jié)和時間一般選處在生長季,較幼嫩的外植體；春夏取材滅菌容易,秋冬季取材難以成活；雨季濕熱季節(jié)取材不容易成功6木本材料的特殊性a純系比較難于獲得b年齡效應(yīng)應(yīng)比較明顯，高年齡材料難于培養(yǎng)野生大樹取材困難，滅菌難,增生難,不同取樣不一c位置效應(yīng)比較明顯,不同取樣部位,培養(yǎng)結(jié)果不一d經(jīng)常進行幼化解決e由于數(shù)年田間生長因素,雜菌感染嚴(yán)重f木本植物材料經(jīng)常出現(xiàn)深休眠，需要預(yù)先解除休眠。所以一方面選擇已有的無菌材料，再考慮選用溫室植物,最后才從野外生長植株上取材。第五章植物離體快速繁殖一、概念--－植物離體快速繁殖：又稱微體快繁，指運用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進行的一種營養(yǎng)繁殖方法:是常規(guī)營養(yǎng)繁殖方法夫人一種擴展和延伸。褐變：酚類化合物被多酚氧化物氧化成褐色醌類物質(zhì)和水醌類物質(zhì)又會與luo氨酸酶發(fā)生作用使外植體蛋白質(zhì)聚合，導(dǎo)致外植體生長停頓，直至死亡。玻璃化:試管苗的莖，葉變成透明水浸狀，生長畸形，增殖系數(shù)明顯下降，難以誘導(dǎo)生根，即使誘導(dǎo)生根,其根系質(zhì)量極差,移栽成活率極低的現(xiàn)象。二、離體快速繁殖的意義及基本程序意義:1）繁殖系數(shù)高,繁殖周期短,繁殖速度快：2）應(yīng)用廣泛，是推廣良種的重要手段:3)繁殖材料用量少。不受季節(jié)限制，可實現(xiàn)工廠化生產(chǎn);4）能獲得無毒苗木無性系;5)木本植物應(yīng)用潛力大。程序:1)穩(wěn)定的無菌培養(yǎng)體系的建立時期;2）穩(wěn)定培養(yǎng)系的增殖：３）誘導(dǎo)莖芽生根形成小苗時期：4)生根小苗移栽和馴化時期。三、離體快繁的影響因素內(nèi)因：1）外植體,類型及其生理狀況，大小，年齡及生理狀況。２）繼代培養(yǎng)次數(shù)３)愈傷組織的遺傳特性及生理狀態(tài)4)芽的增殖途徑:嫩梢扦插增殖途徑叢生芽增殖途徑器官發(fā)生增殖途徑胚狀體增殖途徑原球莖途徑外因:1)培養(yǎng)基２）培養(yǎng)條件四、污染問題:因素,類型以及防止來源：一是由于材料表面消毒不徹底,植物材料帶入培養(yǎng)過程,或是植物內(nèi)生菌隨材料帶入培養(yǎng)過程;二是無菌操作過程中有外界環(huán)境進入培養(yǎng)容器導(dǎo)致。類型：細(xì)菌性污染和真菌性污染防止:1）選擇植物材料2)嚴(yán)格消毒滅菌3）合理安排繁殖程序4)規(guī)范操作，控制環(huán)境條件五、褐變問題：因素以及防止因素：酚類化合物被多酚類氧化物氧化成褐色的醌類物質(zhì)和水。防止:1）選擇適宜的外植體和培養(yǎng)條件2)連續(xù)轉(zhuǎn)移（繼代培養(yǎng))3)加入抗氧化劑六、增殖途徑芽的增殖途徑：嫩梢扦插增殖途徑叢生芽增殖途徑器官發(fā)生增殖途徑胚狀體增殖途徑原球莖途徑七、試管苗移栽提高試管苗移栽成活率的措施:１)提高試管生根質(zhì)量2）加強移栽前煉苗3）保證組培苗移栽基質(zhì)質(zhì)量４)作好移栽前根系解決５)煉苗后的濕度控制，溫度控制，光照控制。第六章植物愈傷組織培養(yǎng)一、概念－--愈傷組織:在組織培養(yǎng)中,指在人工培養(yǎng)基上由外植體組織的增生細(xì)胞產(chǎn)生的一團不定形的疏松排列的薄壁細(xì)胞。胚狀體:植物組織培養(yǎng)過程中可以產(chǎn)生與正常合子胚相似的結(jié)構(gòu),也稱為體細(xì)胞胚二、愈傷組織的類型及其特點，形成過程？類型：松脆愈傷組織有大量的分生組織中心,進行活躍的細(xì)胞分裂，為大而未分化夫人細(xì)胞所分開，其愈傷組織內(nèi)有大量的細(xì)胞間隙,細(xì)胞排列毫無順序。致密愈傷組織內(nèi)無細(xì)胞間隙,而由管狀細(xì)胞組成維管組織。形成過程;誘導(dǎo)期分裂期形成期分化期三、優(yōu)良愈傷組織的特點１)高度的胚性或再分化能力，以便從這些愈傷組織得到再生植株;2)容易散碎,，以便用這些愈傷組織建立優(yōu)良懸浮液,并且在需要時能從中分離出全能性原生質(zhì)體；3)旺盛的自我增殖能力,以便用這些愈傷組織建立大規(guī)模的愈傷組織無性系。4）通過長期繼代保存而不喪失胚性,以便有也許對它們進行各種遺傳操作。四、愈傷組織的定向誘導(dǎo)加入高濃度的生長物質(zhì)，可使堅實的愈傷組織變?yōu)樗纱鄿p去或除去生長物質(zhì),松脆變堅實控制轉(zhuǎn)變的因子是:植物激素和氮源形態(tài),生長素促使細(xì)胞進入松脆，細(xì)胞分裂素促使細(xì)胞進入堅實，還原氮(氨態(tài)氮)具有促進細(xì)胞分裂，硝態(tài)氮具有克制細(xì)胞分裂的作用第七章體細(xì)胞胚胎的發(fā)生一、概念-－-體細(xì)胞胚胎的發(fā)生；是指雙倍體或單倍體的體細(xì)胞(非合子細(xì)胞)在特定條件下,未經(jīng)性細(xì)胞融合而通過與合子胚胎發(fā)生類似的途徑發(fā)育出新個體的形態(tài)發(fā)生過程人工種子：是指將植物離體培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的胚狀體，重要是指體細(xì)胞胚，或者能發(fā)育成完整植株的分生組織（不定芽,小鱗莖，短枝,毛狀根，愈傷組織,胚狀體等）,包裹在有養(yǎng)分和具有保護功能的物質(zhì)中形成的類似于天然植物種子的結(jié)構(gòu),即都具有活力的胚胎和有營養(yǎng)和保護作用的外部結(jié)構(gòu)，并在適宜條件下能發(fā)芽出苗的顆粒二、體細(xì)胞胚胎發(fā)生特點？階段？特點:1)體細(xì)胞具有兩極性2)存在生殖隔離3)遺傳性相對穩(wěn)定４)重演受精卵形態(tài)發(fā)生的特性5)體細(xì)胞胚胎發(fā)生具有普遍性與兩極性等特點階段：胚性愈傷組織的誘導(dǎo),體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)，體細(xì)胞胚初期的分化發(fā)育（球形胚到魚雷形胚的發(fā)育）,體細(xì)胞胚成熟以及體細(xì)胞胚萌發(fā)和成苗。或者：胚性愈傷組織和體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)體細(xì)胞胚的初期分化發(fā)育體細(xì)胞胚的后期生長發(fā)育三、影響體細(xì)胞胚胎發(fā)生的因子1、外植體2、培養(yǎng)基3、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)4、環(huán)境因子5、培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基狀態(tài)四、人工種子的優(yōu)點1）使生產(chǎn)不受外界自然條件影響和土地制約,一年四季在室內(nèi)都可以生產(chǎn)2）快捷高效的繁殖方式,縮短育種時間3）可以人為賦予種子多種優(yōu)良品質(zhì)4)固定雜種優(yōu)勢5）對于一些自然繁殖困難的名優(yōu)珍貴品種，均可采用人工種子技術(shù)進行快速大量的繁殖6）人工種子可以培養(yǎng)的芽,胚保持自然種子的機能,不易霉變,從而便于組織物的保存與運送。第八章植物細(xì)胞培養(yǎng)概述幾個概念－-－植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng):即用類似于微生物培養(yǎng)所用發(fā)酵罐的生物反映器，提供滿足細(xì)胞正常生長和生物物質(zhì)合成的可控環(huán)境,進行細(xì)胞大量培養(yǎng)的方法。單細(xì)胞培養(yǎng):又叫單細(xì)胞克隆技術(shù)。是指純粹單離的細(xì)胞成群培養(yǎng)的方法。平板培養(yǎng):將具有０.6%瓊脂的培養(yǎng)基冷卻到35℃（尚未固化)，將懸浮液接種進去,充足混合，倒入9cm的培養(yǎng)皿中,約鋪成1mm厚薄層，培養(yǎng)皿用塑料膜封口的培養(yǎng)方法。條件培養(yǎng)：在選用的培養(yǎng)基中，加入一定量已生長過組織或細(xì)胞的培養(yǎng)液來培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)方法。看護培養(yǎng):將愈傷組織直接置于鋪有單細(xì)胞的濾紙下,作為看護愈傷組織來培養(yǎng)細(xì)胞的方法。微室培養(yǎng):用條件培養(yǎng)基代替了看護組織，將細(xì)胞置于微室中進行培養(yǎng)的培養(yǎng)方法。液體淺層培養(yǎng)：先在培養(yǎng)皿中注入淺層液體培養(yǎng)基,再接種已分散的單細(xì)胞的培養(yǎng)方法。起始細(xì)胞密度：指開始培養(yǎng)時,單位體積內(nèi)的細(xì)胞數(shù)目。二、細(xì)胞培養(yǎng)的方法答：植物細(xì)胞培養(yǎng)可以分為大量細(xì)胞培養(yǎng)和單細(xì)胞培養(yǎng)兩類。其中大量細(xì)胞培養(yǎng)又分為懸浮培養(yǎng)和固化培養(yǎng)兩類。植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)又可分為成批懸浮培養(yǎng)和連續(xù)懸浮培養(yǎng)兩類。植物單細(xì)胞培養(yǎng)又可分為平板培養(yǎng)、條件培養(yǎng)、看護培養(yǎng)三類。第九章植物組織培養(yǎng)脫毒一、病毒的分布規(guī)律答:病毒在植物體內(nèi)分布不均一。越接近生長點病毒濃度越稀。二、脫毒的原理及方法答:１.熱解決脫毒法原理:eｑ\o\ａｃ（○,１)病毒ＤNＡ分子進入細(xì)胞后隨植物細(xì)胞的DNA一起復(fù)制。熱解決并不能殺死病毒,只能鈍化病毒的活性，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或增殖停止,而失去傳染能力。ｅq＼ｏ\aｃ(○，2）熱解決是一種物理效應(yīng)，與冷解決同樣可以加速植物細(xì)胞的分裂，使植物細(xì)胞在與病毒繁殖的競爭中取勝處在優(yōu)勢地位。方法:ｅq\o\ac（○,１)愈傷組織熱解決eq\ｏ\ac(○,２)熱空氣解決脫毒法2.微莖尖培養(yǎng)脫毒(1)原理:eｑ\o\ａc(○,1)病毒在植物體內(nèi)分布不均勻，越接近頂端分生組織,病毒濃度越稀，因此可以采用小莖尖的離體培養(yǎng)脫除植物病毒。eq＼ｏ\ac(○,2).病毒ＤNＡ分子與細(xì)胞分裂蛋白質(zhì)合成競爭,在迅速合成的植物細(xì)胞中正常合成的蛋白質(zhì)占優(yōu)勢。（2）方法：外植體經(jīng)表面滅菌后,在解剖鏡下,經(jīng)無菌操作切取小莖尖,接種到備用培養(yǎng)基上,放入培養(yǎng)室內(nèi)進行培養(yǎng),并及時觀測和記錄培養(yǎng)結(jié)果。３.愈傷組織培養(yǎng)脫毒法(1)原理：eq\o＼aｃ(○,１）病毒在植物體內(nèi)不同器官或組織分布不均勻。eq\ｏ\ａc(○,2)病毒在愈傷組織的快速增值中,復(fù)制能力衰退或丟失。eq\o＼ａｃ(○,3）繼代培養(yǎng)的愈傷組織產(chǎn)生抗性變異。（2）方法：植物各種器官或組織誘導(dǎo)出愈傷組織,愈傷組織多次繼代,然后從愈傷組織再誘導(dǎo)分化芽，長成植株。4.珠心組織培養(yǎng)脫毒法病毒是通過維管組織傳播的,而珠心組織和維管束系統(tǒng)無直接聯(lián)系,故可以通過珠心組織離體培養(yǎng)獲得無病毒植株。5.微體嫁接離體培養(yǎng)脫毒法(１)原理:由于微體嫁接的接穗是很小的莖尖，微莖尖的帶毒幾率很小,故采用微體嫁接的方法可以獲得無毒苗。（2）方法:把極小(小于0.2mm)的莖尖作為接穗嫁接到實生砧木上(無菌種子培養(yǎng)獲無菌苗,種子實生苗不帶毒）,然后將嫁接后的砧木接種到新的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。植物脫毒苗的檢測與保存答:1.檢測:視覺觀測法生物鑒定法抗血清鑒定法分光亮度法2．保存：（1)隔離種植保存(2）離體保存第十章:植物胚胎培養(yǎng)一、概念---胚胎培養(yǎng):對植物的胚及胚器官進行人工離體無菌培養(yǎng)，使其發(fā)育成幼苗的技術(shù)。胚培養(yǎng):將受精后的果實或種子,用藥劑進行表面滅菌，然后在無菌的條件下剖開種子,剝離種胚,進行胚解決,最后接種于預(yù)先配置好的培養(yǎng)基上,使其在人工控制條件下,發(fā)育成一棵完整的植株。胚珠培養(yǎng)：將整個胚珠進行消毒，然后再嚴(yán)格的無菌條件下把胚剝離出來，直接置于培養(yǎng)基上培養(yǎng)。子房培養(yǎng)：取未授粉或授粉后的子房,進行表面消毒,在無菌的條件下接種于培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。胚乳培養(yǎng):取胚乳已發(fā)育到細(xì)胞器的果實或種子,進行表面滅菌，然后在無菌條件下剝離