免疫測定的室內質量控制衛生部臨床檢驗中心李金明免疫測定的室內質量控制衛生部臨床檢驗中心李金明1免疫測定技術的發展（1）以抗原抗體的結合反應所致的沉淀或凝集現象判斷結果的免疫測定技術，如單雙擴，免疫電泳，玻片凝集，膠乳凝集，紅細胞凝集試驗等；（2）固相標記免疫測定技術，如放射免疫試驗，酶免疫試驗，熒光免疫試驗等；（3）均相免疫測定技術，如酶放大免疫測定技術（EMIT），克隆酶供體免疫測定（CEDIA）等；（4）以單克隆抗體為基礎的免疫測定技術的發展；（5）以基因工程技術為基礎的免疫測定技術發展時期；（6）免疫測定的自動化；（7）生物芯片技術（免疫測定的集成化和微型化）。免疫測定技術的發展（1）以抗原抗體的結合反應所致的沉2臨床實驗室對免疫檢驗技術的要求基本要求是準確和及時,其次是簡便易行;常用的免疫檢驗技術的應用特點:(1)免疫比濁和免疫沉淀:靈敏度低;可用于體內含量較高的Ig、補體、CRP等的測定;(2)標記免疫檢驗技術:放免酶免靈敏度高;用于含量低的激素、病原體抗原抗體測定等;熒光標記技術有特定的應用;金標則為一種很方便的pointofcare檢驗技術。臨床實驗室對免疫檢驗技術的要求基本要求是準確和及時,其次是簡3常用的免疫檢驗方法ELISA應用酶標原理的自動化分析儀應用其它標記物的自動化分析儀RIA常用的免疫檢驗方法ELISA4自動化免疫分析儀的基本原理基本上均為固相免疫測定，固相以磁性微粒最為普遍，其次是聚丙烯微孔板條和試管。均為標記免疫測定，標記物最常用的是酶（堿性磷酸酶，辣根過氧化物酶），其次是元素，發光標記物等；通常采用發光或熒光測定方式（常使用的酶發光或熒光底物如AMPPD（Dioxetanes),魯米諾，4-甲基傘型酮磷酸鹽等；自動化免疫分析儀的基本原理基本上均為固相免疫測定，固相以磁性5酶聯免疫吸附試驗（ELISA）酶聯免疫吸附試驗（ELISA）6影響ELISA測定的因素試劑盒的因素實驗操作影響ELISA測定的因素試劑盒的因素7影響ELISA試劑盒質量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料抗原:純化、合成和基因工程抗原抗體：多抗、單抗和基因工程抗體酶結合物：酶免疫測定的核心成份色原底物：OPD和TMB運輸貯存影響ELISA試劑盒質量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料8酶免疫測定操作中的注意事項標本的收集、運送和保存試劑準備加樣溫育洗板顯色比色結果判斷結果報告及解釋酶免疫測定操作中的注意事項標本的收集、運送和保存9ELISA測定的主要問題HOOKEFFECT結果的判斷ELISA測定的主要問題10一步法的“HOOKEFFECT”問題一步法的“HOOKEFFECT”問題11結果判斷

按照試劑盒確定的Cut-off值判斷結果

ELISA測定的“灰區”（可疑結果的含義）

結果判斷12定性酶免疫測定的CUT-OFF值定性酶免疫測定的CUT-OFF值13臨床免疫檢驗的室內質控問題臨床免疫檢驗室內質控不太受重視的原因有三:一方面可能是質控品來源有限或價格因素；其次是尚沒有意識到；再有就是不知從何做起。使用統一合格的校準品開展室內質控才是解決各實驗室結果可比性差同時也是保證檢驗質量的唯一有效的途徑。室內質控的內涵并不僅僅是使用質控物進行統計學質控，它包括分析前、分析中和分析后的質量控制三個方面。免疫檢驗室內質控既有與臨床生化室內質控共性的一面，也有其特性的地方臨床免疫檢驗的室內質控問題臨床免疫檢驗室內質控不太受重視的原14室內質量控制（IQC）IQC主要包括三個方面：（1）測定前的質量控制；（2）統計學質量控制；（3）質量控制的評價。室內質量控制（IQC）IQC主要包括三個方面：15測定前的質量控制實驗室設施、儀器設備及管理理想的試劑和操作方法人員培訓測定前的質量控制實驗室設施、儀器設備及管理16實驗室設施、儀器設備及管理實驗室設施：溫濕度控制設備、穩壓或不間斷電源儀器設備及管理：酶標儀、洗板機、全自動免疫分析儀、加樣器等應建立技術檔案，并定期維護和校準實驗室設施、儀器設備及管理實驗室設施：溫濕度控制設備、穩壓或17標準操作程序（SOP）的建立標準操作程序（SOP）的建立18統計質控方法定性免疫測定質控物濃度的選擇Levey-Jennings質控圖方法“即刻法”質控方法免疫測定IQC的特殊性質控圖在不同批試劑間的連續統計質控方法定性免疫測定質控物濃度的選擇19定性免疫測定質控物濃度的選擇以HBsAg的ELISA測定為例，先按NCCLsEP5文件評價方法對系列質控血清（含量分別為0.2、0.5、1.0、2.0和5.0ng/ml）的批內和批間測定精密度。根據任一次測定值（S/CO）的最好的線性相關確定回歸直線方程（y=bx+a）。所選擇的質控物濃度=其S/CO值（1-3批間CV%）大于1的質控物，作為室內質控使用。定性免疫測定質控物濃度的選擇以HBsAg的ELISA測定為例20Levey-Jennings質控圖方法也稱Shewhart質控圖，是由美國的Shewhart于1924年首先提出，并用于工業產品的質量控制。后來（二十世紀五十年代初），Levey-Jennings將其引入臨床檢驗的質量控制。經Henry和Segalove的改良，即為目前常用的Levey-Jennings質控圖。Levey-Jennings質控圖方法也稱Shewhart質21質控圖質控圖22Levey-Jennings質控圖

基本的統計學含義穩定條件下，在20個IQC結果中不應有多于1個結果超過2SD（95.5%可信限）限度；在1000個測定結果中超過3SD（99.7%可信限）的結果不多于3個。如以±3s為失控限，假失控的概率為0.3%。Levey-Jennings質控圖

基本的統計學含義穩定條件23“即刻法”質控方法“即刻法”質控方法的實質是一種統計學方法,即Grubs異常值取舍法；只要有3個以上的數據即可決定是否有異常值的存在。“即刻法”質控方法“即刻法”質控方法的實質是一種統計學方法,24免疫測定IQC的特殊性免疫測定有其本身的獨特性，如有些激素或藥物測定常覆蓋較大的工作范圍，且可能有數個“臨床決定性水平”，測定中需進行不同濃度的質控物進行質控測定，而標準差（SD）隨質控物濃度的增大往往也明顯變大，從而使得用不同濃度質控物作圖的間隔比例相差較大，因此有必要對質控圖繪制的一般方法進行修改，可采用相對誤差（測定值與均值的%比差異）(CV)替代絕對誤差SD來作質控圖。免疫測定IQC的特殊性免疫測定有其本身的獨特性，如有些激素或25以CV替代SD作質控圖以CV替代SD作質控圖26質控圖在不同批試劑間的連續質控圖在不同批試劑間的連續27y1=3.550x1+0.226（2001081501批）

y2=3.238x2+0.388（2001040501批）

y3=3.428x3+0.148（2001072501批）

y2/y1=0.960

y3/y1=0.908

y1=3.550x1+0.226（2001081501批）28質控圖在不同批試劑間的連續質控圖在不同批試劑間的連續29室內質量控制的評價IQC是一個集體活動，不光是對實驗室一次測定的有效性的判斷，也反應了實驗室測定趨勢的變化。IQC的失控不能做為處罰的依據，應建設性的找出失控的原因，針對其采取措施加以改進。對IQC應定期進行評價。室內質量控制的評價IQC是一個集體活動，不光是對實驗室一次測30IQC的局限性在免疫測定中IQC可能測不出的誤差

測定前測定中測定后

樣本鑒定不對樣本吸取不對結果記錄錯誤

樣本貯存中變質試劑加入不對此類誤差的發生率在不同的實驗室有所不同，一般要求小于

0.1%，且應均衡地分布于測定前、測定中和測定后的不同階段。

IQC的局限性在免疫測定中IQC可能測不出的誤差31謝謝！謝謝！32免疫測定的室內質量控制衛生部臨床檢驗中心李金明免疫測定的室內質量控制衛生部臨床檢驗中心李金明33免疫測定技術的發展（1）以抗原抗體的結合反應所致的沉淀或凝集現象判斷結果的免疫測定技術，如單雙擴，免疫電泳，玻片凝集，膠乳凝集，紅細胞凝集試驗等；（2）固相標記免疫測定技術，如放射免疫試驗，酶免疫試驗，熒光免疫試驗等；（3）均相免疫測定技術，如酶放大免疫測定技術（EMIT），克隆酶供體免疫測定（CEDIA）等；（4）以單克隆抗體為基礎的免疫測定技術的發展；（5）以基因工程技術為基礎的免疫測定技術發展時期；（6）免疫測定的自動化；（7）生物芯片技術（免疫測定的集成化和微型化）。免疫測定技術的發展（1）以抗原抗體的結合反應所致的沉34臨床實驗室對免疫檢驗技術的要求基本要求是準確和及時,其次是簡便易行;常用的免疫檢驗技術的應用特點:(1)免疫比濁和免疫沉淀:靈敏度低;可用于體內含量較高的Ig、補體、CRP等的測定;(2)標記免疫檢驗技術:放免酶免靈敏度高;用于含量低的激素、病原體抗原抗體測定等;熒光標記技術有特定的應用;金標則為一種很方便的pointofcare檢驗技術。臨床實驗室對免疫檢驗技術的要求基本要求是準確和及時,其次是簡35常用的免疫檢驗方法ELISA應用酶標原理的自動化分析儀應用其它標記物的自動化分析儀RIA常用的免疫檢驗方法ELISA36自動化免疫分析儀的基本原理基本上均為固相免疫測定，固相以磁性微粒最為普遍，其次是聚丙烯微孔板條和試管。均為標記免疫測定，標記物最常用的是酶（堿性磷酸酶，辣根過氧化物酶），其次是元素，發光標記物等；通常采用發光或熒光測定方式（常使用的酶發光或熒光底物如AMPPD（Dioxetanes),魯米諾，4-甲基傘型酮磷酸鹽等；自動化免疫分析儀的基本原理基本上均為固相免疫測定，固相以磁性37酶聯免疫吸附試驗（ELISA）酶聯免疫吸附試驗（ELISA）38影響ELISA測定的因素試劑盒的因素實驗操作影響ELISA測定的因素試劑盒的因素39影響ELISA試劑盒質量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料抗原:純化、合成和基因工程抗原抗體：多抗、單抗和基因工程抗體酶結合物：酶免疫測定的核心成份色原底物：OPD和TMB運輸貯存影響ELISA試劑盒質量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料40酶免疫測定操作中的注意事項標本的收集、運送和保存試劑準備加樣溫育洗板顯色比色結果判斷結果報告及解釋酶免疫測定操作中的注意事項標本的收集、運送和保存41ELISA測定的主要問題HOOKEFFECT結果的判斷ELISA測定的主要問題42一步法的“HOOKEFFECT”問題一步法的“HOOKEFFECT”問題43結果判斷

按照試劑盒確定的Cut-off值判斷結果

ELISA測定的“灰區”（可疑結果的含義）

結果判斷44定性酶免疫測定的CUT-OFF值定性酶免疫測定的CUT-OFF值45臨床免疫檢驗的室內質控問題臨床免疫檢驗室內質控不太受重視的原因有三:一方面可能是質控品來源有限或價格因素；其次是尚沒有意識到；再有就是不知從何做起。使用統一合格的校準品開展室內質控才是解決各實驗室結果可比性差同時也是保證檢驗質量的唯一有效的途徑。室內質控的內涵并不僅僅是使用質控物進行統計學質控，它包括分析前、分析中和分析后的質量控制三個方面。免疫檢驗室內質控既有與臨床生化室內質控共性的一面，也有其特性的地方臨床免疫檢驗的室內質控問題臨床免疫檢驗室內質控不太受重視的原46室內質量控制（IQC）IQC主要包括三個方面：（1）測定前的質量控制；（2）統計學質量控制；（3）質量控制的評價。室內質量控制（IQC）IQC主要包括三個方面：47測定前的質量控制實驗室設施、儀器設備及管理理想的試劑和操作方法人員培訓測定前的質量控制實驗室設施、儀器設備及管理48實驗室設施、儀器設備及管理實驗室設施：溫濕度控制設備、穩壓或不間斷電源儀器設備及管理：酶標儀、洗板機、全自動免疫分析儀、加樣器等應建立技術檔案，并定期維護和校準實驗室設施、儀器設備及管理實驗室設施：溫濕度控制設備、穩壓或49標準操作程序（SOP）的建立標準操作程序（SOP）的建立50統計質控方法定性免疫測定質控物濃度的選擇Levey-Jennings質控圖方法“即刻法”質控方法免疫測定IQC的特殊性質控圖在不同批試劑間的連續統計質控方法定性免疫測定質控物濃度的選擇51定性免疫測定質控物濃度的選擇以HBsAg的ELISA測定為例，先按NCCLsEP5文件評價方法對系列質控血清（含量分別為0.2、0.5、1.0、2.0和5.0ng/ml）的批內和批間測定精密度。根據任一次測定值（S/CO）的最好的線性相關確定回歸直線方程（y=bx+a）。所選擇的質控物濃度=其S/CO值（1-3批間CV%）大于1的質控物，作為室內質控使用。定性免疫測定質控物濃度的選擇以HBsAg的ELISA測定為例52Levey-Jennings質控圖方法也稱Shewhart質控圖，是由美國的Shewhart于1924年首先提出，并用于工業產品的質量控制。后來（二十世紀五十年代初），Levey-Jennings將其引入臨床檢驗的質量控制。經Henry和Segalove的改良，即為目前常用的Levey-Jennings質控圖。Levey-Jennings質控圖方法也稱Shewhart質53質控圖質控圖54Levey-Jennings質控圖

基本的統計學含義穩定條件下，在20個IQC結果中不應有多于1個結果超過2SD（95.5%可信限）限度；在1000個測定結果中超過3SD（99.7%可信限）的結果不多于3個。如以±3s為失控限，假失控的概率為0.3%。Levey-Jennings質控圖

基本的統計學含義穩定條件55“即刻法”質控方法“即刻法”質控方法的實質是一種統計學方法,即Grubs異常值取舍法；只要有3個以上的數據即可決定是否有異常值的存在。“即刻法”質控方法“即刻法”質控方法的實質是一種統計學方法,56免疫測定IQC的特殊性免疫測定有其本身的獨特性，如有些激素或藥物測定常覆蓋較大的工作范圍，且可能有數個“臨床決定性水平”，測定中需進行不同濃度的質控物進行質控測定，而標準差（SD）隨質控