培養基種類成分配制技術篩選方法第三講培養基

教學內容

培養基種類

完全培養基

初代培養基

繼代培養基

固體培養基

液體培養基

基本培養基

誘導培養基

增殖和生根培養基基本培養基

◆

1962年由Murashige和Skoog為煙草組培設計◆無機鹽、離子濃度高，含高K、N，硝酸鹽含量較高，含銨鹽。◆營養豐富

◆加速合作愈傷組織和培養物生長

MS培養基Miller培養基B5培養基SH培養基N6培養基KM-8P培養基White培養基基本培養基

◆無機元素用量是MS的1/3－1/2◆微量種類少

◆無肌醇MS培養基Miller培養基B5培養基SH培養基N6培養基KM-8P培養基White培養基基本培養基

◆1943年White培養番茄根尖時設計◆無機鹽量較低◆使用廣泛

◆適合生根培養、胚胎培養等MS培養基Miller培養基White培養基SH培養基B5培養基N6培養基KM-8P培養基基本培養基

◆1968年Gamborg在大豆根細胞培養時設計◆含較低的銨，硝酸鹽和鹽酸硫胺素用量較高。

◆適合雙子葉植物，尤其木本植物組培。MS培養基Miller培養基SH培養基B5培養基N6培養基KM-8P培養基White培養基基本培養基

◆特點與B5相似，硫酸銨改用磷酸二氫銨。

◆無機鹽濃度較高。

MS培養基Miller培養基SH培養基B5培養基N6培養基KM-8P培養基White培養基基本培養基

◆1974年朱至清等為水稻花藥培養而設計◆成分簡單◆硝酸鉀和硫酸銨含量高

◆適合花粉、花藥培養MS培養基Miller培養基SH培養基B5培養基N6培養基KM-8P培養基White培養基基本培養基

◆1974年為原生質體培養而設計◆有機成分復雜

◆用于原生質體培養(包括原生質融合的培養)MS培養基Miller培養基SH培養基B5培養基N6培養基KM-8P培養基White培養基營養分布均勻，生長發育整齊一致，但通氣性差。通氣性較好，便于操作，但營養分布不均，生長發育不一致。固體培養基液體培養基

MS培養基配方硝酸銨1650硫酸鋅8.6硝酸鉀1900氯化鈷0.025氯化鈣440硫酸銅0.025硫酸鎂

370鉬酸鈉0.25磷酸二氫鉀170碘化鉀0.83硫酸亞鐵27.8硼酸6.2EDTA-Na237.3煙酸0.5肌醇100鹽酸吡哆素0.5硫酸錳22.3鹽酸硫胺素0.1

甘氨酸2

培養基的成分

植物激素

無機鹽

有機物質培養體支持材料

輔助物質水

分無機鹽

元素名稱

添加形式

NKNO3,NH4NO3大量

PKH2PO4NaH2PO4元素

KKClKNO3(≥0.5mmol/L)CaCaCl2·2H2OMgMg2SO4·7H2OSMg2SO4·

7H2OFeFeNa2-EDTA微量

BH3BO3元素

MnMnSO4

(≤0.5mmol/L)CuCuSO4

MoNa2MoO4·2H2OClCaCl2·2H2O有機物質維生素

氨基酸天然復合物

椰乳香蕉泥水解酪蛋白碳水化合物

馬鈴薯其

它碳水化合物

種類：蔗糖、葡萄糖、果糖、麥芽糖、乳糖等。蔗糖濃度：2-3%，胚培養為4-15%。注意：

高壓滅菌部分糖會分解。大生產時可用白砂糖。功能：

能源；維持滲透壓（1.5－4.1大氣壓）；種類：B族維生素、B1、B6、煙酸、生物素（ＶＨ）、抗壞血酸（ＶＣ）、肌醇、泛酸或泛酸鈣。濃度：0.1－1.0mg/L

功能：參加酶的形成參加蛋白質和脂肪代謝等生命活動

VB1促愈傷組織產生，提高活力

VB6

促根生長

Vpp與代謝和胚發育有關

Vc防組織褐變維生素肌醇促進愈傷組織生長、胚狀體和芽的形成對組織細胞繁殖、分化的促進作用濃度100mg/L

肌醇（50－100％）影響B1的效應。椰乳：促愈傷組織和細胞培養，用量10～20%。使用注意莖尖大小。

天然復合物香蕉泥：對pH值緩沖大，用量150～

200ml/L，

應用在蘭花組培。

水解酪(乳)蛋白：濃度100-200mg/L，多用于微莖尖培養。

天然復合物馬鈴薯提取液：對pH值緩沖大，用量150-200g/L，使苗壯。其它：

荸薺汁、玉米汁、0.5％酵母提取物、麥芽汁、番茄汁。

氨基酸種類：甘氨酸、酰胺、水解酪蛋白等。功能：蛋白質組成成分植物激素1.生長素類（1）種類：

IAA(吲哚乙酸)、NAA（-萘乙酸）、IBA(吲哚丁酸)

2,4－D（2.4-二氯苯氧乙酸）（2）機理：滲入細胞并與細胞某種特定受體結合，發生特定生化反應，產生一定的生長效應。（3）作用：誘導愈傷組織和根分化，促進細胞分裂和伸長。（4）濃度：

0.05－5mg/L植物激素2.細胞分裂素（CTK）

（1）種類：6－BA（6-芐氨基嘌呤）、KT（激動素）、ZT(玉米素)（2）機理：與細胞分裂和分化有關；生長素參與核的有絲分裂但與胞質無關；分裂素則促進核分裂又促進胞質分裂，也誘導細胞擴大；解除頂端優勢，促進側芽生長。（2）作用：誘導不定芽分化和莖、苗增殖。（3）濃度：0.05－10.0mg/L植物激素3.赤霉素（GAs）

（1）種類：GA3(赤霉素)（2）作用：促莖伸長，促胚發育成植株；打破休眠；一般在器官形成后加入。注意：不耐熱。

WTripening-inhibitor(rin)西紅柿的RIN基因突變導致果實不能成熟

便于長距離運輸和延長貨架期Firstgeneticallywholefoodinfoodsupply(1994):FlavrSavr'tomato(U.S.A)“麗春”硬度較對照增加7%，儲藏特性明顯優于對照，在28-32度夏季自然條件下存放40天。多聚半乳糖醛酸酶基因的抑制表達

我國的轉基因番茄百日鮮---華中農大利用基因工程技術構建反義ACC氧化酶（或者稱為乙烯形成酶EFE）基因載體，通過農桿菌介導轉化，獲得轉基因番茄植株果實耐貯藏，果實在25℃溫度下，可貯藏40－50天，較對照延長貯藏期20－30天西紅柿果實成熟的分子調控模式控制果實形狀的關鍵基因位點-fs8.1果實由傳統的橢球形變為近長方體形，便于機器收割培養體支持材料1.瓊脂(1)用量6－10g/L(2)種類瓊脂粉瓊脂條(3)作用固化作用注意：瓊脂使用有優缺點；新買應試凝固力。2.其它

玻璃纖維濾紙橋海綿等輔助性物質抗生素抗氧化物活性炭抗生素鏈霉素青霉素慶大霉素功能防止外植體內生菌造成的污染。種類青霉素鏈霉素土霉素四環素氯霉素利福平卡那霉素慶大霉素等用量

5－20mg/L注意抗生素對組織生長有抑制作用，使用要慎重。

抗氧化物2.用量：50－200mg/L，3.作用：防止氧化4.注意：可用抗氧化劑洗滌外植體傷口表面。1.常用抗氧化劑：半胱氨酸、VC

活性炭1.作用：

吸附作用；莖尖初代培養可防褐化；促進新梢增殖（濃度0.1-0.2%）；促進生根；防止組培苗玻璃化（濃度0.3%）；有利于胚胎培養。2.常用濃度：0.5－10g/L3.注意：活性炭具副作用。植物組織培養常用培養基成分培養基（單位：mg／Ｌ）

成分WhiteHellerMSERB5NitschN6

無機物NH4NO3

－－16501200－720－KNO380---190019002527.59502830CaCL2.2H2O---75440440150---166CaCL2---------------166---MgSO4.7H2O750250370370246.5185185KH2PO4------170340---68400(NH4)2SO4------------134---463Ca(NO3)2.4H2O300------------------NaNO3---600---------------Na2SO4200------------------NaH2PO4.H2O19125------150------KCL65750---------------KI0.750.010.83---0.75---0.8WhiteHellerMSERB5NitschN6H3BO31.516.20.633101.6MnSO4.4H2O50.122.32.23---254.4MnSO4.H2O--------10----ZnSO4.7H2O318.6--2101.5Zn.Na2.EDTA------15------Na2MoO4.2H2O----0.250.0250.250.25--MoO30.001------------

CuSO4.5H2O0.010.030.0250.00250.0250.025--CoCL2.6H2O----0.0250.00250.025----ALCL3--0.03----------NiCL2.6H2O--0.03----------FeCL3.6H2O--1----------Fe2(SO4)32.5------------FeSO4.7H2O----27.827.8--27.827.8Na2.EDTA>2H2O----37.337.3--37.337.3NaFe.EDTA--------28----

有機物WhiteHellerMSERB5NitschN6

肌醇----100--100100--

煙酸（B3）0.05－0.50.5150.5B60.01－0.50.510.50.5B10.01－0.10.5100.51

甘氨酸3－22－22

葉酸－－－－－0.5－

生物素－－－－－0.05－

蔗糖2％－3％4％2％2%5%細胞分裂素與生長素對器官或愈傷組織的影響復習思考題：比較固體培養基和液體培養基的優缺點配制MS培養基時，瓊脂和蔗糖的加入量一般為多少？培養基的成分包括哪幾類？各有何作用？在培養基成分中什么決定著外植體發育方向？抗生素的作用是什么？？

第二節最佳組培方案的篩選組培方案篩選步驟：文獻檢索預備試驗參觀咨詢最佳組培方案篩選正交試驗文獻檢索

◆植物的學名、品種名、商品名◆此種植物組培的相關報道◆重點收集分析的技術信息收集、分析的技術信息◆外植體取樣時間與外植體類型◆誘導、繼代、生根培養基配方◆培養條件（溫度、濕度、pH值等）◆移栽馴化條件及基質配比預備試驗

針對某些關鍵因素簡單擬定試驗方案，粗略判斷某因素是否有影響及影響程度、劑量的大致范圍。觀察。。。L16(45)正交表

正交試驗L16

(45)正交表正交表的代號試驗方案形成的處理數試驗因子數（列號數）試驗因子的作用劑量水平數（可容納的水平數）正交試驗

L16(45)誘導蘋果生根正交試驗結果L4(23