第四章

藥典中常見定量分析方法概述

藥物的定量分析是指準確測定藥品有效成分或指標性成分的含量。

它是評價藥品質量、判斷藥物優劣的重要手段。

對藥物進行定量分析時，應按藥品質量標準進行測定。藥物定量分析可選用化學分析法和儀器分析法。

化學測定法儀器測定法重量分析法容量分析法：滴定法，準確，RSD≤0.2%，專屬性差，適用于化學原料藥光學分析法：紫外-可見分光光度法最常用，靈敏度高，準確度高色譜分析法：高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）最多電化學分析法滴定分析法紫外可見分光光度法色譜分析法分析方法的驗證定量分析有關計算第一節

滴定分析法一、基本原理及特點

滴定分析法是將一種已知準確濃度的溶液（滴定液）滴加到待測物質的溶液中，直到化學反應按計量關系完全作用為止，然后根據所用滴定液的濃度和體積計算出待測物質含量的一種分析方法，又稱“容量分析法”。一、基本原理及特點

沉淀、配位滴定非水滴定氧化還原酸堿滴定原料藥純度達到98.5%以上時首選容量分析法二、應用與實例

（一）酸堿滴定法1.直接滴定法適用范圍：C·Ka≥10-8的弱酸、C·Kb≥10-8的弱堿終點：指示劑變色2.剩余滴定法適用范圍：藥物難溶于水或有其他原因不宜采用直接滴定法二、應用與實例

（一）酸堿滴定法實例一布洛芬含量測定—直接滴定法溶劑：中性乙醇（對酚酞顯中性）指示劑：酚酞滴定液：氫氧化鈉（0.1mol/L）滴定度（T）：每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當于20.63mg的C13H18O2羧基酸性二、應用與實例

（一）酸堿滴定法實例二氯貝丁酯含量測定—剩余滴定法溶劑：中性乙醇水解溶液：定過量氫氧化鈉溶液（0.5mol/L）指示劑：酚酞滴定液：鹽酸滴定液（0.5mol/L）滴定度：每1ml氫氧化鉀（鈉）滴定液（0.5mol/L）相當于121.4mg的C12H15ClO3先水解再回滴二、應用與實例

（一）酸堿滴定法實例三丙戊酸鈉含量測定—直接滴定，電位滴定法溶劑：水+乙醚指示終點：電位法滴定液：鹽酸滴定液（0.1mol/L）滴定度：每lml鹽酸滴定液（0.1mol/L）相當于16.62mg的C8H15NaO2二、應用與實例

（二）非水溶液滴定法溶劑：非水介質非水堿量法：有機堿及其氫鹵酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽或有機酸鹽、以及有機酸堿金屬鹽類滴定液：高氯酸滴定液（0.1mol/L）溶劑：冰醋酸二、應用與實例

（二）非水溶液滴定法1.有機弱堿Kb≥10-10：冰醋酸介質Kb＜10-10：冰醋酸-醋酐的混合溶液為介質，且隨著醋酐用量的增加，滴定范圍顯著增大2.有機酸堿金屬鹽的滴定：高氯酸滴定液直接滴定二、應用與實例

（二）非水溶液滴定法3.有機堿的氫鹵酸鹽：3～5ml醋酸汞冰醋酸溶液4.有機堿的硫酸鹽：只能滴定至HSO4-的程度5.有機堿的硝酸鹽：電位法指示終點6.有機堿的有機酸鹽：冰醋酸或冰醋酸-醋酐的混合溶劑，結晶紫為指示劑，高氯酸為滴定液二、應用與實例

（二）非水溶液滴定法實例鹽酸可樂定含量測定溶劑：冰醋酸+醋酸汞滴定液：高氯酸滴定液（0.1mol/L）指示劑：結晶紫滴定終點：藍綠色滴定度：每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于26.66mg的C9H9Cl2N3?HCl。有機堿氫鹵酸鹽二、應用與實例

（三）氧化還原滴定法1.碘量法（1）基本原理滴定液：碘滴定液直接碘量法剩余碘量法置換碘量法指示劑：淀粉定過量碘滴定液滴定液：硫代硫酸鈉用于強氧化劑測定KI+硫代硫酸鈉碘量法二、應用與實例

（三）氧化還原滴定法1.碘量法（2）應用

實例一安乃近片含量測定—直接碘量法溶劑：乙醇與0.01mol/L鹽酸溶液滴定液：碘滴定液（0.05mol/L）終點：淺黃色（或帶紫色）在30秒鐘內不褪滴定度：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當于17.57mg的C13H16N3NaO4S?H2O二、應用與實例

（三）氧化還原滴定法1.碘量法（2）應用

實例二右旋糖酐20葡萄糖注射液中葡萄糖的含量測定—剩余碘量法溶劑：定過量（0.05mol/L）碘滴定液滴定液：硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）指示劑：淀粉，近終點加入，滴定至藍色消失滴定度：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當于9.909mg的C6H12O6?H2O二、應用與實例

（三）氧化還原滴定法2.亞硝酸鈉滴定法（1）基本原理二、應用與實例

（三）氧化還原滴定法2.亞硝酸鈉滴定法（2）應用加入過量的鹽酸在室溫條件（10～30℃）下滴定滴定時加入溴化鉀作為催化劑二、應用與實例

（三）氧化還原滴定法2.亞硝酸鈉滴定法（2）應用滴定的方式：一次性加入大部分指示終點的方法：永停滴定法二、應用與實例

（三）氧化還原滴定法2.亞硝酸鈉滴定法（2）應用實例鹽酸克侖特羅含量測定溶劑：鹽酸溶液（1→2）滴定液：亞硝酸鈉滴定液（0.05mol/L）滴定度：每lml亞硝酸鈉滴定液（0.05mol/L）相當于15.68mg的C12H18Cl2N2O·HCI芳香第一胺第二節

紫外-可見分光光度法分光光度法是通過測定物質在特定波長處或一定波長范圍內的吸光度或發光強度，對該物質進行定性和定量分析的方法朗伯-比爾定律：單色光輻射穿過被測物質溶液時，在一定的濃度范圍內被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度成正比一、基本原理

朗伯-比爾定律一、基本原理

百分吸收系數：在一定波長下，溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm時的吸光度數值為100ml溶液中所含被測物質的重量（按干燥品或無水物計算）（g）液層厚度，cm含有共軛體系、芳香環等發色基團，均可在紫外區（200～400nm）或可見光區（400～760nm）產生吸收藥物在可見光區若無吸收，但在一定條件下加入顯色試劑或經過處理顯色后，能對可見光產生吸收。二、應用

空白對照：配制供試品溶液的同批溶劑檢測波長：最大吸收波長吸光度數值：0.3~0.7123二、應用

（一）測定方法1.對照品比較法二、應用為供試品溶液的濃度為供試品溶液的吸光度為對照品溶液的濃度為對照品溶液的吸光度2.吸收系數法在規定的波長處測定其吸光度，以該品種在規定條件下的吸收系數計算含量3.比色法供試品本身在紫外-可見區沒有強吸收，或在紫外區雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當的顯色劑顯色后測定二、應用4.標準曲線法以吸光度與相應的濃度繪制標準曲線，再根據供試品的吸光度在標準曲線上查得其相應的濃度，并求出其含量二、應用（二）儀器的校正和檢定二、應用光源單色器吸收池檢測器（二）儀器的校正和檢定1.波長：常用汞燈中的較強譜線、氘燈的譜線、鈥玻璃尖銳吸收峰、高氯酸鈥溶液2.吸光度的準確度：重鉻酸鉀的硫酸溶液二、應用（二）儀器的校正和檢定3.雜散光的檢查二、應用（三）對溶劑的要求含有雜原子的有機溶劑，使用范圍不能小于截止使用波長二、應用三、實例（一）奧沙西泮片含量測定20片，精密稱定研細片粉，W200ml量瓶150ml甲醇奧沙西泮溶解定容，搖勻過濾5ml續濾液100ml量瓶乙醇稀釋，定容UV檢測波長：229nm吸收系數：1252吸收系數法三、實例（二）呋喃唑酮含量測定約20mg，精密稱定研細250ml量瓶+40ml二甲基甲酰紫溶解定容精密量取10ml100ml量瓶水定容對照品：呋喃唑酮檢測波長：367nm對照品比較第三節

色譜分析法在《中國藥典》現行版中，使用的色譜法有高效液相色譜法、氣相色譜法、離子色譜、凝膠色譜等

一、高效液相色譜法（一）基本原理一、高效液相色譜法（二）應用1.對儀器的一般要求(1)色譜柱反相：十八烷基硅烷鍵合硅膠正相：硅膠離子交換：離子交換填充劑分子排阻：凝膠或高分子多孔微球C18硅膠表面填料直徑15nm以下＜2000＞2000樣品分子量一、高效液相色譜法填料直徑30nm以上溫度要求：≤40℃流動相pH：2~8一、高效液相色譜法（二）應用1.對儀器的一般要求(2)檢測器二極管陣列檢測器熒光檢測器蒸發光散射檢測器123示差折光檢測器電化學檢測器質譜檢測器456一、高效液相色譜法（二）應用1.對儀器的一般要求(3)流動相甲醇-水乙腈-水盡可能少用含有緩沖液的流動相一、高效液相色譜法（二）應用2.高效液相色譜系統適用性試驗（1）色譜柱的理論板數（n）

一、高效液相色譜法（二）應用2.高效液相色譜系統適用性試驗（2）分離度（R）

除另有規定外，定量分析時分離度應大于1.5一、高效液相色譜法（二）應用2.高效液相色譜系統適用性試驗（3）重復性（R）

連續進樣，峰面積，RSD≯2.0%一、高效液相色譜法（二）應用2.高效液相色譜系統適用性試驗（4）拖尾因子（T）T：0.95～1.05一、高效液相色譜法（二）應用3.測定方法（1）內標法對照品+內標對照品峰AR

內標物峰As

6min8min一、高效液相色譜法（二）應用3.測定方法（1）內標法供試品+內標供試品峰Ax內標物峰As

6min8min一、高效液相色譜法（二）應用3.測定方法（2）外標法R：對照品X：供試品一、高效液相色譜法（二）應用3.測定方法（3）加校正因子的主成分自身對照法（4）不加校正因子的主成分自身對照法（5）面積歸一化法一、高效液相色譜法（三）實例一、丙酸氯倍他索乳膏含量測定色譜條件與系統適用性試驗：固定相：C18

流動相：甲醇-水（65∶35）檢測波長：240nm理論板數：不低于2000分離度：丙酸氯倍他索峰與內標物質峰符合要求一、高效液相色譜法（三）實例一、丙酸氯倍他索乳膏含量測定內標溶液：0.15mg/ml醋酸氟氫松測定法：供試+內標，對照+內標，按峰面積計算方法：內標法一、高效液相色譜法（三）實例二、法莫替丁片含量測定色譜條件與系統適用性試驗：固定相：C18

流動相：庚烷磺酸鈉-乙腈-甲醇（78:19:3）檢測波長：254nm理論板數：不低于1400分離度：法莫替丁與相鄰雜質峰符合要求一、高效液相色譜法（三）實例二、法莫替丁片含量測定供試品：對照品：法莫替丁測定法：按峰面積計算方法：外標法二、氣相色譜法（一）基本原理二、氣相色譜法（二）應用1.對儀器的一般要求（1）載氣源：氦氣、氮氣、氫氣，純度99.99%以上（2）進樣部分：采用溶液直接進樣或頂空進樣（3）色譜柱：填充柱或毛細管柱（4）柱溫箱：控溫精度應在±1℃，且溫度波動小于每小時0.1℃二、氣相色譜法（二）應用1.對儀器的一般要求（5）檢測器：火焰離子化檢測器（FID）、熱導檢測器（TCD）、氮磷檢測器（NPD）、電子捕獲檢測器（ECD）、質譜檢測器（MS）等

（6）數據處理系統：記錄儀、積分儀以及計算機工作站等

二、氣相色譜法（二）應用2.系統適用性試驗3.測定法（1）內標法（2）外標法（3）面積歸一化法（4）標準溶液加入法測定供試品中某個雜質或主成分含量

（三）實例各種制劑中乙醇的含量測定色譜條件與系統適用性試驗載體：直徑為0.25～0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球柱溫：120～150℃理論板數：按正丙醇峰計算應不低于700分離度：乙醇峰與正丙醇的分離度應大于2.0二、氣相色譜法（三）實例各種制劑中乙醇的含量測定校正因子：無水乙醇+正丙醇（內標），計算校正因子，RSD≤2.0%測定法：供試品+正丙醇方法：內標法二、氣相色譜法三、液相-質譜聯用技術及其應用簡介液相-質譜聯用技術（LC-MS）是20世紀90年代發展起來的綜合分析技術，先分離，再按質荷比（m/z）將離子分離、檢測的分析方法，LC的高分離效能與MS的高靈敏度、高選擇性使之成為目前發展最迅速的分析手段之一。千里光中毒性成分阿多尼弗林堿的檢查色譜、質譜條件與系統適用性試驗固定相：C18流動相：乙腈-0.5%甲酸溶液（7:93)

檢測器：ESI正離子模式下，質荷比（m/z)為366離子進行檢測理論板數：按阿多尼弗林堿峰計算應不低于8000三、液相-質譜聯用技術及其應用簡介千里光中毒性成分阿多尼弗林堿的檢查校正因子：0.2μg/ml野百合堿對照品為內標，0.1μg/ml阿多尼弗林堿對照品為對照，計算校正因子測定法：供試品+內標溶液本品按干燥品計算，含阿多尼弗林堿（C18H23NO7)不得過0.004%。三、液相-質譜聯用技術及其應用簡介第四節

分析方法的驗證驗證的目的：證明采用的方法適合于相應檢測要求

需驗證的分析項目：鑒別試驗、雜質檢查、有效成分含量測定藥品溶出度、釋放度

指標:精密度，準確度，檢測限，定量限，選擇性，線性與范圍，耐用性一、分析方法驗證的內容（一）準確度用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度表示方法：用回收率（%）表示在規定范圍內，至少用9個測定結果進行評價一、分析方法驗證的內容（一）準確度1.含量測定方法的準確度2.雜質定量測定的準確度3．數據要求

在規定范圍內，至少用9個測定結果進行評價。設計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液一、分析方法驗證的內容（二）精密度同一樣品多次測量值之間相互接近的程度表示方法：偏差、標準偏差（SD）或相對標準偏差（RSD）1.重復性：同一實驗室，同一人多次測定的精密度2.中間精密度：同一實驗室，不同人，不同儀器測定的精密度3.重現性：不同實驗室，不同人測定的精密度一、分析方法驗證的內容（三）專屬性有其他成分（雜質、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性（四）檢測限指試樣中被測物能被檢測出的最低量信噪比法(S:N=3:1)一、分析方法驗證的內容（五）定量限指試樣中被測物能被定量測定的最低量，常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時相應濃度或注入儀器的量確定定量限。（六）線性待測物濃度與響應值成線性關系的濃度范圍線性關系：Y=a+bx（r=0.9999)線性程度：相關系數一、分析方法驗證的內容（七）范圍指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區間。（八）耐用性指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度一、分析方法驗證的內容檢驗項目和驗證內容①已有重現性驗證，不需驗證中間精密度②如一種方法不夠專屬，可用其他分析方法予以補充③視具體情況予以驗證第五節

定量分析有關計算原料藥的含量用百分含量表示：制劑的含量則用標示量的百分含量表示：片劑表示量百分含量：注射劑劑表示量百分含量：其他劑型如何表示？（一）滴定分析法（一）滴定分析法呋塞米原料藥含量測定取本品0.4988g（干燥品），加乙醇30ml，微溫使溶解，放冷，加甲酚紅指示液4滴與麝香草酚藍指示液1滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）滴定至溶液顯紫紅色，消耗氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）14.86ml；并將滴定的結果用空白試驗校正，消耗氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）0.05ml。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當于33.07mg的呋塞米。按干燥品計算，含C12H11ClN2O5S不得少于99.0%。呋塞米原料藥含量測定（一）滴定分析法由于98.48%＜99.0%，故本品含量不合格（一）滴定分析法司可巴比妥鈉原料藥含量測定取本品0.1041g（干燥品），置250ml碘瓶中，加水10m1，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5m1，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10m1，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續滴定至藍色消失，并將滴定結果用空白試驗校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相當于13.01mg的C12H17N2NaO3。按干燥品計算，含C12H17N2NaO3不得少于98.5%。已知樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）17.20ml，空白實驗消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）25.02ml（一）滴定分析法司可巴比妥鈉原料藥含量測定測定結果大于98.5%，故本品含量合格（一）滴定分析法甲苯磺丁脲片劑（標示量0.5g）的含量測定取甲苯磺丁脲10片，精密稱定為5.948g，研細，精密稱取片粉0.5996g，加中性乙醇25ml，微熱，使其溶解，放冷，加酚酞指示劑3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1008mol/L）滴定至粉紅色，消耗量18.47ml。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當于27.04mg的甲苯磺丁脲。《中國藥典》現行版規定本品含甲苯磺丁脲應為標示量的95.0%～105%。試計算本品的標示量百分含量，并判斷是否符合規定。（一）滴定分析法甲苯磺丁脲片劑（標示量0.5g）的含量測定本品含量合格(二）分光光度法(二）分光光度法對乙酰氨基酚原料藥含量測定精密稱取對乙酰氨基酚0.0411g，置250ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液50ml，加水至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液10ml，加水至刻度，搖勻。依照分光光度法，在257nm波長處測得吸收度為0.582。按C8H9NO2的百分吸收系數為715計算對乙酰氨基酚的百分含量(二）分光光度法對乙酰氨基酚原料藥含量測定(二）分光光度法甲氧芐啶注射液（規格2ml：0.1g）含量測定精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖勻。照紫外-可見分光光度法，在271nm波長處測定吸光度為0.420。另取甲氧芐啶對照品適量0.05134g，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖勻。在271nm波長處測