標準解讀

《GB/T 35901-2018 豬圓環病毒2型熒光PCR檢測方法》是一項國家標準，規定了用于檢測豬圓環病毒2型（PCV2）的熒光PCR方法的技術要求。該標準適用于豬只及相關樣品中PCV2核酸的定性檢測，為獸醫診斷、疾病監測及科學研究提供了科學依據和技術支持。

根據該標準，整個檢測流程包括樣本采集與處理、核酸提取、引物探針設計、反應體系構建以及結果分析等步驟。首先，在樣本采集方面，應按照規范操作獲取新鮮或冷凍保存的組織、血液或其他體液樣本，并確保在運輸和儲存過程中避免污染。其次，通過合適的商業化試劑盒或實驗室自建方案從樣本中高效純化出總DNA，以作為后續擴增模板使用。

對于關鍵的引物探針設計部分，《GB/T 35901-2018》推薦了幾組針對PCV2保守區域的高度特異性序列組合，這些序列經過驗證能夠準確識別目標病毒而不與其他常見病原交叉反應。此外，還詳細描述了如何配制含有熱啟動Taq酶、dNTPs、MgCl2等成分的標準反應混合物，以及如何設置恰當的循環條件來保證最佳擴增效率。


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....

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  • 2018-02-06 頒布
  • 2018-09-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T35901—2018

豬圓環病毒2型熒光PCR檢測方法

Real-timePCRmethodfordetectionofporcinecircovirustype2

2018-02-06發布2018-09-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T35901—2018

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農業部提出

。

本標準由全國動物衛生標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局中國農業科學院上海獸醫研究所中華

:、、

人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局中國檢驗檢疫科學研究院湖南圣湘生物科技有限公司

、、。

本標準主要起草人張強李健熊煒童光志趙和平花群義李樹清楊忠蘋李國新王巧全

:、、、、、、、、、、

王艷林穎崢蔡開妹喻正軍吳紹強林祥梅

、、、、、。

Ⅰ

GB/T35901—2018

豬圓環病毒2型熒光PCR檢測方法

1范圍

本標準規定了豬圓環病毒型熒光檢測的操作方法

2PCR。

本標準適用于豬圓環病毒型核酸檢測

2。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

豬常溫精液生產與保存技術規范

GB/T25172

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

熒光熒光聚合酶鏈式反應

PCR:(real-timepolymerasechainreaction)

Ct值每個反應管內的熒光信號量達到設定的閾值時所經歷的循環數

:(cyclethreshold)

脫氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNApolymerase)

緩沖液緩沖液

TE:Tris-EDTA(Tris-EDTAbuffer)

豬圓環病毒

PCV:(porcinecircovirus)

4儀器設備

41熒光檢測儀

.PCR。

42高速臺式冷凍離心機可控溫至離心速度可達以上

.:4℃、12000r/min。

43普通冰箱

.:2℃~8℃。

44普通冰柜以下

.:-20℃。

45超低溫冰箱可控溫至以下

.:-70℃。

46微量移液器并

.:0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL、100μL~1000μL,

配備與移液器匹配的吸頭

。

47高壓滅菌鍋

.。

5耗材

51

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