標準解讀

《GB/T 38133-2019 轉基因苜蓿實時熒光PCR檢測方法》是一項國家標準，專門針對轉基因苜蓿的檢測制定。該標準規定了使用實時熒光定量聚合酶鏈反應（Real-time PCR）技術來定性和定量分析轉基因苜蓿的方法。它適用于轉基因苜蓿及其制品中特定目標序列的存在與否及含量測定。

根據此標準，首先需要準備樣品DNA提取，采用適合于植物材料的標準程序從待測樣本中分離出高質量的DNA。隨后，通過設計特異性引物和探針來進行目標序列的擴增與識別。這些引物和探針應能夠準確地靶向所關注的轉基因成分，并且具有高度的特異性和靈敏度以確保結果的準確性。

在實際操作過程中，將含有目標DNA片段的樣品加入到含有適當濃度的dNTPs、Taq DNA聚合酶等反應體系中，在熱循環儀上按照設定好的溫度曲線進行多次循環擴增。每次循環后都會產生新的雙鏈DNA分子，從而實現目標序列的數量級增長。同時，由于采用了熒光標記技術，可以在每次循環結束時通過監測熒光信號強度變化來間接反映產物累積情況，進而實現對起始模板量的精確定量。

整個過程還需要設立陽性對照、陰性對照以及內參基因等多個控制組別，以確保實驗的有效性和可靠性。此外，對于不同批次之間的結果比較，還需注意標準化處理，比如采用相同的標準品作為參考物質，保證數據間的一致性和可比性。

該標準還詳細列出了實驗所需的具體條件參數設置、儀器設備要求以及質量控制措施等內容，為實驗室開展相關檢測工作提供了全面指導。


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....

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  • 2019-10-18 頒布
  • 2019-10-18 實施
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GB/T 38133-2019轉基因苜蓿實時熒光PCR檢測方法_第1頁
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文檔簡介

ICS07080

A40.

中華人民共和國國家標準

GB/T38133—2019

轉基因苜蓿實時熒光PCR檢測方法

Geneticallymodifiedalfalfadetectionmethodbyreal-timePCR

2019-10-18發布2019-10-18實施

國家市場監督管理總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T38133—2019

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國生化檢測標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC387)。

本標準起草單位中國檢驗檢疫科學研究院廣州海關技術中心廣西出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫

:、、

技術中心遼寧出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心

、。

本標準主要起草人付偉朱鵬宇劉津魏霜杜智欣王晨光朱水芳黃文勝鄭秋月曹際娟

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T38133—2019

轉基因苜蓿實時熒光PCR檢測方法

1范圍

本標準規定了苜蓿轉基因成分的實時熒光聚合酶鏈式反應定性檢測方法

(PCR)。

本標準適用于種子飼料中的轉基因苜蓿以及品系的實時熒光方法檢測

、J101、J163KK179PCR。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

轉基因產品檢測通用要求和定義

GB/T19495.1

轉基因產品檢測實驗室技術要求

GB/T19495.2

轉基因產品檢測核酸提取純化方法

GB/T19495.3

轉基因產品檢測抽樣和制樣方法

GB/T19495.7

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

31

.

ACC基因acetylCoAcarboxylase

編碼乙酰輔酶羧化酶的基因

A。

注在本標準中作為苜蓿的內標準基因

:。

32

.

18S核糖體RNA18SrRNA

編碼真核生物核糖體的基因

18SRNA。

注1在本標準中作為苜蓿的內標準基因

:。

注2實際檢測中和選擇一種使用即可

:,3.13.2。

33

.

FMV35S啟動子35SpromoterfromamodifiedFigwortmosaicvirus

編碼玄參花葉病毒的啟動子的基因

35S。

注在本標準中作為轉基因苜蓿和的啟動子

:J101J163。

34

.

E9終止子3'terminationregionfrompearibulose15-bisphosphatecarboxylase

,

來源于源自豌豆核酮糖二磷酸羧化酶小亞基RbcSE9基因的非翻譯區存在于轉基因苜

-1,5-()3',

蓿與品系中

J101J163。

35

.

CP4-EPSPS基因5-enolpyruvylshikimate-3-phosphatesynthasegene

源自AgrobacteriumCP4菌株用于編碼莽草酸途徑中的關鍵酶的基因存在于轉基因苜蓿

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