微生物學實驗中藥與制藥第一頁，共六十九頁，2022年，8月28日目的要求:1、了解微生物學實驗室常用消毒滅菌儀器設備

2、了解空氣、皮膚細菌檢查方法

3、掌握藥品的微生物學檢驗程序和方法實驗一藥品的微生物限度檢查（一）實驗室常用消毒滅菌設備空氣和皮膚細菌檢查方法第二頁，共六十九頁，2022年，8月28日一.藥品的微生物限度檢查（一）1.口服藥物的微生物檢查:①大腸桿菌的檢查：②細菌總數的檢查2.外用藥物的微生物檢查:①綠膿桿菌的檢查：②金黃色葡萄球菌的檢查：

第三頁，共六十九頁，2022年，8月28日口服藥外用藥藥品的微生物限度檢查實驗方法（一）

1.藥品的預處理2克藥品加20毫升生理鹽水，研磨制成懸液

2.細菌培養外服藥口用藥藥品混懸液10毫升加入膽鹽乳糖增菌液中藥品混懸液10毫升加入膽鹽乳糖增菌液中藥品混懸液10毫升加入亞碲酸鈉增菌液中37℃,24小時37℃,24小時第四頁，共六十九頁，2022年，8月28日

將剩余口服藥以10-110-210-310-4

進行稀釋(以生理鹽水稀釋)

3.細菌總數測定加溶化的瓊脂培養基中，混勻，冷卻后,置37℃恒溫培養箱培養24小時

。取三個中試管各管加9ml生理鹽水從剩余10ml懸液中取1ml加入第一個稀釋管中1ml10-110-410-210-39ml生理鹽水從上述三個稀釋管中各取1ml1ml10-110-410-210-3第五頁，共六十九頁，2022年，8月28日二.空氣、皮膚細菌檢查方法(驗證)三.微生物學實驗室常用消毒滅菌儀器設備：高壓蒸汽滅菌鍋消毒煮沸器G6玻璃濾菌器裝置潔凈工作臺移動式紫外光燈鼓風式干烤箱紫外線殺菌標本。第六頁，共六十九頁，2022年，8月28日厭氧工作站催化劑（鈀粒）厭氧培養罐電熱恒溫培養箱二氧化碳培養箱第七頁，共六十九頁，2022年，8月28日一、目的要求:1、了解細菌培養接種技術

2、掌握細菌基本形態

3、掌握藥品的微生物學檢驗程序和方法二、實驗內容1.藥物的微生物限度檢查（二）2.空氣、皮膚細菌檢查結果測定。3.講授基礎培養基的制備方法（營養瓊脂、營養肉湯）。4.培養基的種類和用途普通培養基、營養培養基、厭氧培養基、選擇培養基5.細菌在三種不同物理性狀培養基上的接種方法(基本技能)

液體培養基 平板培養基 斜面培養基 雙糖含鐵半固體斜面培養基6.顯微鏡下觀察

細菌的基本形態:球菌、枯草桿菌、霍亂弧菌。特殊結構：肺炎莢膜、變形鞭毛、破傷風芽胞。實驗二藥品的微生物限度檢查（二）細菌的形態學檢查及培養接種技術第八頁，共六十九頁，2022年，8月28日一、空氣、皮膚的細菌檢查結果

1、記錄空氣微生物培養結果（要記錄本人所在實驗臺的結果）菌落大小、邊緣、顏色、粗糙（光滑）2、記錄皮膚微生物培養結果（要記錄本人的實驗結果）比較消毒前后細菌菌落數，菌落特點。第九頁，共六十九頁，2022年，8月28日二、培養基的制備培養基分類根據物理性狀分類：液體培養基主要用于增菌半固體培養基用于檢測動力及保存菌種固體培養基用于分離鑒定細菌根據用途分類：基礎培養基普通瓊脂培養基營養培養基血液瓊脂培養基選擇培養基SS培養基鑒別培養基雙糖鐵培養基厭氧培養基庖肉培養基第十頁，共六十九頁，2022年，8月28日培養基的制備程序調配→矯正pH（7.0-7.6）→分裝→滅菌（121.3℃，20-30分鐘）→放入冰箱冷藏備用。因高壓之后pH值會下降0.1左右，所以矯正pH時應比所需的pH高。鑒定是否有菌可將培養基置于37℃培養24小時，然后觀察。第十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日方法1.平板劃線接種法（1）平行劃線法（2）分區劃線法2.瓊脂斜面的接種方法3.液體培養基接種法4.半固體接種法第十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日平行劃線法第十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日分區劃線法第十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日菌落第十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日斜面移種技術第十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日菌苔第十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日液體移種技術第十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日穿刺技術第十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日取出前次實驗培養物觀察：

1.口服藥物1)細菌鑒定：在膽鹽乳糖增菌液中有無細菌生長：增菌液變混濁―――――有

-----接種在伊紅美蘭瓊脂平板培養基上面。方法：分區劃線接種。

2)細菌總數測定：選擇30-300個菌落平板，細菌總數＝菌落數×稀釋倍數藥物的微生物限度檢查方法（二）第二十頁，共六十九頁，2022年，8月28日2.外用藥1)判定膽鹽乳糖增菌液培養物及亞碲酸鈉增菌液培養物有無細菌生長：增菌液變混濁―――有2)細菌鑒定：（1）將膽鹽乳糖增菌液培養物無菌接種在16烷三甲基溴化胺瓊脂斜面培養基上面。方法：斜面化線接種；（2）將亞碲酸鈉增菌液培養物，無菌接種在卵黃高鹽瓊脂平板培養基上面。方法：分區劃線接種。

37℃恒溫孵育箱24小時培養后，觀察結果。第二十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日細菌基本形態球菌桿菌螺形菌第二十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日葡萄球菌第二十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日鏈球菌第二十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日大腸埃希菌第二十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日枯草桿菌第二十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日霍亂弧菌第二十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日細菌特殊結構鞭毛莢膜芽孢第二十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日破傷風梭菌spore第二十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日一、目的要求:1、了解細菌的生長現象及代謝產物的觀察

2、掌握藥品的微生物學檢驗程序和方法二、實驗內容1.藥物的微生物限度檢查（三）2.細菌的生長現象及代謝產物的觀察

1）液體培養基---沉淀、渾濁、表面生長現象。

2）三葡、三鏈、大腸與副傷乙培養基的菌落特征、溶血環觀察。

3）雙糖含鐵培養基---動力、氣體、硫化氫、分解乳糖觀察。

4）結核桿菌菌落的觀察。 3.中草藥、抗生素抑菌試驗

1）中草藥---大蒜汁、黃連、黃芩、黃柏。

2）抗生素---青霉素、慶大、氨芐、新諾明、生理鹽水。實驗三藥品的微生物限度檢查（三）微生物的形態學檢查及藥物的敏感性試驗第三十頁，共六十九頁，2022年，8月28日1）從伊紅美蘭瓊脂平板培養基上-----

挑取黑色帶有金屬光澤的濕潤菌落，接種在普通瓊脂斜面培養基上面，進行細菌的純培養。

2）觀察外用藥物在16烷三甲基溴化胺瓊脂斜面培養基上生長狀況。記錄被檢菌色素的溶解性質、液化明膠的狀況及菌苔粘稠度等。

革蘭氏染色鏡下觀察其菌落形態。根據上述被檢菌落的生物性質和狀況及細菌形態，確定該被檢菌的名稱。

3）從卵黃高鹽瓊脂平板培養基上生長，挑取黃色的濕潤菌落，接種在普通瓊脂斜面培養基上面，進行細菌的純培養。藥物的微生物限度檢查（三）第三十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日2.細菌的生長現象及代謝產物的觀察混濁生長菌膜菌沉淀均勻渾濁對照第三十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日菌膜生長第三十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日第三十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日第三十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日第三十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日腸道桿菌雙糖鐵培養基結果比較葡萄糖乳糖硫化氫大腸桿菌副傷寒桿菌痢疾桿菌第三十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日革蘭染色步驟

1.制片：取標本（球桿混合物、牙垢）涂片、干燥、固定2.初染：結晶紫——1min——水洗3.媒染：碘液——1min——水洗4.脫色：95%酒精——30s——水洗5.復染：沙黃——1min—水洗、濾紙吸干6.油鏡觀察：第三十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日第三十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日1、制片

涂片、干燥、固定第四十頁，共六十九頁，2022年，8月28日2.結晶紫初染1min——水洗第四十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日3.碘液媒染1min——水洗第四十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日4.95%酒精脫色30s——水洗第四十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日5.沙黃復染1min——水洗、濾紙吸干第四十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日第四十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日6.油鏡觀察

結果革蘭陽性菌：紫色革蘭陰性菌：紅色第四十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日3.中草藥、抗生素抑菌試驗第四十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日紙片法第四十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日實驗四藥物的微生物限度檢查（四）病毒和細菌及其他病原微生物一、目的要求1、了解抗酸染色方法及各種病毒和細菌的菌落形態2、掌握藥品的微生物學檢驗程序和方法二、實驗內容1、藥物的微生物限度檢查（四）1）將口服藥物中的細菌分別接種：①蛋白胨水培養基；②葡萄糖蛋白胨水培養基；③枸櫞酸鹽（西蒙氏）培養基。同時接種產氣桿菌于上述培養管做對照，以備進行IMViC試驗。2）取接種在普通瓊脂斜面培養基上面的外用藥物中細菌進行血漿凝固酶檢測,依據其反應結果,確定該菌的性質及名稱。2、抗酸染色 3、真菌培養物的觀察------黑曲霉、木霉、青霉菌菌落，白色念珠菌假菌絲，酵母菌菌落的觀察。4、記錄中草藥、抗生素抑菌試驗結果5、觀察雞胚的結構 第四十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日生化反應管待檢細菌對照菌(產氣桿菌)蛋白胨水培養基2支管接種1支管接種1支管葡萄糖蛋白胨水培養基4支管接種2支管接種2支管枸櫞酸鹽培養基2支管接種1支管接種1支管接種細菌的對應生化反應管第五十頁，共六十九頁，2022年，8月28日血漿凝固酶試驗

玻片法第五十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日抗酸染色原理:結核分枝桿菌含脂質多,不易著色,若加溫或延長時間使其著色后,再用3%鹽酸酒精處理也不易脫色,稱抗酸染色.經此染色后,結核分枝桿菌呈紅色,其它呈藍色.

步驟２．抗酸染色第五十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日制片（涂片、干燥、固定）；石炭酸復紅初染（加熱、蓋濾紙片）5min---水洗；3％鹽酸酒精脫色（15S,水洗）；美蘭復染（1min，水洗）-濾紙吸干鏡檢。抗酸染色步驟第五十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日結核桿菌第五十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日抗生素體外抑菌試驗（二）

記錄紙片法結果測量抑菌環直徑

第五十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日病毒的分離培養—雞胚接種動物接種雞胚培養組織細胞培養病毒的培養方法：第五十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日病毒的分離培養—雞胚接種第五十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日病毒名稱接種部位雞胚胚齡（天）痘類病毒絨毛尿囊膜10～13流感、副流感、腮腺炎病毒尿囊9～11嗜神經病毒卵黃囊5～8初次分離標本羊膜腔10～12病毒的分離培養—雞胚培養第五十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日菌絲第五十九頁，共