第第頁(yè)出廠檢驗(yàn)常見(jiàn)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)方法（包括菌落總數(shù)、大腸菌群等）！出廠檢驗(yàn)常見(jiàn)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)方法

菌落總數(shù)

菌落總數(shù)的測(cè)定

檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn):

GB4789.2-2023食品平安國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定

菌落總數(shù):

食品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在肯定條件下(如培育基、培育溫度和培育時(shí)間等)培育后，所得每g檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。

制備1:10樣品勻液

稱(chēng)取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)8000rimin-10000r/min均質(zhì)1min-2min.或放入盛有225mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中。用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min。制成1:10的樣品勻液。

制備1:100樣品勻液

用1mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL沿管壁漸漸注入盛有9mL稀釋液的無(wú)菌試管中(留意吸管或吸頭不要觸及稀釋液面)，振搖試管或換用支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合勻稱(chēng)。制成1:100的樣品勻液。

制備10倍品勻液

按上一步操作程序。制務(wù)10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無(wú)菌吸管或吸頭。

取樣并制備平板

選擇2個(gè)一3個(gè)相宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1mL樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)釋釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)空白對(duì)比。

準(zhǔn)時(shí)將15mL-20mL冷卻至46℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培育基(可放置于46℃士1℃恒溫水浴鍋中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合勻稱(chēng)。

大腸菌群

01

大腸菌群分布較廣，在溫血?jiǎng)游锛S便和自然界廣泛存在。

02

大腸菌群的測(cè)定

固體和半固體樣品:

·稱(chēng)取25g樣品,放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min,或放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min,制成1∶10的樣品勻液。

液體樣品:

·以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)或其他無(wú)菌容器中充分振搖或置于機(jī)械振蕩器中振搖,充分混勻,制成1∶10的樣品勻液。

·用1mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1mL,沿管壁緩緩注入9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌試管中(留意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支1mL無(wú)菌吸管反復(fù)吹打,使其混合勻稱(chēng),制成1∶100的樣品勻液。

·依據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估量,按上述操作,依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次,換用1支1mL無(wú)菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢,全過(guò)程不得超過(guò)15min。

·制備1:10樣品勻液

以無(wú)菌操作將檢樣25g(mL)放于含有225mI.滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的勻稱(chēng)稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器,以8000r/min~10000r/min的速度處理1min,做成1:10的勻稱(chēng)稀釋液。

·制備1:100樣品勻液

用1mL無(wú)菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL,注入盛有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管中，振搖試管混合勻稱(chēng)，制成1:100的樣品勻液。

·制備10倍品勻液

領(lǐng)取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。

·移取樣品

依據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)悠肺廴緺顩r的估量,選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三。

02乳糖發(fā)酵試驗(yàn)

將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，lmL及以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管，置36℃±1℃培育24h±2h,如全部乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣則可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。

03分別培育

將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36℃±1℃溫箱內(nèi)，培育18h~24h,然后取出，觀看菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證明試驗(yàn)。

伊紅美藍(lán)瓊脂:伊紅Y和美藍(lán)抑制絕大部分革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng).伊紅Y為酸性染料，美藍(lán)為堿性染料，瓊脂是凝固劑。大腸菌群發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸時(shí)，細(xì)菌帶正電荷，所以染上伊紅(紅色)，再與美藍(lán)結(jié)合形成紫黑色菌落，大部分有金屬光澤。

03證明試驗(yàn)

在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1-2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36℃±1℃培育24