標準解讀
《GB/T 19495.3-2004轉基因產品檢測核酸提取純化方法》是中國國家標準化管理委員會發布的一項國家標準,旨在為轉基因產品的檢測提供統一、規范的核酸(DNA或RNA)提取和純化操作流程。該標準詳細規定了從轉基因植物、動物及其衍生產品中有效提取和純化核酸的步驟、所需材料、質量控制指標及注意事項,以確保檢測結果的準確性和可重復性。下面是該標準內容的詳細介紹:
標準適用范圍
本標準適用于轉基因植物、轉基因動物及其制品中DNA或RNA的提取與純化,是進行后續轉基因成分定性或定量檢測的前提步驟。它覆蓋了從樣本預處理到最終核酸溶液制備的全過程。
關鍵內容概述
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樣本準備:標準明確了樣本采集、保存的條件和方法,確保樣本中的核酸完整性不被破壞,并減少外界污染。
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核酸提取:詳細描述了采用物理、化學或酶學方法破碎細胞壁和膜的過程,釋放出核酸。這一步可能包括使用特定的裂解液、蛋白酶K等試劑,以及通過離心、吸附、洗滌等手段分離核酸。
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純化過程:闡述了如何通過柱層析、沉淀等技術去除蛋白質、多糖、酚類等雜質,獲得高純度的核酸。強調了在純化過程中避免核酸降解和污染的重要性。
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質量控制:提出了核酸提取純化后應進行的質量評估指標,如紫外吸收比值(A260/A280)、電泳檢測等,用以評估核酸的純度和完整性。
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操作安全與環境控制:標準中還包含了實驗操作的安全指導原則和實驗室環境控制要求,確保實驗人員安全及防止交叉污染。
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記錄與報告:強調了實驗過程中詳細記錄每一步操作及所觀察到的現象的重要性,以及如何編寫實驗報告,確保實驗的可追溯性和透明度。
注意事項
- 強調個性化調整:雖然提供了通用流程,但也指出根據不同的樣本類型和實驗目的,可能需要對提取方案做適當調整。
- 試劑與設備選擇:推薦使用高質量的試劑和合適的儀器設備,以保證提取效率和核酸質量。
- 實驗室技能:標準雖提供了詳細指導,但實施者需具備一定的分子生物學實驗技能和經驗。
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- 現行
- 正在執行有效
- 2004-04-13 頒布
- 2004-04-13 實施




文檔簡介
ICS67.050B04中華人民共和國國家標準GB/T19495.3—2004轉基因產品檢測核酸提取純化方法Detectionofgeneticallymodifiedorganismsandderivedproducts-Nucleicacidextraction2004-04-13發布2004-04-13實施中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局愛布中國國家標準化管理委員會
GB/T19495.3-2004三次前言范圍2規范性引用文件原則實驗室通用要求45提取步強6測試報告附錄A(規范性附錄)-三氯甲烷法提取DNA附錄B(規范性附錄)PVP法提取DNA附錄C(規范性附錄)CTAB法提取DNA附錄D(規范性附錄)硅土法提取DNA附錄E(規范性附錄)順-三氯甲燒法提取DNA19附錄F(資料性附錄)提取DNA方法應用實例·20參考文獻22
GB/T19495.3—2004GB/T19495《轉基因產品檢測》為系列標準:GB/T19495.1-2004轉基因產品檢測通用要求和定義:GB/T19495.2—2004轉基因產品檢測實驗室技術要求:GB/T19495.3—2004轉基因產品檢測核酸提取純化方法;-GB/T19495.4—2004轉基因產品檢測核酸定性PCR檢測方法;GB/T19495.5—2004轉基因產品檢測核酸定量PCR檢測方法;-GB/T19495.6—2004轉基因產品檢測基因芯片檢測方法;GB/T19495.7—2004轉基因產品檢測抽樣和制樣方法;-GB/T19495.8—2004轉基因產品檢測蛋白質檢測方法:本部分引用了ENISO/DIS21571中的部分內容。本部分的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D和附錄E為規范性附錄,附錄F資料性附錄本部分由國家認證認可監督管理委員會提出并歸口。本部分由中華人民共和國質量監督檢驗檢疫總局批準發布本部分起草單位:中華人民共和國山東出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國汕頭出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國廣州出入境檢驗檢疫局、國家質量監督檢驗檢疫總局動植物檢疫實驗所、中國農科院生物技術所、山東農科院植保所。本部分主要起草人:高宏偉、相大鵬、草文、朱水芳、陳長法、蔡穎、許業莉、莊逸林、梁希揚、甄宇江、金蕪軍、路興波。本部分系首次發布的國家標準
GB/T19495.3—2004轉基因產品檢測核酸提取純化方法范圍GB/T19495的本部分規定了轉基因產品中DNA提取純化方法以及DNA溶液濃度測定的基本要本部分適用于轉基因食品等加工產品·也適用于轉基因農產品。范性引用文件下列文件中的條款通過GB/T19495的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括誤的內容)或修訂版均不適用于本部分,然而,鼓勵根據本部分達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本部分。GB/T19495.1-2004轉基因產品檢測通用要求和定義GB/T19495.2-2004轉基因產品檢測實驗室技術要求GB/T19495.5-2004轉基因產品檢測核酸定量PCR檢測方法GB/T19495.7—2004轉基因產品檢測油樣和制樣方法原則3.1一一般性原則核酸提取的目的是提供合適的用于后續分析的DNA。DNA的質量包括提取的DNA分子的平均長度,化學純度以及DNA序列及雙螺旋的完整性.例如,DNA堿基的鏈內、鏈間的聯系,單鏈間隙的聯系等。而且,這些情況是序列特異性的,因此在基因組中不是隨機分布的3.2提取DNA提取的基本原則是釋放樣品中的DNA.隨后純化DNA去除PCR反應抑制劑。附錄A中不同的DNA提取純化方法適用于不同的樣品。DNA定量有助于后續的PCR分析,可以通過物理方法(測量特定波長下的光吸收).化學-物理方法(結合可以發熒光的物質).酶法(生物熒光檢測)或者定量PCR方法。后者最適用于多組分樣品以及含量低或已降解的DNA.實驗室通用要求隨機的DNA污染來源于灰塵及氣溶膠。因此,實驗室工作區域的組織以及良好的實驗操作(GLP)基于:實驗操作中每一步驛的系統控制:樣品操作的“單向流動”原則。后者可以保證被分析的DNA以及PCR產生的DNA保持分離性。具體
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