仔豬副傷寒活疫苗（C500株）生產操作細則仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第1頁!本品系使用免疫原性良好的豬霍亂沙門氏菌弱毒株，接種適宜培養基培養，收獲培養物加入適當穩定劑，經真空冷凍干燥制成。本品用于預防仔豬副傷寒活疫苗。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第2頁!1、菌種1.1疫苗生產用菌種為豬霍亂沙門氏菌C500弱毒株，原種購于中國獸藥檢查所，經擴繁后由質檢部鑒定、保管、供應。1.2菌種標準1.2.1C500弱毒株應符合以下標準1.2.1.1形態和生化特性本菌為革蘭氏陰性小桿菌，生化特性應符合細菌分類學中本菌的特性。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第3頁!1.2.1.4特異性在含1%的醋酸鉈的普通肉湯中呈均勻渾濁生長，用新鮮普通瓊脂培養物與1\500%吖啶黃溶液做玻片凝集試驗應不出現凝集反應。1.2.1.5安全性用pH7.4-7.6的普通肉湯或蛋白胨水，將培養24-48小時的普通瓊脂斜面培養物洗下并作活菌計數，注射下列動物應符合標準。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第4頁!1.3凍干菌種2-8℃保存期為10年。2、疫苗制造及半成品檢驗2.1生產用菌種的制備2.1.1一級種子繁殖和鑒定凍干種子用普通肉湯稀釋或經普通肉湯后，接種普通瓊脂平板，37℃培養18-20小時，觀察菌落形態，菌落為圓形、邊緣整齊、突起、半透明、略濕潤的光滑型。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第5頁!2.1.2二級種子繁殖取一級種子接種于普通瓊脂或普通肉湯，37℃培養24小時，經純粹檢驗合格后，即可作為生產種子，在2-8℃保存期不超過2日。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第6頁!2.2.2制備方法將新鮮的精牛肉去掉脂肪、筋膜等絞碎，純化水低溫浸泡24小時，100℃煮沸2小時，補足失去的水分，冷卻靜止沉淀24小時，抽取上清液，加入魚蛋白胨、胰蛋白胨、氯化鈉溶化，用氫氧化鈉溶液調整pH值至7.8，煮沸20分鐘，降溫靜止沉淀。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第7頁!3.2進料及培養基滅菌

將配制好的培養基通過管道打入發酵罐，加入消泡劑（豬油），然后對進料管道進行清洗、滅菌，關閉進料閥門，對培養基及所有的進出口、空氣過濾系統進行滅菌，當溫度達到90℃和100℃時，分別經上面空氣進管和下面放料口向罐內通入蒸汽1分鐘左右，罐內116℃保持40分鐘，其他位置121℃保持40分鐘。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第8頁!3.3接種在火焰保護下，連接種子瓶和發酵罐接種口，打開發酵罐出氣閥關小發酵罐進氣閥使罐內壓力接近于0，確認無誤后打開接種閥門，利用正壓空氣將二級種子按1%-2%的接種量接種于普通肉湯中，然后按2.5%加入40%滅菌葡萄糖溶液。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第9頁!4、配苗將事先準備好的凍干保護劑加入收苗瓶中搖勻，保護劑和菌液的比例是1:7，明膠和蔗糖的最終含量分別是1.3%和5%。配苗完成后馬上進行分裝和凍干。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第10頁!仔豬副傷寒是由沙門氏菌屬引起的一種嚴重危害仔豬生產的傳染病。臨診上多表現為敗血癥和腸炎，也可使懷孕母豬發生流產。該病對6月以內仔豬易發，特別是1—4月齡發病較多，病程一般在2天至3周，長的達1個月以上，往往因體質下降并發其它疫病，治療時間長，效果不佳。本病潛伏期為3天～30天。本病是由于仔豬的飼養管理及衛生條件不良促進發生和傳播的。因此，預防本病的根本措施是必須認真貫徹“預防為主”的方針。發病機制仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第11頁!下列因素可促進本病的發生：1、環境污穢、潮濕，圈舍擁擠，糞便堆積通風不良，溫度過低或過高，飼料和飲水供應不良。2、長途運輸中氣候惡劣、疲勞和饑餓、內寄生蟲和病毒感染。3、分娩、手術。4、母豬缺奶。5、新引進豬只未實行隔離檢疫等。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第12頁!1、統一仔豬副傷寒免疫程序，采用仔豬副傷寒疫苗在仔豬斷奶前后各口服免疫一次；改農戶愿防則防為強制普遍預防，改農戶自購疫苗為請獸醫防疫為獸醫人員按時親自到場實施仔豬副傷寒免疫。2、統一免疫方法：仔豬在7日齡左右實施首次免疫，由獸醫人員用冷開水將疫苗稀釋成每頭5亳升量均勻地拌入少量顆粒飼料中，讓仔豬自行采食，確保每頭母豬都達到免疫目的。對個別體質瘦弱，不能采食足量飼料的仔豬，采用20%氫氧化鋁膠溶液將副傷寒疫苗稀釋成2-5倍劑量肌肉注射。3、在母豬分娩前分娩前10~15天，免疫仔豬所用仔豬副傷寒菌苗用量的8~16倍。4、加強飼養管理，消除發病誘因，確保仔豬飼料、飲水及圈舍環境清潔衛生。5、嚴防引進病豬，養豬場（戶）要堅持自繁自養，盡量不從外地外場引進生豬，并實行全進全出的原則。仔豬副傷寒預防措施的探討仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第13頁!免疫失敗的原因1.粗放式飼料管理，豬群健康水平差。2.貫徹獸醫衛生防疫工作不夠。3.獸醫人員技術水平不高。4.防疫注射用具沒徹底消毒。5.疫苗稀釋操作不當或保存時間過長而失效。6.慢性或隱性病豬長期帶毒和排毒。7.母源抗體干擾使免疫失敗。8.藥物使用不當導致免疫失敗。9.飼料中霉菌毒素的影響。10.免疫接種過于頻繁。11.沒有科學地制定免疫程序。12.產品的質量仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第14頁!1.2.1.2培養特性在普通瓊脂平板上，37℃培養18-22小時，菌落為圓形、邊緣整齊、突起、半透明、略濕潤的光滑型。1.2.1.3血清學特性普通瓊脂新鮮培養物用玻片凝集檢查法，對沙門氏菌屬O7因子血清出現凝集反應。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第15頁!小白鼠18-22g（30-35日齡）的小白鼠10只，各皮下注射0.2ml，含活菌數1億，觀察21日，至少應存活9只。家兔體重1.5-2.0kg的家兔5只，各皮下注射1ml，含活菌數100億，觀察21日應存活。仔豬用體重15kg以上的健康易感斷奶仔豬4頭，各靜脈注射1ml，含活菌數30億，觀察1個月應存活。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第16頁!選取中等偏大的菌落5-10個，混合后接種于普通瓊脂斜面若干只，37℃培養24小時，經純粹檢驗合格，并用0.2%吖啶黃溶液做玻片凝集試驗應合格，作為一級種子。在2-8℃保存期不超過1個月，在此期間可以移植1-2次，在培養基上繼代不超過5代。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第17頁!2.2制苗用培養基制備2.2.1材料牛肉要求應采購新鮮的精牛肉，3-5歲，前后腿、胸部，盡量少含脂肪、肌腱、筋膜等。魚蛋白胨1.5%胰蛋白胨0.5%氯化鈉0.5%氫氧化鈉水仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第18頁!3.1條件準備3.1.1根據菌液制備所需物品及設備條件，進行全面準備。3.1.2按使用時間，提前做好對發酵罐空消工作，包括罐體、空氣過濾系統、各個進出料口，確保滅菌無死角。將準備好的各種物品提前移入潔凈工作間待用。3.1.3在工作開始前30～40min，按凈化級別要求調整送風量，達到潔凈級別要求。3.1.4提前一天對發酵罐進行全面滅菌，并保持發酵罐正壓。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第19頁!滅菌結束后馬上夾層通冷水進行降溫并及時補充無菌空氣保持罐內正壓。當溫度降至40℃時，關閉冷水管道停止降溫，通無菌空氣保持罐內正壓，打開自動控溫系統的閥門和開關，溫度控制在37℃。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第20頁!3.4發酵培養接種后先小氣量通入無菌空氣2h，然后逐漸加大通氣量，每2h增加通氣量，培養后期每小時測定一次pH，當pH上升到7.8時加入40%葡萄糖溶液2000ml調整pH，培養18～20小時，當菌數將要達到最高峰時停止培養收獲菌液，將菌液放入滅菌大玻璃瓶中。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第21頁!注意事項：1、培養基是菌苗生產的關鍵，一定要把握好原材料的質量。2、發酵罐滅菌時，應注意千萬不要留有死角，通氣管道壓力應高于罐內壓力，不要造成培養基倒吸入空氣過濾器。3、通氣培養時應認真仔細，10小時后每小時要測定pH值，根據pH值的變化加入適量的葡萄糖溶液。4、注意無菌操作，生產種子應進行純粹檢驗，接種、補料應盡量采用管道連接而不采用開口方式進行操作。5、合理掌握收苗時間，提高凍干菌存率。仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第22頁!沙門氏菌的許多血清型可使人感染，發生食物中毒和敗血癥等，是重要的人獸共患病原體。由于抗菌藥物的廣泛使用（包括作為豬飼料添加劑）等因素的影響，該類細菌耐藥性日趨嚴重，發病率逐漸上升。各種年齡豬只均可感染沙門氏菌，但仔豬較成豬易感，6月齡以下的仔豬（尤其以1—4月齡者）最易感。帶病豬只和帶菌豬只是本病的主要傳染源。病原隨糞便、尿、乳汁以及流產的胎兒、胎衣和羊水排出，污染水源和飼料等，經消化道感染健康豬只。患病豬只與健康豬只交配或用患病豬只的精液人工受精可發生感染。此外，子宮內感染也有可能發生。本病一年四季均可發生，但豬在多雨潮濕季節發病較多。本病一般呈散發性或地方流行性。飼養管理較好的豬群，即使發病，亦多呈散發性；反之，則常為地方流行性。流行特點仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第23頁!1、多年來對生豬堅持春秋普防制度，主要是針對豬瘟、豬肺疫、豬丹毒和口蹄疫，而忽視了仔豬副傷寒的預防。2、仔豬副傷寒的免疫程序和方法不統一，農戶愿防則防，不分仔豬日岑和體況，不注重免疫方法。3、仔豬副傷寒發生后，注重的是治療，而未從預防措施上多研究探索。4、仔豬圈舍環境衛生差，消毒不經常、不徹底。農戶對母豬和仔豬的飼養管理松懈。5、同院鄰居戶所養母豬易相互感染發病，多在低溫潮濕雨季多發。6、基層獸醫站無診斷化驗設備，加之仔豬副傷寒往往并發其它疫病，導致準確診斷和治療不及時。仔豬副傷寒流行原因分析仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第24頁!1、對仔豬推行統一的副傷寒免疫技術，是控制仔豬副傷寒發生的根本措施。2、仔豬副傷寒免疫技術是結合母豬飼養戶仔豬培育的實際而制定的，合理適用，易為獸醫人員掌握和養母豬戶接受。3、我鎮仔豬仍存在零星散發副傷寒的情況，可能與每頭仔豬的體質和采食副傷寒疫苗飼料的多少有關，有待于進一步總結完善該免疫技術。4、仔豬副傷寒在多雨潮濕季節最易發生，加強飼養管理，改善衛生條件，嚴格環境消毒，增強仔豬抵抗力，可有效遏制內源性感染。免疫注意事項仔豬副傷寒活疫苗..共26頁，您現在瀏覽的是第25頁!