標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 34745-2017 豬圓環(huán)病毒2型 病毒SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在規(guī)范豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了使用SYBR Green Ⅰ作為熒光染料進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法來(lái)檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型的具體步驟和技術(shù)要求。

首先，在準(zhǔn)備階段，標(biāo)準(zhǔn)明確了所需材料與試劑清單，包括但不限于引物、dNTPs混合物、Taq酶、SYBR Green Ⅰ染料以及用于提取DNA的標(biāo)準(zhǔn)試劑盒等，并強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)前所有設(shè)備應(yīng)處于良好工作狀態(tài)的重要性。

接著，對(duì)于樣品處理部分，描述了從采集到核酸純化的整個(gè)過(guò)程。這其中包括了如何正確地采取生物樣本，確保其質(zhì)量不受污染；以及采用何種方法或工具對(duì)收集來(lái)的組織液或其他類(lèi)型標(biāo)本中的總DNA進(jìn)行有效分離和純化。

在反應(yīng)體系構(gòu)建環(huán)節(jié)中，則具體介紹了如何配制適合于SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR反應(yīng)的最佳條件下的混合溶液，比如各組分的比例調(diào)整及最終體積設(shè)定等細(xì)節(jié)內(nèi)容。

此外，還詳盡說(shuō)明了運(yùn)行程序設(shè)置，即根據(jù)所使用的儀器型號(hào)選擇合適的溫度循環(huán)參數(shù)，以保證擴(kuò)增效率最大化同時(shí)減少非特異性產(chǎn)物生成的可能性。同時(shí)也指出了數(shù)據(jù)分析時(shí)需要注意的關(guān)鍵點(diǎn)，如Ct值計(jì)算原則、溶解曲線分析技巧等，幫助實(shí)驗(yàn)者準(zhǔn)確判斷陽(yáng)性結(jié)果并排除假陽(yáng)性干擾因素。


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  • 正在執(zhí)行有效
  • 2017-11-01 頒布
  • 2018-05-01 實(shí)施
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GB/T 34745-2017豬圓環(huán)病毒2型病毒SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T34745—2017

豬圓環(huán)病毒2型病毒SYBRGreenⅠ實(shí)時(shí)

熒光定量PCR檢測(cè)方法

Porcinecircovirustype2—MethodofdetectingvirusbySYBR

GreenⅠreal-timePCR

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T34745—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位河南農(nóng)業(yè)大學(xué)中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人魏戰(zhàn)勇鄭蘭蘭邵衛(wèi)星胡慧陳紅英王亞賓王學(xué)兵崔保安寇亞楠

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T34745—2017

豬圓環(huán)病毒2型病毒SYBRGreenⅠ實(shí)時(shí)

熒光定量PCR檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)豬圓環(huán)病毒型的技術(shù)要求

SYBRGreenⅠPCR2。

本標(biāo)準(zhǔn)用于檢測(cè)豬圓環(huán)病毒型核酸適用于臨床樣品中豬圓環(huán)病毒型的快速檢測(cè)

2,2。

2規(guī)范性引用文件

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。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

值循環(huán)閾值

Ct:(CycleThreshold)

脫氧核糖核酸

DNA:(DeoxyribonucleicAcid)

乙二胺四乙酸

EDTA:(EthylenediaminetetraaceticAcid)

磷酸鹽緩沖溶液

PBS:(PhosphateBufferSaline)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(PolymeraseChainReaction)

豬圓環(huán)病毒型

PCV2:2(PorcineCircovirusType2)

仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征

PMWS:(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome)

酶聚合酶

Taq:TaqDNA(TaqDNAPolymerase)

t值解鏈溫度

m:(MeltingTemperature)

4試劑

除非另有規(guī)定僅使用分析純?cè)噭┧性噭┚脽o(wú)酶污染的容器用水處理后高壓

,。RNA(DEPC

滅菌分裝

)。

41蛋白酶配制見(jiàn)附錄保存

.K(A):-20℃。

42裂解緩沖液配制見(jiàn)附錄保存

.(A):4℃。

43異硫氰酸胍裂解液配制見(jiàn)附錄保存

.(A):4℃。

44平衡酚配制見(jiàn)附錄保存

.(A):4℃。

45酚氯仿異戊醇混合液配制見(jiàn)附錄保存

.--(25∶24∶1)(A):4℃。

46氯仿異戊醇配制見(jiàn)附錄保存

.-(24∶1)(A):4℃。

47氯仿常溫保存

.:。

48異丙醇常溫保存

.:。

49乙醇用新開(kāi)啟的無(wú)水乙醇和滅菌去離子水配制符合

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