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A80..

中華人民共和國國家標準

GB/T35526—2017

化學品抗雄性性征短期篩選試驗

()

大鼠Hershberger生物檢測法

Chemicals—Ashort-termscreeninassaforantiandroenicroerties—

gy()gpp

Hershbergerbioassayinrats

2017-12-29發布2018-07-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國

國家標準

化學品抗雄性性征短期篩選試驗

()

大鼠Hershberger生物檢測法

GB/T35526—2017

*

中國標準出版社出版發行

北京市朝陽區和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區三里河北街號

16(100045)

網址

:

服務熱線

:400-168-0010

年月第一版

20181

*

書號

:155066·1-58303

版權專有侵權必究

GB/T35526—2017

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準與經濟合作與發展組織化學品測試方法大鼠生物檢測

(OECD)NO.441《Hershberger:

抗雄性性征短期篩選試驗

()》[Hershbergerbioassayinrats:Ashort-termscreeningassayfor(anti)

技術內容一致

androgenicpropertiest](2009)。

本標準由全國危險化學品管理標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC251)。

本標準起草單位中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局中國檢驗檢疫科學研究院復旦大學

:、、。

本標準主要起草人姚麗芳陳俊水蔣偉陳相陳會明張靜李蔚繆文彬趙頤晴鄭華鄔春華

:、、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T35526—2017

引言

年開始修訂并發展檢測和篩選內分泌干擾物的試驗方法上述活動之一就是發展了

1998,OECD。

大鼠生物篩選試驗方法通過在醫藥工業使用幾十年后年該方法首次被官方專

Hershberger。,1962,

業委員會作為一種雄性激素化學品的標準篩選工具年年生物篩選試驗進

。2001—2007,Hershberger

行了大量的驗證項目包括方法背景資料研究具體試驗方法匯總解剖技術的發展以及實驗室內部和

:、、

實驗室之間試驗方法可靠性和重現性的驗證研究上述驗證研究使用雄性激素參照物丙酸睪丸酮

。()、

兩種合成的雄性激素醋酸去甲雄三烯醇酮和甲基睪丸素抗雄性激素藥物氟他胺天然雄性激素合

()、()、

成抑制劑非那雄胺幾種弱抗雄性激素農藥利谷隆乙烯菌核利速克靈和和α還原酶

()、(、、p,p'-DDE)5-

抑制劑非那雄胺和兩種陰性對照物二硝基苯酚和壬基苯酚本標準是長期生物鑒定試驗和驗證

()()。

試驗的經驗總結

。

生物篩選試驗是一種使用雄性生殖系統中有關組織的短期在體篩選方法試驗始于

Hershberger。

世紀年代年代的時候增加了雄性生殖系統中的雄性激素反應肌世紀年代使用標準

2030,40。2060,

方法對多種可能的雄性激素進行了評估本標準是基于檢測去勢后的雄性大鼠體內五種雄性激素

700。

依賴組織質量改變的一種篩選方法本方法用于評估化學品類似雄性激素激動劑雄性激素拮抗劑或

。、

者還原酶抑制劑的生物活性五種雄性激素依賴組織為腹側前列腺精囊包括液體和

5α-。(VP)、(SV)(

凝固腺提肛肌球海綿體肌復合體肌成對的尿道球腺和龜頭在去勢的雄性

)、-(LABC)、(COW)(GP)。

大鼠中受雄性激素的影響上述五種組織的質量會發生相應增加同一受試動物使用雄性激素參照

,,。,

物后五種組織的質量均發生增長再使用雄性激素拮抗劑能使五種組織的質量均發生下降三個階段

,。

的驗證試驗證實生物篩選試驗的首選動物模型是去勢的青春期前的雄性大鼠

,Hershberger。

生物篩選試驗是一種雄性激素受體激動劑雄性激素拮抗劑和α還原酶抑制劑的篩

Hershberger、5-

選方法作為提供單一的內分泌機理數據的體內篩選試驗方法被包括在內分泌干擾化學品的

。OECD

測試和評估框架第級中本試驗包含在內分泌干擾物體內和體外系列試驗中用于判斷受試物是否

3。,

對內分泌系統產生潛在干擾作用從而導致人類健康和環境的危害

,。

考慮到動物福利未經去勢的剛斷奶的雄性大鼠也可以作為生物篩選的替代動物模

,Hershberger

型這種方法也通過驗證但是微量的抗雄性激素驗證研究中未經去勢的剛斷奶的雄性大鼠不能夠產

。,,

生一致的響應因此本標準中并不包括這項試驗的內容

。,。

作為雄性激素受體的配體雄性激素受體激動劑和拮抗劑可分別激活或抑制受體控制的基因轉錄

,。

此外在一些雄性激素的靶組織中某些化學品會抑制睪酮轉化為更有活性的二氫睪酮α還原酶抑制

,,(5-

劑這些物質有可能對生殖和發育產生不利影響因此需要迅速評估并評價化學品是否是雄性激素

)。。,

受體激動劑拮抗劑或α還原酶抑制劑雖然通過受體結合體外報告基因的轉錄激活效應檢測到的

、5-。、

雄性激素配體對受體的親和力與其產生危害有一定關系但并不是潛在危害的決定性因素其他因素

,。

還包括進入體內之后的代謝活化滅活靶器官中的分布情況和體內的清除情況這就需要在篩選化學

、、。

品的時候在相關的條件和暴露下進行如果化學品的吸收分布代謝清除已知則體內

。———(ADME),

的評估就相對不重要一些在雄性激素刺激下去勢的青春期前的雄性大鼠體內雄性激素依賴組織生

。,

長迅速明顯嚙齒類動物特別是大鼠廣泛用于毒性危害研究因此本試驗中使用去勢的青春期

、。,,。,,

前的雄性大鼠和五種靶組織篩選雄性激素受體激動劑拮抗劑和α還原酶抑制劑

、5-。

本標準的可信性和重現性是通過實驗室內部和實驗室間的比對驗證了的所有的雄性激

OECD。

素和雄性激素拮抗劑的操作步驟均在本標準中體現

。

雖然在檢測抗雄性激素的驗證試驗中不同實驗室使用的丙酸睪丸酮劑量有所區別分別為

,,

Ⅱ

GB/T35526—2017

或皮下注射但強抗雄性激素物質和弱抗雄性激素物質的檢測結

0.2mg/(kg·d)0.4mg/(kg·d)(),

果表示不同劑量的丙酸睪丸酮試驗結果沒有差別但是應明確丙酸睪丸酮的劑量不應該太高以免影

。,,

響弱雄激素受體拮抗劑的作用也不能太低否則即使沒有雄性激素拮抗劑的情況下雄性激素依賴組

,,,,

織也不發生質量變化

。

單個雄性激素依賴組織的生長反應并不完全是由雄性激素引起的即雄性激素激動劑之外的化合

。

物可能改變特定組織的質量然而幾個組織同時發生反應則證明雄性激素的特定反應機理例如

。,,。:

高劑量的雌激素可以增加精囊的質量但不會增加其他雄性激素依賴組織的質量抗雄性激素化學品

,。

既可以是雄性激素受體拮抗劑也可以是α還原酶抑制劑不同組織轉化成二氫睪酮不同因此α

,5-。,5-

還原酶抑制劑對不同組織具有不同的效應與雄性激素拮抗劑氟他胺相比抑制α還原酶的抗雄性

。,5-

激素非那雄胺對腹側前列腺作用更大這種差異可用于區別是由于雄性激素受體介導的反應還是α

。5-

還原酶的介導的反應此外在生物進化上雄性激素受體與類固醇激素和其他激素有關如加強類固

。,,,

醇的代謝降低血清睪酮含量也可能抑制雄性激素依賴組織的生長因此生物篩選試驗

、,,,Hershberger

的任何陽性結果均應結合雄性激素受體和雌性激素受體結合試驗轉錄活化分析等體外試驗或者檢測

、

類似雄性激素靶器官的體內試驗如雄性動物發育試驗天成年雄性動物試驗天或天重復劑

,、15、2890

量試驗進行綜合評價

。

經驗表明雄性激素比抗雄性激素更加罕見因此生物篩選試驗更廣泛應用于抗雄

,。,Hershberger

性激素的篩選然而雄性激素檢測方法可用于甾體類或類固醇類化學品或者框架文件第級或第

。,12

級試驗結果顯示具有疑似雄性激素作用的化學品的檢測類似的與抗雄性激素相關的危害可以在

。,()

第級試驗中觀察得到用于評估化學物的危害是否與內分泌有關

5,。

所有的動物相關的程序應該符合地方動物保護標準本標準中描述的動物保護和使用標準都是最

,

低標準可被地方性法規代替

,。

Ⅲ

GB/T35526—2017

化學品抗雄性性征短期篩選試驗

()

大鼠Hershberger生物檢測法

1范圍

本標準規定了化學品抗雄性性征短期篩選試驗大鼠生物檢測法的術語和定義試

()Hershberger、

驗原理試驗方法與步驟數據與報告

、、。

本標準適用于評估化學品類似雄性激素激動劑雄性激素拮抗劑或還原酶抑制劑的生物活性

、5α-。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

實驗動物環境及設施

GB14925

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

31

.

雄性激素效應androgenicity

化學品對雄性激素依賴組織的促進作用

。

32

.

抗雄性激素效應antiandrogenicity

化學品抑制哺乳動物體內丙酸睪丸酮號活性的作用

(TP,CAS57-82-5)。

33

.

劑量dose

給予受試物的量用每天單位體重動物給予受試物的質量來表示即