標準解讀

《GB/T 28067-2011 甘蔗黃葉病毒實時熒光RT-PCR檢測方法》是一項國家標準，規定了采用實時熒光RT-PCR技術對甘蔗黃葉病毒進行檢測的具體方法。該標準適用于甘蔗及其相關材料中甘蔗黃葉病毒的定性檢測。

標準詳細描述了實驗所需的主要儀器設備和試劑，包括但不限于核酸提取試劑盒、逆轉錄酶、Taq DNA聚合酶等，并明確了這些試劑的選擇要求與質量控制標準。對于樣本處理，給出了詳細的步驟指導，從樣品采集到RNA提取再到cDNA合成，每一步都做了具體說明，以確保實驗結果的一致性和準確性。

在引物設計方面，《GB/T 28067-2011》提供了針對甘蔗黃葉病毒特定序列區域設計引物的原則及推薦使用的引物序列。此外，還介紹了如何設置反應體系、選擇合適的擴增條件以及如何通過熔解曲線分析來判斷陽性或陰性結果的方法。

標準中特別強調了質量控制的重要性，不僅包括內部對照（如無模板對照、陽性對照）的使用，還提出了對外部質控品的要求，以保證整個檢測過程的有效性和可靠性。同時，對于可能出現的各種問題，比如假陽性或假陰性結果的原因分析及解決策略也有所涉及。


如需獲取更多詳盡信息，請直接參考下方經官方授權發布的權威標準文檔。

....

查看全部

  • 現行
  • 正在執行有效
  • 2011-12-30 頒布
  • 2012-06-01 實施
?正版授權
GB/T 28067-2011甘蔗黃葉病毒實時熒光RT-PCR檢測方法_第1頁
GB/T 28067-2011甘蔗黃葉病毒實時熒光RT-PCR檢測方法_第2頁
GB/T 28067-2011甘蔗黃葉病毒實時熒光RT-PCR檢測方法_第3頁
免費預覽已結束，剩余9頁可下載查看

下載本文檔

GB/T 28067-2011甘蔗黃葉病毒實時熒光RT-PCR檢測方法-免費下載試讀頁

文檔簡介

ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標準

GB/T28067—2011

甘蔗黃葉病毒實時熒光RT-PCR檢測方法

Detectionofsugarcaneyellowleafvirususingthereal-timeRT-PCR

2011-12-30發布2012-06-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T28067—2011

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國植物檢疫標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標準起草單位福建農林大學甘蔗綜合研究所農業部甘蔗及制品質量監督檢驗測試中心農業

:、、

部甘蔗遺傳改良重點開放實驗室

。

本標準主要起草人高三基陳平華陳如凱郭晉隆張華許莉萍王恒波陳由強

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T28067—2011

甘蔗黃葉病毒實時熒光RT-PCR檢測方法

1范圍

本標準規定了甘蔗黃葉病毒實時熒光檢測方法所需的儀器與試劑樣品的采集與前處

RT-PCR、

理操作方法以及結果判定

、。

本標準適用于甘蔗植株種苗及種莖中甘蔗黃葉病毒的快速檢測診斷

、、。

2術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

21

.

反轉錄reversetranscription

以為模板合成的過程也稱逆轉錄

RNADNA,。

22

.

實時熒光RT-PCRrealtimeRT-PCR

實時熒光反轉錄聚合酶鏈式反應

-。

23

.

Ct值cycletime

每個反應管內的熒光信號達到設定的閾值時所經歷的循環數

。

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

核糖核酸

RNA:

Taq酶Taq聚合酶

:DNA

種脫氧核苷三磷酸混合液

dNTPs:45′-

酶

RNase:RNA

莫洛尼鼠白血病病毒Moloneymurineleukeminvirus反轉錄酶

M-MLV:()

羧基熒光素

FAM:6-

羧基四甲基羅丹明

TAMRA:6-

4方法原理

在反轉錄酶作用下將反轉錄成再以為模板利用Taq酶進行實時熒光擴

RNAcDNA,cDNAPCR

增反應采用Taq探針方法在比對甘蔗黃葉病毒外殼蛋白基因的基礎上設計一對僅在甘蔗黃

(Man)。,

葉病毒外殼蛋白基因間保守的特異性引物和一條特異性的熒光雙標記探針探針的端標記熒

。5’FAM

光素為報告熒光基團端標記熒光素為淬滅熒光基團結合部位位于目的擴增片段內部

,3’TAMRA,。

當完整的探針與目的序列配對時熒光基團發射的熒光因與端的淬滅劑接近而被淬滅儀器檢測不

,3’,

到熒光信號但在進行延伸反應時Taq酶發揮的外切核酸酶功能

溫馨提示

  • 1. 本站所提供的標準文本僅供個人學習、研究之用，未經授權，嚴禁復制、發行、匯編、翻譯或網絡傳播等，侵權必究。
  • 2. 本站所提供的標準均為PDF格式電子版文本（可閱讀打印），因數字商品的特殊性，一經售出，不提供退換貨服務。
  • 3. 標準文檔要求電子版與印刷版保持一致，所以下載的文檔中可能包含空白頁，非文檔質量問題。

評論

0/150

提交評論