ICS07.100.30C53中華人民共和國國家標準GB/T：19915.3—2005豬鏈球菌2型PCR定型檢測技術MethodfordetectionSireptococcussuistype2byPCR2005-09-27發布2005-11-01實施中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國國家標準褚鏈球菌2型PCR定型檢測技術GB/T19915.3—2005中中國標準出版社出版發行北京西城區復興門外三里河北街16號郵政編碼：100045電話：63787337、637874472005年12月第一版2005年12月電子版制作書號：155066·1-26802版權專有侵權必究舉報電話：（010)68533533

GB/T19915.3—2005前豬鏈球菌病是鏈球菌屬中豬源鏈球菌引致的豬鏈球菌病的總稱,其病原主要有豬鏈球菌2型和馬鏈球菌獸疫亞種。豬鏈球菌2型可引起豬敗血癥、腦膜炎等。人可通過傷口感染該菌,并導致死亡。為控制和預防該菌引致的豬鏈球菌病，建立快速、特異、敏感的檢測方法是當務之急。本標準是采用公認的細菌學診斷的現代分子生物學技術制定的。本標準的附錄A是規范性附錄。本標準由農業部畜牧獸醫局提出本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：南京農業大學。本標準主要起草人：陸承平、范紅結、姚火春、何孔旺

GB/T19915.3—2005豬鏈球菌2型PCR定型檢測技術T范圍本標準規定了豬鏈球菌2型的PCR的定型方法本標準適用于由豬鏈球菌2型引致的病死豬分離菌的檢測和定型。規范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T6682一1992分析實驗室用水規格和試驗方法術語和定義下列術語和定義適用于木標準。豬鏈球菌2型SIreplococcussuistype2豬鏈球菌是屬于鏈球菌屬的一種細菌,根據其英膜多糖抗原的差異,可分為1～34及1/2共35個血清型。豬鏈球菌2型是豬鏈球菌的一個血清型,不僅對豬致病性很強,而且可以感染特定的人群,是一種重要的人畜共患病病原菌，4測定方法方法提要挑取可疑細菌培養物菌落加入PCR反應管中.進行PCR擴增，瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物.與標準分子量標記比較，確定擴增產物的大小。4.2試劑和材料除另有規定.所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682—1992的滅菌雙蒸水。4.2.1豬鏈球菌2型定型PCR反應混合物和豬鏈球菌2型定型套式PCR反應混合物4.2.2TagDNA聚合酶4.2.3瓊脂糖：電泳級。4.2.4溴化乙鍵。4.2.5分子量標記：DL-2000。4.2.6TE緩沖液：10mmol/LTris-HCI(pH8.0),1mmol/LEDTA(pH8.0)。4.2.710×PCR緩沖液：100mmol/LKCl.160mmol/L(NH,).SO,.20mmol/LMgSO,.200mmol/LTris-HCI(pH8.8).1%TritonX-100,1mg/mLBSA.4.2.8電泳緩沖液：242gTris堿，57.1mL冰乙酸,100mL0.5mol/LEDTA(pH8.0)，加蒸水至1000mL.使