1目的規范本實驗室 網絡版系列高效液相色譜的日常使用和維護保養，保證儀器的正常運轉，確保檢測工作的順利進行。范圍適用于本實驗室 網絡版系列高效液相色譜系統的日常使用和維護。職責實驗員：實驗員負責 網絡版系列高效液相色譜系統的日常使用和維護。儀器維護人員：監督實驗員對 網絡版系列高效液相色譜系統的日常使用和維護。實驗室主管：監督本操作規程的實施。內容系統組成本系統由 分離單元、 二極管陣列檢測器、計算機、色譜工作站和數據庫服務器組成。各部件均有電源插頭。分離單元包括四元梯度洗脫的溶劑輸送系統，四通道在線真空脫氣機，可容納 個進樣瓶的自動分離單元，柱溫箱，內置的柱塞桿密封墊清洗洗脫，溶劑瓶托盤，顯示器，用戶界面。開機依次打開數據服務器、 分離單元、 二極管陣列檢測器、計算機、 色譜工作站的插頭電源。依次打開數據服務器設備電源，登錄服務器。分離單元、 二極管陣列檢測器、計算機的設備開關。連接 分離單元后，約分鐘會進入自動校驗，約三分鐘內各部件的初始化完成，待主屏幕上方標題區出現“Idle”時，儀器進入待命狀態。溶劑管路系統的準備流動相脫氣待流動相準備齊全，放入流動相托盤中，按【 】進入612也5（）”屏幕界面。灌注當色譜儀管路中沒有溶劑或系統中有空氣時，按干灌注 注入流動相，否則，進行濕灌注（ ）以排除氣泡。干灌注：按主控制面板【 】進入31滉然（）”界面，按【 】，選擇【】，擇溶劑通道，如，選【 】按數字鍵，輸入分鐘，按“Continue”，待限定時間結束后，重復操作，使所需要的通道注滿流動相。濕灌注："Status（）”界面，選擇溶劑通道，輸入 ，按【】，選擇【 】，點擊【 】，根據界面提示設置流速【 】（一般為 ），設置脫氣時間【 】（一般為），選確認脫氣，待脫氣結束候，重復上述操作，灌注其他溶劑通道。樣品管理系統的準備沖洗自動進樣器在“Status（）”界面，光標選“Composition”,輸入流動相的組成。按【 】，光標選“Purgeinjector"，按【 】，顯示"Purge何38?！浮苯缑?，輸入“SampleLoopVolumes6.0”，光標下移“Compression，按任意數字鍵，按【】。沖洗進樣針在主控制面板下，按【 】，顯示"Diagnostics”界面，按【 】，顯示^「而包Needie川2$卜界面，按【 】半分鐘內見溶劑從廢液排放口流出。按【 】、【】，返回主控制界面。沖洗柱塞桿密封墊在主控制面板下，按【 】，顯示"Diagnostics”界面，按【 】，顯示“PrimeSeal川2$卜界面，按【 】，半分鐘內見溶劑從廢液排放口流出。按【 】、【 】、【】，返回主控制界面。進樣盤裝置的使用打開進樣盤艙門，控制面板顯示“DoohsOpen”，進樣盤取出（分為、、、、盤），把進樣瓶放入樣品盤，把樣品盤放入轉盤，按【】直至所有樣品裝盤完畢，關好艙門。色譜柱平衡打開柱溫箱，換上需要使用的色譜柱和流動相，進入612也5（）”顯示界面，選擇通道、設置流速（由低升高）、柱溫，按【】開始注入流動相，通常約分鐘，色譜柱可達到平衡，可以開始進樣，采集數據。軟件的應用建立數據采集方法登錄雙擊電腦顯示屏上的“Empower快捷圖標，出現 登錄界面，輸入用戶名和密碼。單擊高級界面，選擇選擇允許運行界面為“Pro界面”，點擊確定，然后選擇待選定的操作項目以及相應色譜系統（處理服務器），單擊確定，進入“Empower3”控制界面。編輯儀器方法和方法組采集欄單擊“方法組編輯向導”。選擇“新建”選項。彈出儀器方法編輯器。單擊“W2690/5”，彈出 編輯界面。根據需要內容編輯流量、溫度、溶劑、啟用通道（其他內容默認）。點擊 ，彈出“2998PDA檢測器”編輯界面將燈開啟。采集數據，在通用欄中選擇啟用數據，輸入檢測波長的范圍。采集 數據，點擊“2D通道”，最多可同時采集個不同波長的通道的數據。點擊“文件”，選擇“另存為”，輸入儀器方法名稱，點擊“保存”;點擊“文件”，選擇“退出”。在被選項中選擇所需的儀器方法名稱，點擊“下一步（N）”。在下拉菜單中選擇所需的處理方法和報告方法如果沒有合適的方法選擇“無處理”、“無報告”），點擊下一步。輸入方法組名稱，單擊“完成”。進樣單進樣點擊，進入定義單進樣參數編輯界面，輸入樣品名、功能、方法組、進樣瓶號、進樣體積、運行時間，等參數，點擊“進樣”。使用樣品組方法進樣選擇“運行樣品”，進入樣品列表，輸入進樣瓶位置、樣品名稱、進樣體積、進樣次數、功能（樣品進樣、標準進樣）、方法組報告或導出方法、運行時間等參數。點擊“文件”，選擇“樣品組方法另存為（）”。點擊樣品界面的綠色按鈕，運行“樣品組方法”。4.8建立處理方法建立2D數據處理方法主界面單擊“瀏覽項目”鍵，選擇目標項目，目標儀器，在“樣品組”中選擇目標樣品組。在樣品組上點擊鼠標右鍵選擇“查看相關^通道”，樣品組在單個通道中顯示。選擇定最低濃度的標樣,點擊鼠標右鍵,選擇下拉菜單中的查看,會顯示未處理的色譜圖形。點擊處理方法向導快捷鍵,選擇創建新處理方法,點擊確定。確認處理類型為LC,積分方式可選擇為傳統，再點擊使用處理方法向導,選擇確定。常按鼠標左鍵,選擇色譜圖上最窄峰。（注:在色譜圖區域方可以放大某個需要監測的峰。點擊鼠標右鍵全視圖可以還原色譜圖。），點擊下一步。在色譜圖的積分界面選擇一段典型基線作為積分的閾值，點擊下一步。常按鼠標左鍵,在基線上設置積分的起止時間點。建議選擇最小峰高,選擇所要積分的高度最小峰（或鍵入相應數值）。小于此峰高90%的峰將不被積分。點擊下一步。定量方法選擇面積,組分信息選擇含量,校正類型選擇線性。點擊下一步。跨通道內標樣界面點擊否。因為選擇的是標樣,點擊峰1可以看到一個下拉菜單選擇相應的組分名稱或者鍵入運行樣品相應的名稱。添加組分名稱相匹配的標準含量,然后點擊下一步。如果是多點校正樣品，跳過添加含量的窗口直接點擊下一步。（單點校正可在這里添加含量）。選擇外標法。選擇單一內標樣,需要在下拉菜單中選擇或鍵入內標相應的名稱,然后點擊下一步。選擇多重內標需要輸入所有內標的名稱。為處理方法命名,點擊完成。色譜圖界面會顯示該處理方法應用后的色譜結果,包括積分。如需為積分方法添加積分事件,鼠標右鍵點擊色譜圖窗口,選擇添加積分事件。積分事件所示功能會立刻應用于處理方法中。編輯處理方法的高級功能需要選擇快捷鍵。有任何更改均需再次保存處理方法。點擊峰表底部可預覽2D通道和峰。點擊“瀏覽項目”鍵,選擇“通道”或“樣品組”標簽欄,右鍵點擊目標樣品組或通道并選擇處理。在處理界面,選擇使用指定的處理方法,選擇相應的處理方法名稱,點擊清除校正,選擇校正并定量。4.8.1.23點擊確定,數據處理,產生結果?？稍诮Y果欄中查看。建立3D數據處理方法點擊“瀏覽項目”鍵,在“樣品組”中選擇目標樣品組。在樣品組上點擊鼠標右鍵選擇查看相關通道,樣品組中各個數據在單個通道中顯示。選擇定量最低濃度的標樣,點擊鼠標右鍵,選擇下拉菜單中的查看。在預覽界面選擇“輪廓線”標簽欄,會顯示未處理的輪廓圖。從處理或右鍵下拉菜單中選擇提取色譜選項。鍵入所需要提取的波長,按回車鍵,得到該波長的色譜圖。點擊處理方法快捷鍵，選擇創建新處理方法，確認處理類型為PDA,積分方式可選擇為傳統,再點擊使用處理方法向導,點擊確定。常按鼠標左鍵,選擇色譜圖上最窄峰。（注:在色譜圖區域內可以放大某個需要監測的峰。點擊鼠標右鍵選擇全視圖可以還原色譜圖。）在色譜圖的積分界面選擇一段平滑的基線作為積分的閾值,點擊下一步。常按鼠標左鍵,在基線上選取積分的起止時間點。建議選擇最小峰高,選擇所要積分的高度最小峰（或鍵入相應數值）。小于此峰高90%的峰將不被積分。點擊下一步。定量方法選擇面積,組分信息選擇含量,校正類型選擇線性。點擊下一步?？缤ǖ纼葮藰咏缑纥c擊否。4.94.9查看結果和視圖篩選因為選擇的是標樣,點擊峰1可以看到一個下拉菜單選擇相應的組分名稱或者鍵入運行樣品相應的名稱。添加組分名稱相匹配的標準含量,然后點擊下一步。如果是多濃度點的一組標樣,跳過添加含量的窗口直接點擊下一步。（單一濃度可以在這里添加含量）。選擇外標法。選擇內標法單一內標樣校正,需要在下拉菜單中選擇或鍵入內標相應的名稱,然后點擊下一步。選擇多重內標需要輸入所有內標的名稱。PDA純化及匹配選項。為處理方法命名,點擊完成。色譜圖界面會顯示該處理方法應用后的色譜結果,包括積分。在“文件”下拉菜單中選擇“另存為”方法組,將該處理方法存入方法組。（注：3D數據必須用方法組處理。）如需為積分方法添加積分事件,鼠標右鍵點擊色譜圖窗口,選擇添加積分事件。積分事件所示功能會立刻應用于處理方法中。編輯處理方法的高級功能需要選擇快捷鍵。點擊“瀏覽項目”鍵,選擇“通道”或“樣品組”標簽欄,右鍵點擊目標樣品組或通道并選擇處理。在處理界面,選擇使用指定的處理方法,選擇相應的處理方法名稱,點擊清除校正,選擇校正并定量。點擊確定,數據處理,產生結果?？稍诮Y果欄中查看。4.11.44.11.4命名方法組,點擊完成。選擇“結果”標簽欄,使用視圖篩選器從下拉菜單中選擇今天。選擇需查看的結果,右鍵點擊選擇查看。查看結果點擊快捷鍵,查看每個組分的校正曲線。切換至主窗口點擊。預覽結果并創建報告方法點擊“預覽項目”切換回結果表顯示狀態。選中一個或多個結果,點擊鼠標右鍵選擇預覽。若選取一個結果,在預覽窗口選擇使用一下方法:使用缺省單個報告,單擊確定。預覽報告并查看數據。點擊“編輯方法”鍵修改報告方法。雙擊色譜圖或峰結果表編輯報告屬性。點擊文件,選擇保存,為新建的報告方法命名。點擊預覽報告。如需將報告保存為PDF格式，點擊。方法組的建立（以上講解了如何建立儀器方法、處理方法和報告方法,組合可以得到一個方法組。）監視區單擊方法組編輯向導。彈出新方法組:選擇儀器方法界面。選擇相應的儀器方法,點擊下一步。選擇缺省方法界面選擇相應的處理方法和報告方法,導出方法缺省。點擊下一步。在運行樣品時,方法組/報告方法中調用該方法組,可以自動完成采集、處理、報告數據流程。關機使用完畢,按規定用適當的溶劑沖洗色譜柱、系統管路、自動進樣器、進樣針和柱塞桿密封墊,確保2695分離單元已徹底沖洗干凈后,關閉電源開關。數據采集完畢后,關閉所用檢測器的電源開關。數據處理并打印報告后,關閉計算機和打印機電源開關。實驗結束,在儀器使用記錄表上登記，簽字。4.12儀器維護與保養每次使用前后,查看分離單元上各溶劑瓶中溶劑