(19)中民國家知識(21(22CGMCCNo.4628(71)申請人大北農科地址100080市海淀區中關村大街湖南大北農農業科技(72)發明人胡婷閆軼權利要求書1頁說明書7序列表3頁附圖1A23K1/16權利要求書1頁說明書7序列表3頁附圖1

(10)申請公布號 (43(57)ApH2.01％胃蛋白酶的人工胃液、可以耐受03％80K8K99草芽孢桿菌的生物飼料添加AA權利要求1/1NO1添加量為107-109CFU/Kg。量為107-109CFU/Kg。枯草芽孢桿菌及其飼料添加劑和發酵[0001](Bacillussubtilis)[0002]生菌菌種存在以下3大問題(1)(23 CGMCCNo.4628其中該菌的16SrRNA序列如SEQIDNO1所示 加量為107-109CFU/Kg。 量為107-109CFU/Kg。 pH6.5-7.5 150-250rpm1-5％。 180rpm2％。 本發明的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)為申請人從傳統發酵豆豉中分離得pH2.01菌(Bacillussubtilis)已于2011年3月2日保藏于中國微生物菌種保藏管理普 素； [0028]圖1發酵豆粕與豆粕的對比。左圖為添加枯草芽孢桿菌CGMCCNo.4628108CFU/kg pH7.0，高壓滅菌后備用。 [0038](1[0039]0.5％LB～CMC行點菌30℃培養24h，用0.1％剛果紅染色1小時棄去再用1MNaCl溶液洗滌1小(H/CN-1C-1(CGMCCNo.4628C-2C-1的水解透明圈最大(表1)。[0040LB～CMC養基的配置方法羧甲0.5胰化蛋白10g酵母提取5g10g20min。[0041]1 (CGMCCNo.4628)的抑菌能力最強。 表 抑菌圈的測 (2)枯草芽孢桿菌C-1(CGMCCNo.4628)的分子鑒定DNA16SrRNA5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3SEQIDNO.25′GGTTACCTTGTTACGACTT-3，見SEQIDNO.3擴增細菌16SrRNA片段反應體系50μL10×PCR緩沖液5μL引物(20μmol/L)各0.5μLdNTP(2.5mmol/L)5μLTaq酶(5U/μL)0.5μL模板DNA1μL水補足至50μL。95min95℃30s55℃30s72℃1.5min環72℃延伸5min。2％瓊脂糖凝膠電泳檢測。擴增片段的結果見SEQIDNO.1。 C-1菌(CGMCCNo.4628)經鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。實施例3枯草芽孢桿菌CGMCCNo.4628菌粉的[0053]CGMCCNo.462810mL500ml始接種228℃14pH70轉速為180rpm。發酵后菌體60℃4℃保存。[0054]平板菌落檢測菌粉的活菌數約為1010CFU/g]合硫酸鎂0.5g/L0.0005g/L，pH7.0。 接種量即可換算出樣品中的活菌數。實施例4枯草芽孢桿菌CGMCCNo.4628抗逆性的驗證 (1)制粒高溫的耐受性將玻璃試管在90℃水浴鍋中加熱10分鐘后迅速冷卻到室溫板菌落計算殘存活95.4％。 數。取0.5mL上述菌液加入4.5mL人工胃液中37℃靜置2小時平板菌落計殘存活93.7％。 取0.5mL上述菌液加入4.5mL人工膽鹽培養基中37℃靜置2小時平板菌落計殘存97.7％。[0063]CGMCCNo.4628[0064]6CGMCCNo.4628[0065](1 K99K88K99數為24.728.8％和30.4％。 [0068]以2％接種量接種枯草芽孢桿菌CGMCCNo.46281000mlLB28[0070]10.51CGMCCNo.4628108CFU/Kg發酵溫度為303d250mL的0.511％200710120407.810.5)21％接種量接種枯草芽孢桿C-210.5)的混合物。1CGMCCNo.4628200710120407.8C-2200710120407.8C-2菌CGMCCNo.4628具有防止霉菌的功效，且作用比枯草芽孢桿菌(申請號][0073]126頭健康的28±2白對照飼喂基礎日糧2飼喂金霉素添加量為75mg/kg的基礎日345分別飼喂添加107CFU/kg108CFU/kg109CFU/kg枯草芽孢桿菌CGMCCNo.4628菌粉的基礎日6飼喂添加枯草芽孢桿菌(申請號200710120407.8中所用的枯草芽孢桿菌)108CFU/kg7C-2菌粉108CFU/kg218腹瀉頻率＝(腹瀉仔豬頭數×仔豬腹瀉天數)/(試驗仔豬頭數×正試期天)×100％。[0075]3[