標準解讀

《GB/T 19915.8-2005 豬鏈球菌2型毒力因子熒光PCR檢測方法》是中國一項關于豬鏈球菌2型（Streptococcus suis type 2）的檢測技術標準，具體聚焦于利用熒光聚合酶鏈反應（Fluorescent Polymerase Chain Reaction, FPCR）技術來識別和測定該菌株中的毒力因子。此標準旨在為獸醫診斷、食品安全監控及流行病學研究提供一個快速、靈敏且特異的方法。下面是該標準內容的詳細說明：

標準范圍

本標準規定了應用熒光PCR技術檢測豬鏈球菌2型中特定毒力因子的采樣、樣本處理、核酸提取、PCR反應體系配置、反應條件設置、結果分析及判定方法。適用于豬肉產品、臨床樣本及環境中豬鏈球菌2型的毒力因子篩查與鑒定。

關鍵術語和定義

  • 熒光PCR：通過在PCR反應體系中加入熒光標記探針或染料，實時監測反應過程中熒光信號變化，以實現對目標DNA序列的定量或定性分析。
  • 毒力因子：指豬鏈球菌2型中能直接參與致病過程的特定基因或其表達產物。

檢測原理

基于熒光PCR技術，設計針對豬鏈球菌2型特定毒力因子的引物和探針，當樣本中含有目標DNA序列時，在PCR擴增過程中，隨著循環數的增加，熒光信號強度逐漸增強，通過熒光信號的變化曲線判斷目標序列的存在與否及其初始模板量。

檢測步驟

  1. 樣本采集與保存：確保樣品無污染，按照規定方法采集后迅速冷藏或冷凍保存，防止DNA降解。
  2. 樣本處理與核酸提取：使用適當的方法裂解細胞，去除蛋白質、脂質等雜質，然后提取純化DNA。
  3. PCR反應體系配制：根據標準要求準備包含模板DNA、引物、探針、酶、緩沖液等成分的反應混合物。
  4. 熒光PCR擴增：在專門的熒光PCR儀上進行溫度循環，包括變性、退火、延伸等步驟，并實時監測熒光信號。
  5. 結果分析：通過軟件分析熒光信號的增加情況，判斷是否達到閾值周期（Ct值），以此確定樣本中目標DNA的有無及其相對量。

結果判定與報告

根據Ct值的大小及內部對照的結果，判斷樣本中豬鏈球菌2型毒力因子是否存在。報告應包含實驗日期、樣本信息、檢測方法、檢測結果及必要的質量控制信息。

注意事項

  • 實驗操作需嚴格遵守生物安全規范，防止樣本交叉污染。
  • 使用的標準品和陽性對照應定期驗證，確保檢測系統的準確性和穩定性。
  • 詳細記錄實驗過程，確保結果可追溯。

該標準為豬鏈球菌2型感染的診斷和防控提供了科學依據，有助于及時發現并控制疫情，保障公共衛生安全和畜牧業健康發展。


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  • 現行
  • 正在執行有效
  • 2005-09-27 頒布
  • 2005-11-01 實施
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文檔簡介

ICS07.100.30C53中華人民共和國國家標準GB/T：19915.8—2005豬鏈球菌2型毒力因子熒光PCR檢測方法Protocolofreal-timePCRassayforvirulencefactorsofStreptococcussuistype22005-09-27發布2005-11-01實施中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布中國國家標準化管理委員會

GB/T19915.8-2005前本標準的附錄A為規范性附錄本標準由國家標準化管理委員會提出。本標準由全國動物防疫標準化管理委員會歸口本標準由中國檢驗檢疫科學研究院和江蘇出入境檢驗檢疫局負責起草本標準主要起草人：林祥梅、吳紹強、韓雪清、賈廣樂、劉建、梅琳、陳國強、張敬友、姜炭、唐泰山本標準為首次發布

GB/T19915.8-2005豬鏈球菌2型毒力因子熒光PCR檢測方法范圍本標準規定了豬鏈球菌2型毒力因子MRP和EF檢測的熒光PCR操作方法本標準適用于檢測生豬執子、增菌培養物、疑似病料及豬組織樣品中豬鏈球菌2型菌株的致病力。2術語和定義下列術語和定義適用于本標準毒力因子irulencefactor豬鏈球菌2型菌株的致病力與其毒力因子直接相關。豬鏈球菌2型的毒力因子有溶菌酶釋放蛋白（MRP）、胞外因子(EF)、溶血素、英膜多糖以及44kDa蛋白、1gG結合蛋白、纖毛粘著素等。其中，溶菌酶釋放蛋白(MRP)和胞外因子(EF)是最主要的兩個毒力因子，可作為判定菌林毒力的指標。一般認為表型MRP十EF十為強致病株,MRP+EF－為弱致病株.MRP－EF－為非致病株，未發現MRP-EF十表型3縮略語本標準采用下列縮略語：熒光PCR熒光聚合酶鏈反應MRP溶菌酶釋放蛋白胞外因子C值熒光信號到達設定的閩值所經歷的循環數FAM6-按基貨光素TAMRA四甲基羅丹明實驗材料與儀器4.1實驗試劑實驗試劑包括：-豬鏈球菌2型毒力因子熒光PCR檢測引物、探針、陽性對照及常規PCR反應試劑；商品化的組織基因組DNA提取試劑盒.具體提取操作參照說明書進行。4.2儀器所用儀器包括熒光PCR儀：高速冷凍離心機；臺式離心機：旋渦混勺器；冰箱（2C～8C和-20C兩種）微量可調移液器(

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