ICS1330011100

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A80..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T35520—2017

化學(xué)品胚胎毒性胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)

Chemicals—Embryotoxicity—Embryonicstemcelltest

2017-12-29發(fā)布2018-07-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T35520—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)危險(xiǎn)化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC251)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院中國(guó)化工經(jīng)濟(jì)技術(shù)發(fā)展中心常州進(jìn)出口工業(yè)及消費(fèi)

:、、

品安全檢測(cè)中心寧波出入境檢驗(yàn)檢疫局

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人李海山陳會(huì)明韓輝崔媛王曉兵劉君峰陳小青程艷艾文超謝文平

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T35520—2017

引言

小鼠胚胎干細(xì)胞在不同的培養(yǎng)條件下會(huì)分化為不同的胚胎組織因

(Embryonicstemcells,ES)。

此一些研究小組使用小鼠細(xì)胞進(jìn)行體外胚胎毒性試驗(yàn)等[1]比較了細(xì)胞和小鼠纖

,ES。LaschinskiES

維母細(xì)胞的細(xì)胞毒性以評(píng)估致畸物的潛在胚胎毒性等[2-3]比較了細(xì)胞的細(xì)胞毒性和分化

,。HeuerES

抑制和[4]測(cè)定了培養(yǎng)后致畸物對(duì)細(xì)胞的細(xì)胞毒性和集落形成能力的影響

。NewallBeedles7d,ES,

這適用于常規(guī)測(cè)試因?yàn)榧湫纬蛇@一終點(diǎn)可自動(dòng)化完成在所有這些試驗(yàn)中只有一些胚胎毒性物能

,。,

夠被正確分類這可能是由于在試驗(yàn)中選擇個(gè)終點(diǎn)不足以評(píng)估胚胎毒性

。ES2。

為克服上述細(xì)胞試驗(yàn)的限制等[5]確定了個(gè)不同的試驗(yàn)終點(diǎn)半數(shù)分化抑制濃度

ES,Spielmann3(、

細(xì)胞半數(shù)生長(zhǎng)抑制濃度和細(xì)胞半數(shù)生長(zhǎng)抑制濃度根據(jù)這些終點(diǎn)可導(dǎo)出個(gè)變量所得的

D33T3)。3。

個(gè)變量作為受試物分為個(gè)體內(nèi)胚胎毒性等級(jí)的依據(jù)這種方法有利于給出胚胎組織與成體組織之

33。

間對(duì)化合物細(xì)胞毒性損傷的敏感性差異事實(shí)上利用判別分析已將種受試化學(xué)品正確歸入已知的

。,16

種體內(nèi)胚胎毒性等級(jí)[5-6]這是第一個(gè)不處死妊娠動(dòng)物而獲得體外培養(yǎng)所需胚胎組織的體外胚胎毒

3。

性測(cè)試

。

在本標(biāo)準(zhǔn)中為驗(yàn)證研究制定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序克服了實(shí)驗(yàn)室中狀態(tài)維持的問(wèn)題細(xì)胞通常傾

ES,ES

向于自發(fā)分化

。

此外根據(jù)制定的性能標(biāo)準(zhǔn)歐盟替代方法驗(yàn)證中心

,,(EuropeanCentrefortheValidationofAlter-

驗(yàn)證研究表明體外數(shù)據(jù)和體內(nèi)數(shù)據(jù)之間具有較好的相關(guān)性準(zhǔn)確性

nativeMethods,ECVAM)(78%)。

據(jù)報(bào)道強(qiáng)胚胎毒性化學(xué)品的預(yù)測(cè)性極好精確度良好據(jù)報(bào)道無(wú)胚胎毒性物質(zhì)和胚胎

,(100%)、(81%)。,

毒性弱的物質(zhì)的預(yù)測(cè)性分別為和和無(wú)胚胎毒性物質(zhì)的精確度較高[7]

(72%70%)(70%)(≥65%)。

然而一個(gè)特例出現(xiàn)于強(qiáng)胚胎毒性化學(xué)品氯化甲基汞的錯(cuò)誤分類在個(gè)試驗(yàn)中的個(gè)試驗(yàn)里被

,,84,

預(yù)測(cè)為無(wú)胚胎毒性的化學(xué)品而不是強(qiáng)胚胎毒性的化學(xué)品這種誤分類出現(xiàn)的原因可能是用于建立預(yù)

,。

測(cè)模型的訓(xùn)練集未包括具有類似細(xì)胞毒性模式的化學(xué)品[6]

。

Ⅱ

GB/T35520—2017

化學(xué)品胚胎毒性胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化學(xué)品胚胎毒性胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)的術(shù)語(yǔ)和定義試驗(yàn)原理試驗(yàn)方法質(zhì)量控制和結(jié)

、、、

果評(píng)價(jià)

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于應(yīng)用胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)測(cè)試化學(xué)品的胚胎毒性

。

2術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

21

.

半數(shù)分化抑制濃度medianinhibitionofdifferentiation

ID50

化學(xué)品抑制細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞的濃度

50%ES。

22

.

D3細(xì)胞半數(shù)生長(zhǎng)抑制濃度medianinhibitionofgrowthofD3

IC50D3

化學(xué)品抑制細(xì)胞系生長(zhǎng)和活性的濃度

50%ESD3。

23

.

3T3細(xì)胞半數(shù)生長(zhǎng)抑制濃度medianinhibitionofgrowthof3T3

IC503T3

化學(xué)品抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和活性的濃度

50%3T3。

3試驗(yàn)原理

胚胎毒性測(cè)試或用妊娠動(dòng)物進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)或用培養(yǎng)的胚胎以及取自妊娠動(dòng)物的胚胎組織細(xì)胞進(jìn)

,、

行體外試驗(yàn)不管體內(nèi)還是體外測(cè)試都得處死妊娠動(dòng)物[8]利用胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)無(wú)限增殖與分

。,。

化的潛能提出了一種利用小鼠永生化細(xì)胞系的體外胚胎毒性測(cè)試即胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)[9]

,,。

本試驗(yàn)是基于胚胎毒性作用中最重要的指標(biāo)即受試物對(duì)胚胎組織和成體組織的毒性損傷存在敏

,

感性差異這種差異與胚胎分化抑制密切相關(guān)使用兩個(gè)永生化小鼠細(xì)胞系細(xì)胞和纖維母細(xì)

,。,ES(D3)

胞細(xì)胞分別表示胚胎組織和成體組織只有在添加小鼠白血病抑制因子的培養(yǎng)條件下