離體心臟灌流

原理和意義離體心臟灌流是將動物的心臟從體內取出放入特定的生理代用液中，根據不同的實驗目的和不同種屬動物特點進行恒溫、通氧或恒溫灌流及建立與動物機體內環境基本相似的人工環境，以保證心臟維持正常活動狀態。通過一定的檢測手段觀察并記錄其生理活動、病理變化以及各種藥物和試劑等施加因素對其生理生化及形態變化的影響。優缺點

優點：排除在整體情況下體內各種復雜因素的干擾，直接觀測離體心臟標本的各項指標。易于嚴格控制實驗環境，方法簡便精確，有利于分析作用機制及對藥物的藥效作定量研究。易于獲得準確、精細的結果。缺點和局限性：失去了機體完整統一的內環境和神經體液調控作用，失去了體內各種組織、細胞之間的相互關系，不能完全反映心臟在整體情況下的活動規律與正常整體情況。經典的離體蛙心灌流——Straub法

特點：灌流途徑與正常循環途徑不同，蛙心插管通過主動脈瓣直接插入心室腔內，灌流液通過同一蛙心插管進入心室腔和流出，前負荷和后負荷相等。方法1.破壞蟾蜍腦脊髓，仰臥位固定在蛙板上，打開胸腔和心包膜，暴露心臟。2.心室插管：在主動脈干下方引2根線，一條在左主動脈上端結扎作插管時牽引用，另一根則在動脈圓錐上方，系一松結用于結扎固定蛙心插管。在松結上方左主動脈根部剪一小斜口．將盛有少許任氏液的蛙心插管由此剪口處插入動脈圓錐。當插管頭到達動脈圓錐時，再將插管稍稍后退，并轉向心室中央方向，在心室收縮期插入心室。判斷小插管是否進入心室可根據插管內的任氏液的液面是否能隨心室的舒縮而上下波動。如蛙心插管已進入心室，則將預先準備好的松結扎緊，并固定在蛙心插管的側鉤上以免掛心插管滑出心室。剪斷主動脈左右分支。3.游離蛙心：輕輕提起蛙心插管以抬高心臟，用一線在靜脈竇與腔靜脈交界處作一結扎，注意避免不要損傷靜脈竇，在結扎線外側剪斷所有組織，將蛙心游離出來。

4.用新鮮任氏液反復換洗蛙心插管內含血的任氏液，直至蛙心插管內無血液殘留。將蛙心插管固定在支架上，用蛙心夾在心室舒張期夾住心尖，并將蛙心夾的線頭連至張力傳感器上，記錄蛙心搏動曲線。5.改變灌流液成分或在灌流液中滴加藥液，記錄和觀察心臟活動的變化。八木法離體蛙心灌流特點：灌流途徑按正常循環途徑設計，一根蛙心插管插入左肝靜脈并進入靜脈竇，另一根蛙心插管僅插入主動脈，并不穿過主動脈瓣進入心室腔內，可以根據實驗要求設定不同的前負荷和后負荷。注意①不能損傷或結扎靜脈竇；②主動脈內的插管不要過深以免抵住主動脈瓣③兩根插管有一定相對位置，插管前要考慮好方向，插管后應避免血管扭曲，保證灌流暢通④避免氣泡進人心臟。哺乳類動物離體心臟灌流

——Langendorff法Langendorff首次描述了保持哺乳動物離體心臟存活的方法，采用恒壓或恒流方式，從主動脈根部逆向用含氧灌流液灌流心臟，這種方式的逆向灌注關閉了主動脈瓣，使得灌注液經冠狀動脈分布，并流入冠狀竇和右心房。由于在實驗過程中心室不充盈，所以不按照容量－壓力曲線作功。后來其實驗方法被不斷改進，以適應各種不同研究的需要，如在按上述灌流方法進行灌流以保持心臟存活的同時，在用另一根插管插入右心房灌流心臟，則可研究壓力－容積作功關系。實驗方法1.麻醉、取出心臟：在戊巴比妥鈉麻醉和人工呼吸的情況下迅速取出心臟，置于盛滿37℃氧飽和的Ringer’s液的盤中，去除粘附的心包和肺組織，確定主動脈的位置，并恰好在其分支下方切斷。2.主動脈插管：將一個玻璃或塑料的插管插入主動脈，注意插管不要過深以免損傷主動脈瓣，結扎固定。3.灌流：將心臟轉移到一個雙層壁的玻璃浴槽（類似于做離體小腸平滑肌灌流用的恒溫浴槽或麥氏浴槽）中，浴槽內加入Ringer’s液或Krebs—Henseheit緩沖液，利用恒溫水浴使這一裝置保持在37℃。經主動脈插管灌注氧飽和的Ringer’s液或Krebs—Henseheit緩沖液，并持續保持400mmHg灌注壓。

4.連接記錄裝置：將一特制的金屬小鉤固定在心尖部，利用張力傳感器與多導記錄儀相連并描記心臟收縮曲線和測定收縮力等指標。Langendorff離體心臟灌流裝置可用于測定不同種生理學試劑和藥物的直接效應，以及對這些藥物的拮抗作用。還可觀察冠脈流量的變化。1.取心臟和插管操作需迅速。2.插管不易過深，以免損傷主動脈瓣。3.灌流壓大小恰當，如壓力過低則冠狀動脈灌流量不足，過高則因主動脈根部過于擴張導致主動脈瓣關閉不全。壓力大小以冠脈流量為7~10ml/min為宜。4.灌流液溫度需恒定：37℃（95%O2+5%CO2飽和）。注意事項Bardenheuer等(1983)：小球囊插入左心室的方法與Gottlieb等的方法相似，但并不測量左心室等容壓力，而是通過一個插管將球囊內的液體泵人一個體外的閉合循環通路中，并由兩個彈性瓣膜控制其單向流動。每次心臟收縮時，由球囊排除的液體量相當于心臟的每搏輸出量，可以通過順序連接的一個流量計探頭和一個積分儀進行測量。前負荷和后負荷可以分別調整。經主動脈逆灌進入冠狀動脈的灌注液流量也可單獨記錄下來。離體工作心臟（isolatedworkingheartpreparation）經肺靜脈、左心房和二尖瓣將微型壓力傳感器放入左心室腔可直接記錄和測定左心室內壓力變化，如左心室收縮壓（LVSP）、左心室舒張末期壓（LVEDP）和左心室壓力變化速率（LVdP/dP）等；利用一根放入肺動脈內的導管連接到PMH73酸堿／血氣檢測儀上的E5046型電極可測定冠狀靜脈的Po2,并可結合灌流液的Po2和冠狀動脈流量計算心肌耗氧量；經過兩根固定在心臟表面的電極可記錄心外膜心電圖；心臟內埋藏電極記錄希氏束電圖等。參考文獻LangendorffO.Pfluger’sArchGesPhysiol1895；61:291~332BardeoheuerH，SchraderJ.Relationshipbetweenmyocardialoxygenconsumptjon，coronaryflow，andadenosinereleaseinanimprovedisolatedworkingheartpreparationofguineapigs．CircRes1983;51：263-271ScholzW,AlbusU,Mart