標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 25165-2010 明膠中牛、羊、豬源性成分的定性檢測(cè)方法 實(shí)時(shí)熒光PCR法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了使用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)對(duì)明膠產(chǎn)品中的牛、羊、豬源性成分進(jìn)行定性分析的方法。其主要目的是為了確保食品及藥品安全，避免由于未標(biāo)注或錯(cuò)誤標(biāo)注動(dòng)物源性成分而引發(fā)的安全問(wèn)題。

根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，首先需要從待測(cè)樣品（即含有或疑似含有牛、羊、豬源性成分的明膠制品）中提取DNA。然后通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)特定物種線粒體DNA序列的高度特異性引物與探針組合來(lái)進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。這里提到的“高度特異性”意味著這些引物和探針能夠準(zhǔn)確地識(shí)別并結(jié)合到目標(biāo)物種特有的DNA片段上，從而保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

在實(shí)際操作過(guò)程中，將準(zhǔn)備好的樣本加入到含有上述引物、探針以及必要酶和其他試劑的反應(yīng)體系中，在特定條件下進(jìn)行熱循環(huán)擴(kuò)增。隨著每個(gè)循環(huán)的完成，如果存在相應(yīng)的動(dòng)物源性成分，則會(huì)產(chǎn)生熒光信號(hào)，并且這種信號(hào)強(qiáng)度會(huì)隨擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)量增加而增強(qiáng)。通過(guò)監(jiān)測(cè)整個(gè)過(guò)程中熒光強(qiáng)度的變化情況，可以判斷出樣品中是否含有指定的動(dòng)物源性成分及其相對(duì)含量。


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....

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  • 2010-09-26 頒布
  • 2011-05-01 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS6502030

B43..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T25165—2010

明膠中牛羊豬源性成分的定性檢測(cè)方法

、、

實(shí)時(shí)熒光PCR法

Protocolofidentificationofbovinecarineovineandorcinederived

,p,p

materialsingelatin—RealtimePCRmethod

2010-09-26發(fā)布2011-05-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國(guó)

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

明膠中牛羊豬源性成分的定性檢測(cè)方法

、、

實(shí)時(shí)熒光PCR法

GB/T25165—2010

*

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:()

GB/T25165—2010

前言

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人陳穎吳亞君袁飛王晶徐寶梁張舒亞楊海榮王斌趙勇勝

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T25165—2010

明膠中牛羊豬源性成分的定性檢測(cè)方法

、、

實(shí)時(shí)熒光PCR法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了明膠中牛羊豬源性成分的實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法

、、PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于明膠中牛羊豬源性成分的定性檢測(cè)

、、。

該方法的檢出限為

0.1%。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款凡是注日期的引用文件其隨后所有

。,

的修改單不包括勘誤的內(nèi)容或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)然而鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

(),,

是否可使用這些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。,。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

食品添加劑明膠

GB6783

飼料采樣

GB/T14699.1

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學(xué)檢測(cè)

GB/T27403—2008

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。

31

.

實(shí)時(shí)熒光PCRrealtimePCR

在反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)利用熒光信號(hào)的積累實(shí)時(shí)監(jiān)控整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程

PCR,PCR。

32

.

Ct值cyclethreshold

每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

。

4原理

利用實(shí)時(shí)熒光技術(shù)根據(jù)不同物種的特異性基因序列對(duì)牛羊豬源性成分進(jìn)行鑒定利用裂

PCR,、、。

解液破碎細(xì)胞酚三氯甲烷抽提蛋白質(zhì)異丙醇沉淀得到以提取的為模板進(jìn)行內(nèi)參照基

,、,DNA;DNA

因的實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)以確定樣品的提取效率通過(guò)特異性引物和標(biāo)記熒光物質(zhì)探針進(jìn)行牛

PCR,DNA;、

羊豬源性成分的實(shí)時(shí)熒光擴(kuò)增根據(jù)擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的強(qiáng)弱判定實(shí)

、PCR,PCR,

現(xiàn)對(duì)明膠中牛羊豬源性成分的定性分析

、、

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