實驗室常用移液器

第二章

教學基本要求掌握（1）移液器的工作原理（2）移液器的基本結構和性能要求（3）移液器的使用方法熟悉（1）移液器的維護（2）移液器常見故障的排除了解（1）移液器的種類（2）移液器的專業校準3第二章實驗室常用移液器第二節移液器的基本結構、性能與使用2第一節常用移液器的工作原理

31第三節移液器的維護與常見故障的排除33前言良好的分析技術對于臨床檢驗是極為重要的，在各種臨床檢驗分析技術中，首先要熟練掌握的就是準確的移液技術，它是檢驗技術人員的基本功，是保證檢驗結果準確的前提和條件。目前，移液器替代了過去的玻璃刻度吸管，作為一種方便有效的精密計量器材已廣泛應用于各類實驗室。返回目錄第一節常用移液器的工作原理移液器（locomotivepipette）又名微量加樣器或移液槍，是連續可調、計量和轉移液體的專用器材。目前移液器的吸液范圍從小于1μl至10ml之間。返回目錄678根據其移液的物理學原理可分為使用空氣墊(又稱活塞沖程)加樣的移液器和使用無空氣墊的活塞正移動加樣的移液器。根據移液量是否可調又可分為定量移液器和可調式移液器。第一節常用移液器的工作原理返回目錄9一、移液器的工作原理移液器的基本工作原理是依據胡克定律。在一定限度內彈簧伸展的長度與彈力成正比，也就是移液器的吸液體積與移液器內的彈簧伸展的長度成正比。移液器內活塞通過彈簧的伸縮運動來實現吸液和放液。在活塞推動下，排出部分空氣，利用大氣壓吸入液體，再由活塞推動空氣排出液體。返回目錄10二、常用移液器的工作原理目前臨床常用的移液器主要有空氣墊移液器、活塞正移動移液器、多通道移液器和電子移液器。返回目錄111．空氣墊移液器

空氣墊移液器主要用于固定或可調體積液體的加樣，加樣體積的范圍在1μl至l0ml之間。空氣墊的作用是將吸至塑料吸頭內的液體與移液器內的活塞分隔開，空氣墊隨著移液器活塞的彈簧伸縮而移動，進而帶動吸頭中的液體。空氣墊移液器最大的不足之處就是容易受溫度、氣壓和空氣濕度的影響，導致加樣的準確度降低。返回目錄1213死體積活塞套筒吸嘴（一次性）液體142．活塞正移動移液器該類移液器可以在空氣墊移液器難以應用的情況下使用。如移取具有高蒸汽壓、高黏稠度以及密度大于2.0g/cm3的液體。活塞正移動移液器的吸頭與空氣墊移液器吸頭不同，其內含一個可與移液器活塞耦合的活塞，這種吸頭不能使用普通的吸頭或不同廠家的吸頭。返回目錄活塞正移動移液器15活塞正移動移液器采用外置式活塞，活塞設計在吸頭內部，直接與液體接觸，活塞與液體之間沒有空氣段。16液體活塞（一次性）毛細吸管（一次性）尖頭操作桿17兩種移液器的比較18193．多通道移液器和電子移液器多通道移液器通常為8通道或12通道，與96孔（8×12）微孔板一致。多通道移液器的使用不但可減少實驗操作人員的加樣次數，而且可提高加樣的精密度。返回目錄20電子移液器多為半自動加樣系統，加樣重復性高，可減少人為誤差和污染，應用范圍廣。返回目錄2122232425第二節移液器的結構、性能與使用移液器是臨床實驗室中最常使用的移液器材之一，雖然其基本結構簡單，使用方便，但對移液器的性能要求比較嚴格，作為專業的檢驗人員應當掌握移液器的基本結構和使用方法。返回目錄26一、移液器的基本結構移液器是一種量出式量器，移液量由一個配合良好的活塞在活塞套內移動的距離來確定。移液器的基本結構主要由顯示窗、容量調節部件、活塞、O-形環、吸引管和吸液嘴（俗稱槍頭）等部分組成

返回目錄27二、移液器的性能要求移液量能否按照實驗的要求精確量取，直接關系到檢測結果的準確性和可靠性。返回目錄28（一）計量性能要求移液器在標準溫度20℃時，其容量允許誤差和測量重復性應符合《中華人民共和國國家計量檢定規程——移液器》的要求.返回目錄29（二）通用技術要求①標有產品名稱、生產商、標稱容量等基本信息②移液器外殼塑料表面應平整、光滑，

外觀要求

按鈕上下移動應靈活、分檔界限明顯，在正確使用情況下不得有卡住現象。按鈕采用聚丙烯或性能相似材料制成，無明顯彎曲，內壁光潔、平滑，排液后沒有明顯液體遺留，有相應配套的吸液嘴吸液嘴

在0.04MPa的壓力下，5s內不得有漏氣現象。

密合性可調移液器的容量調節指示部分在調節范圍內轉動要靈活，數字指示要清晰、完整。調節器

返回目錄30（三）移液器的檢測1．氣密性檢測①目視法檢測：將吸取液體后的移液器垂直靜置15秒，觀察是否有液滴緩慢的流出。若有流出，說明有漏氣現象；②壓力泵檢測：使用專用的壓力泵，檢測壓力情況，判斷是否漏氣。返回目錄31（三）移液器的檢測移液器漏氣的處理可能原因處理辦法吸頭不匹配使用原裝匹配的吸頭裝配吸頭時沒上緊注意裝配吸頭的方法（參考說明書）移液器內部氣密性不好請廠商工程師處理返回目錄32（三）移液器的檢測2．準確性檢測①量程小于1μl：建議使用分光光度法檢測。②量程大于1μl：用稱重法檢測。通過對水的稱重，轉換成體積來鑒別移液器的準確性。返回目錄33（四）移液器的專業校準移液器的工作量大，長期使用，將會使彈簧彈力發生變形，加之使用塑料材料，不耐磨擦，容易產生誤差。新購進的移液器必須進行校準才能使用。正在使用的移液器，由于長期使用會造成其設定體積與吸取體積的誤差。目前，由于實驗室自身條件的限制，一般實驗室進行的常規檢測并不能完全取代專業的校準工作。返回目錄34三、移液器的使用方法移液器的操作是科學試驗的第一步，是一個非常基礎的試驗操作，而錯誤的操作容易產生移液偏差，導致實驗結果不準確。返回目錄35（一）設定移液體積從大體積調為小體積，則按照正常的調節方法，逆時針旋轉旋鈕即可。從小體積調為大體積時，則可先順時針旋轉刻度旋鈕至超過設定體積的刻度，再回調至設定體積，這樣可以保證量取的最高精確度。返回目錄36（一）設定移液體積千萬不要將旋鈕旋出量程，否則會卡住內部機械裝置而損壞移液器。

返回目錄37（二）裝配吸液嘴單通道移液器，將移液端垂直插入吸頭，左右微微轉動，上緊即可。多通道移液器，將移液器的第一道對準第一個吸頭，傾斜插入，前后稍微搖動上緊，吸頭插入后略超過O型環即可返回目錄38（三）移液方法移液前，保證移液器、槍頭和液體處于相同溫度。吸液前，可以先吸放幾次液體以潤濕吸液嘴。吸液時，保持豎直，槍頭插入液面下2～3毫米。返回目錄39前進移液法用大拇指將按鈕按下至第一停點，(槍頭插入液面下)，然后慢慢松開按鈕回原點。接著將按鈕按至第一停點排出液體，稍停片刻繼續按按鈕至第二停點吹出殘余的液體，最后松開按鈕。返回目錄40反向移液法一般用于轉移高粘液體、生物活性液體、易起泡液體或極微量的液體。吸取液體時先按下按鈕至第二停點，慢慢松開按鈕至原點。將按鈕按至第一停點排出液體，保持按鈕位于第一停點，取下有殘留液體的吸液嘴，棄之。返回目錄41（四）移液器的放置使用完畢，可以將其豎直掛在移液器架上。當移液器槍頭里有液體時，切勿將移液器水平放置或倒置，以免液體倒流腐蝕活塞彈簧。返回目錄42第三節移液器的維護與

常見故障的排除移液器以操作簡單，準確性高等優點得到了廣泛應用，為使移液器始終保持最佳性能，必須定期進行維護，并及時排除故障。返回目錄43移液器的拆卸方法返回目錄44移液器的拆卸方法返回目錄45（一）清潔和消毒內外部清潔

①外殼的清潔：清潔液擦洗，雙蒸水淋洗，晾干；②內部的清洗：拆卸移液器下半部分，按①步驟清洗后在活塞表面涂上一層薄硅酮油脂。消毒滅菌處理

①常規高溫高壓滅菌處理：包裝滅菌部件于121℃，100kPa，滅菌20分鐘，室溫下晾干，活塞涂一層薄硅酮油脂，再組裝；②紫外線照射滅菌：表面消毒。DNA污染的去除

移液器下半部分拆卸下來的內外套筒，95℃下于清洗液中浸泡30分鐘，再用蒸餾水沖洗套筒，60℃下烘干或完全晾干后在活塞表面涂上硅酮油脂再組裝。123返回目錄46（二）不同性質液體移液時的操作特性和保養方法為確保移液的準確度，建議根據具體使用情況采用相應的清洗及保養方法，以延長移液器使用壽命。返回目錄47移液器在不同使用情況下應采取的清洗和保養方法液體性質操作特性清洗和保養方法水溶液和緩沖液用蒸餾水校準移液器，結果非常準確打開移液器，用雙蒸水沖洗污染部分，可以在干燥箱中干燥，溫度不超過60℃。給活塞涂抹少量潤滑油無機酸/堿如果經常移取高濃度的酸/堿液，建議偶爾用雙蒸水清洗移液器的下半支。并推薦使用帶有濾芯的吸嘴Eppendorf移液器使用的塑料材料和陶質活塞都是耐酸耐堿材料（除氫氟酸）。但是酸液/堿液的蒸汽可能會進入移液器的下部，影響其性能。清潔方法同“水溶液”部分具有潛在傳染性的液體為了避免污染，應該使用帶有濾芯的吸嘴。或者使用正向置換方法移取污染部分進行121℃，20分鐘高壓滅菌。或將移液器下部浸入實驗室常規消毒劑中。隨后用雙蒸水清洗，并用如上所述的方法進行干燥。細胞培養物為了保證無菌，應使用Eppendorf帶有濾芯的吸嘴參照“具有潛在傳染性的液體”的清潔方法返回目錄48移液器在不同使用情況下應采取的清洗和保養方法液體性質操作特性清洗和保養方法有機溶劑1．密度與水不同。因此必須調節移液器。2．由于蒸汽壓高和濕潤行為的變化，應該快速移液。3．移液結束后，拆開移液器，讓液體揮發。通常對于蒸氣壓高的液體，任其自然揮發的過程就足夠了。或者將下部浸入消毒劑中。用雙蒸水清洗，并用如上所述的干燥方法將其干燥放射性溶液為了避免污染，應該使用帶有濾芯的吸嘴。或者使用正向置換方法拆開移液器，將污染部分浸入復合溶液或專用的清潔溶液，用雙蒸水清洗，并用如上所述的干燥方法將其干燥核酸/蛋白質溶液為了避免污染，應該使用帶有濾芯的吸嘴。或者使用正向置換方法（1）蛋白質：拆開移液器，用去污劑清洗，清洗和干燥方法如上所述。（2）核酸：在氨基乙酸／鹽酸緩沖液（pH2）中煮沸10分鐘（確保瓊脂糖凝膠電泳檢測不到DNA殘留），用雙蒸水清洗干凈，并用如上所述的干燥方法將其干燥。同時給活塞涂抹少量潤滑油返回目錄49二、移液器常見故障的排除移液器的使用頻率較高，同時可能存在操作人員使用不當，易導致移液器出現故障，因此，操作人員應當熟悉移液器常見故障，并具備排除故障的基本能力。返回目錄50移液器的常見故障及排除常見故障可能原因解決辦法吸液嘴內有殘液吸液嘴不適配吸液嘴塑料濕潤性不均一吸液嘴未裝好使用原配吸液嘴裝緊吸液嘴重裝新吸液嘴漏液或移液量太少吸液嘴不適配吸液嘴和連件間有異物活塞或O-形環上硅油不夠O-形環與活塞未扣好或O-形環損壞操作不當需要校準或液體密度與水差異大